2020年湖南及周邊地區豬偽狂犬病病毒血清學調查及分析

周宇駿，杜雅萍

（湖南中科基因技術有限公司，湖南 長沙 410128）

偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）屬α皰疹病毒亞科（Herpesviridae），可引發偽狂犬病（Pseudorabies, PR）。PRV可感染多種家畜或野生動物，并引起十分嚴重的臨床癥狀，嚴重時可導致死亡。盡管如此，豬（包括家豬、野豬）是PRV唯一的自然宿主，且不同生長階段豬群（肥育豬除外）感染PR后均可出現嚴重的臨床癥狀，該病對繁殖母豬和仔豬危害最大，可導致其出現繁殖障礙和嚴重的神經癥狀、嘔吐和腹瀉等，同時PR可導致發病仔豬出現高死亡率[1]。當前對PR治療無特異性的藥物，對于該病的防控主要依賴于疫苗免疫接種，且當前針對PR的疫苗主要是基因缺失弱毒苗或滅活苗，疫苗的廣泛應用不但有效抑制了該病在我國豬場的流行，甚至還使部分豬場成功凈化了PR[2]。2011年以來，我國越來越多的已免疫接種Bartha-K61疫苗的豬場仍然暴發了PR，且研究人員通過對毒株基因組序列分析發現，該毒株基因組與國內之前流行的傳統毒株（如Ea株）和Bartha株所屬的genotype I型毒株差異較大，因此命名為PRV變異株，且進一步試驗表明變異株較傳統株（如Ea）對小鼠或豬的致病力更強[3-5]。

當前針對PR的疫苗主要是gE基因缺失疫苗，針對gE蛋白開發的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測技術可有效區分偽狂犬病野毒和疫苗毒，同時針對gB蛋白開發的檢測技術則可初步分析豬群產生保護性抗體情況，這為豬場開展PR防控和相應疾病的凈化提供了科學依據[1，6-7]。為初步了解湖南省2020年豬群PR野毒流行及疫苗免疫情況，筆者于2020年1—12月對湖南省不同地區238個豬場送檢的血清樣品分別進行PRV-gE和PRV-gB抗體檢測，其統計數據結果如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2020年1—12月湖南及周邊地區238個豬場共送檢血液樣品7 194份。血液樣品采集并標記后，低溫送至湖南中科基因技術有限公司進行抗體檢測，血液樣品經低速離心后（3 000 r/min，5 min）取上清液即為血清，將其保存于4 ℃，待檢。所有被調查豬場的豬群均已免疫接種PRV基因缺失疫苗（滅活苗或弱毒苗）。

1.2 檢測方法及判定標準

豬偽狂犬病病毒gB和gE抗體檢測試劑盒均購自于美國IDEXX公司，其操作步驟及判定標準均嚴格按照試劑盒說明書進行，同時每次檢測均設置陽性對照和陰性對照。

2 調查結果

2.1 2020年湖南及周邊地區豬偽狂犬病病毒gB和gE抗體檢測結果

研究通過對湖南及周邊地區238個豬場送檢的7 194份血清樣品進行PRV gE和gB抗體檢測，結果發現，雖然被調查的豬場PRV-gB場陽性率達100%，但被調查的238個豬場中有98個豬場存在PRV野毒流行，其場陽性率達41.18%（98/238）；被調查的7 194份血清中有5 937份血清為PRV-gB抗體陽性，平均陽性率為82.53%，但也有9.27%（667/7 194）血清樣品檢測為PRV-gE抗體陽性。此外，有近90%豬場中PRV-gB陽性率超過70%，符合國家制定的標準。

2.2 不同生長階段豬群偽狂犬病病毒gB和gE抗體檢測結果

將被調查血清樣本按照不同生長階段豬群進行分類匯總，結果如表1所示。本試驗采集仔豬、保育豬、肥育豬、繁殖母豬和種公豬血清樣品數分別為3 097份、2 389份、316份、1 115份和277份，其中繁殖母豬和種公豬血清PRV-gB抗體陽性率相對較高，分別為93.09%和95.31%，仔豬和保育豬抗體陽性率分別為79.04%和81.79%，肥育豬gB抗體陽性率最低（73.73%）。就PRV-gE抗體陽性率而言，繁殖母豬和仔豬抗體陽性率較高，分別為11.66%和11.30%，而肥育豬抗體陽性率較低，為5.70%。

表1 不同生長階段豬群偽狂犬病病毒gB和gE抗體檢測結果

2.3 不同季節豬群偽狂犬病病毒gB和gE抗體檢測結果

如表2所示，筆者將采集的血清樣品按照季節進行劃分，結果發現，春季（3～5月）和秋季（9～11月）樣品血清PRV-gB抗體陽性率相對較高，分別為83.75%和83.35%；而夏季（6～8月）和冬季（12月至翌年2月）相對較低，分別為79.47%和78.88%。就PRV-gE抗體陽性率而言，秋季陽性率最低（7.69%），春季、夏季和冬季陽性率差異較小。

表2 不同季節豬群偽狂犬病病毒gB和gE抗體檢測結果

3 討論

得益于PRV-gE基因缺失疫苗（弱毒疫苗或滅活疫苗）的廣泛使用，研究人員研發了檢測PRV-gE和PRV-gB抗體的ELISA試劑盒用于區分PRV野毒感染或疫苗免疫后產生抗體，若血清樣品僅為PRV-gB抗體陽性則為PRV野毒感染陰性，若同時為gB和gE抗體陽性，則為野毒感染陽性[8]。為了解2020年湖南及周邊地區（以湖南省為主）豬偽狂犬病免疫及野毒感染情況，筆者對238個豬場送檢的7 194份血清樣品進行PRV-gB和PRV-gE抗體檢測，結果發現個體PRV-gB抗體陽性率為82.53%（5 937/7 194），且超過90%比例豬場來源樣品抗體陽性率高于70%，符合國家要求的標準；但41.18%（98/238）豬場中存在PRV-gE抗體陽性豬群，個體gE抗體陽性率為9.27%。以上結果說明當前豬場對PRV疫苗免疫效果較為理想，但仍然存在PRV野毒感染情況，且PRV野毒感染場陽性率較高。值得注意的是，湖南省動物疫病控制中心團隊曾于2018年對湖南省規模化豬場偽狂犬病進行血清學調查，結果發現個體PRV-gE抗體陽性率為21.0%[9]，而本研究樣品主要來源于湖南省，這在一定程度上說明湖南省對PRV野毒的防控效果較為理想。這可能與樣品來源和豬場提高了生物安全防控水平等有關。

進一步分析不同生長階段豬群PRV-gB和PRV-gE抗體陽性率差異，筆者發現繁殖母豬和種公豬PRV-gB抗體陽性率較高，肥育豬最低，這可能與豬場送檢PRV-gB抗體檢測的目的有關，對于繁殖母豬和種公豬而言，一般是免疫接種后再檢測豬群PRV-gB抗體陽性率和整齊情況，并根據檢測情況及時補充免疫，而肥育豬一般是免疫接種前檢測豬群PRV-gB抗體水平，以確定免疫的最佳時間段，或者是由于肥育豬的免疫接種十分麻煩，部分獸醫會對豬群“打飛針”，這可能會影響免疫效果。值得注意的是，不同生長階段豬群中種公豬和肥育豬PRV-gE抗體陽性率較低，其中種公豬最低，可能是由于養豬企業提高了疫苗的免疫次數或劑量，而肥育豬則可能是因為豬群接觸PRV野毒幾率較繁殖母豬低，同時又不存在母源抗體；而母豬和仔豬抗體陽性率稍高，則可能是由于繁殖母豬接觸PRV野毒幾率較高，因此進一步導致仔豬血清抗體也相對較高。

進一步分析不同季節豬群PRV-gB和PRV-gE抗體陽性率差異，筆者發現春季和秋季豬群PRV-gB抗體陽性率較高，但夏季和冬季抗體則相對較低，這可能是由于高熱或寒冷季節容易導致豬群免疫力下降，接種疫苗后抗體水平相對較差；不同季節中秋季豬群PRV-gE抗體陽性率最低，因為秋季氣候相對適宜，豬群免疫力相對較高，這在一定程度上也更加有利于PR的防控。總體而言，當前湖南及周邊地區豬群仍然存在PRV野毒感染情況，且對于該病的防控不能單純依賴于疫苗的免疫接種，提高豬群飼養管理水平和豬場生物安全防控也是十分必要的。