厚積薄發破難攻堅 匠心履職勇攀高峰
——訪河北省第二期現代農業產業技術體系蛋肉雞創新團隊蛋雞疫病防控崗崗位專家李佩國

□本刊記者 張麗鳳

河北省是蛋雞養殖大省， 不僅養殖存欄量大，而且養殖品種豐富，既有優質的地方雞種，也有自主培育的高產配套系蛋雞。 然而在推進蛋雞產業健康發展的進程中， 疾病始終是不容忽視的制約因素。2018 年，李佩國教授受聘河北省第二期現代農業產業技術體系蛋肉雞創新團隊蛋雞疫病防控崗崗位專家后， 帶領團隊以護航蛋雞產業高質量發展為核心目標， 通過整合院校、體系以及企業資源，凝聚各種社會力量，以科技創新為抓手，以服務養殖企業為主線，組織開展下基層做調研，挖問題找方案，攻難題推技術，做培訓搞幫扶，用扎實的專業知識賦能疫病防控工作。 五年來，共舉辦蛋雞疫病防控技術培訓12 次，團隊成員講座20 人次，為蛋雞產業培訓技術及管理人員1400 余人， 為30 個蛋雞場開展技術服務，到企業現場進行技術指導100多次，真誠地服務每一家養殖企業，既提升了企業蛋雞養殖水平， 也為河北省蛋雞疾病防控奠定了基石。

科研攻關破難題 護航蛋雞健康養殖

丹心未泯創新愿， 白發猶殘求是輝。 五年來，李佩國帶領團隊積極投身科研攻關工作中，發揚求真務實的精神， 為蛋雞疫病防控工作保駕護航。

一是對種雞場垂直傳播疾病進行系統研究

河北省種禽企業的規模及管理水平存在較大差距，一些垂直傳播疾病時有發生，尤其是地方品種的雞白痢和禽白血病等胚傳疾病的發病率較高，必須采取有效的凈化措施。 李佩國團隊根據河北省種雞場的養殖現狀研究制訂了河北省地方標準 “蛋種雞場禽白血病的凈化技術規程”、“種雞場雞白痢凈化技術規程”， 并在河北省不同地區的試驗站進行推廣。

禽白血病的防控除采取有效凈化外， 還要將生產系統中各環節有機結合起來， 構建科學的防控體系， 其中開發針對該病毒的有效疫苗是避免禽白血病病毒早期感染， 加快禽白血病凈化進程的有效途徑。 李佩國帶領團隊以分離的禽白血病流行亞群ALV-J 為材料，進行了“河北地區ALV-J gp85 原核、真核表達構建及免疫保護力評價， 初步研發出具有一定免疫效果的禽白血病核酸疫苗， 為禽白血病核酸疫苗的開發與應用提供科學依據。

白痢沙門菌為典型胞內寄生菌， 機體清除其感染要同時依賴于細胞免疫和體液免疫，因此減毒弱疫苗白痢沙門菌疫苗是開發的主要方向。 李佩國團隊借鑒醫學上傷寒沙門菌及其他病原菌疫苗開發經驗， 選取白痢沙門菌上重要的毒力相關基因cpxR、htrA 和wzxE 作為研究對象， 利用λ-同源重組技術對白痢沙門菌的cpxR、htrA 和wzxE 等基因進行了敲除， 構建出雞白痢沙門菌cpxR、htrA 和wzxE 等基因缺失菌株疫苗，并對其與細菌抗應激、蛋清存活、LPS 合成及細菌致病力間的密切關系等方面進行生物學特性進行分析， 為開發安全有效的沙門菌疫苗奠定了基礎。

二是對新發病進行系統研究

安卡拉病是由I 亞群血清4 型禽腺病毒引起的一種新型雞傳染病， 容易與其他疾病混合感染，臨床很難確診。 而實驗室診斷大多操作復雜、費時，不便于基層推廣應用。 基于以上原因，李佩國團隊選擇臨床采集的安卡拉陽性血清和實驗室保存的SPF 陰性血清，利用純化的GSThexon 重組蛋白作為包被抗原，通過摸索抗原稀釋度、一抗血清稀釋度、包被條件、酶標二抗稀釋度、避光顯色時間等條件，建立的安卡拉病毒Hexon 蛋白間接ELISA 檢測方法，具有很好的重復性、特異性、敏感性，作為快速診斷安卡拉病毒的重要手段，具有較好的應用價值。

為了更好地對雞安卡拉病進行防控， 李佩國團隊還構建了雞安卡拉病毒Hexon-Penton 串聯重組核酸疫苗，具有很好的免疫效果，為安卡拉病毒亞單位疫苗的應用提供支撐。 同時選取了連翹、魚腥草、板藍根等8 種抗病毒中草藥進行了體內外抗FAdV-4 的研究， 通過CPE 觀察和CCK-8 檢測初步篩選出抗FAdV-4 的有效中草藥，選取3 種不同的作用方式（中草藥對病毒的直接殺傷、中草藥對病毒的吸附阻斷、中草藥對病毒的復制阻斷） 確定了中草藥抗病毒的有效抑制率，研究了中草藥在體外抗病毒的機制。團隊在2019 年制定了河北省地方標準“雞安卡拉病防治技術規程”，并在河北省不同地區的試驗站進行推廣。

三是對蛋雞常發疾病進行研究

針對河北省蛋雞多發的主要疫病雞傳染性支氣管炎，該病傳播速度快、發病率高，影響養禽業的健康發展。 傳染性支氣管炎病毒（IBV）的基因組易發生變異和重組， 導致其基因型和血清型眾多，且交叉保護力弱，不同地區或者同一地區的基因型都可能出現較大差別， 為了解河北省傳染性支氣管炎病毒流行毒株情況， 團隊對不同地區進行臨床樣本采集并檢測， 并分離毒株進行全基因組測序，對IBV 的基因型、同源性進行分析， 結果顯示， 我省IBV 流行毒株與LX4 型的QX 株相似性的最高。團隊還檢測了河北省IBV 流行株的致病性， 并評估了常用商品疫苗H120、QX 和4/91 對我省IBV 流行毒株的保護效果， 為河北省蛋雞養殖企業選擇適合的疫苗提供幫助。

團隊還通過河北地區蛋雞IBV 流行毒株建立了IBV 的ELISA 檢測方法， 可作為快速診斷和免疫檢測IBV 的重要手段， 具有較好的應用價值。

團隊利用河北地區蛋雞IBV 流行毒株研發了滅活疫苗，經測定安全無毒性，穩定性好，免疫攻毒試驗顯示，IBV 滅活疫苗免疫后可產生較高的抗體水平，且對同株產生很好的保護效果，將為河北省蛋雞傳染性支氣管炎的防控提供幫助。

同時建立了細胞病變模型， 以原代雞胚腎（CEK） 細胞為宿主， 通過觀察細胞病變效應（CPE）、細胞計數（CCK-8）計算有效抑制率，再結合實時熒光定量RT-PCR 法檢測IBV 核衣殼蛋白（N）基因的mRNA 相對表達量，三者方法結合起來，根據結果評估藥物體外抗IBV 效果，研究結果表明連翹酯苷A 抗河北QX 型IBV 的效果良好，為開發新型、有效的抗IBV 中藥藥物奠定基礎。

針對河北省蛋雞多發的主要疫病雞大腸桿菌病， 團隊每年都從不同地區進行臨床樣本采集并分離菌株，并進行了系統研究，通過對分離菌株進行血清型、致病力、耐藥性、耐藥基因、毒力基因等檢測，摸清了優勢菌株流行規律，掌握不同地區大腸桿菌的耐藥譜及耐藥變化情況，為不同地區防控雞大腸桿菌病提夠幫助。

同時， 團隊還進行了防治雞大腸桿菌復方中草藥的篩選，通過人工感染動物試驗，篩選出了具有一定防治效果的復方中草藥超微粉，并在一些蛋雞場進行應用， 在一定階段可作為抗生素的替代品，減少抗生素的使用。

雞球蟲病是一種嚴重危害養雞業的主要寄生蟲病，該病分布廣泛，感染率、死亡率高，病愈后雛雞生長長期受阻，產蛋性能下降，給養雞業帶來巨大經濟損失。 防止球蟲病最常用的是藥物防治和活疫苗， 但是兩者都伴隨著一定的風險與局限性。 為此李佩國團隊研發出了雞球蟲新型核酸疫苗。 一是構建了柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）河北株卡介苗活載體疫苗。 二是研發柔嫩艾美耳球蟲AMA-1、SO7 基因疫苗。研究克隆了E.tenella HB 株AMA-1 基因與SO7 基因分別與IL-2 和pPIC9 串聯， 構建了免疫調節型真核表達載體GS115-pPIC9-IL-2-AMA-1、GS115-pPIC9-IL-2-SO7 并進行蛋白表達，用純化后的重組蛋白IL-2-AMA-1 及IL-2-SO7 對進行免疫保護性試驗， 均達到了良好的抗球蟲效果，綜合評價其抗球蟲效果、免疫原性和抗氧化能力， 為柔嫩艾美耳球蟲核酸疫苗的應用提供依據。

除了針對主要疾病進行研究， 在指導蛋雞用藥安全與免疫操作技術規程上， 李佩國團隊也做了深入的分析與研究。 養殖生產中，存在藥物品種、劑量和使用療程的盲目性，造成藥物用量大、防治效果差，污染環境。 也存在免疫程序不科學，疫苗使用呈現“三多一大”現象，致使蛋雞長期處于應激狀態，免疫器官不堪重負，產生免疫抑制或麻痹，導致免疫無應答。 為了有效防治細菌性和支原體疾病，規范免疫程序，保證畜產品安全，團隊組織編寫了蛋雞安全用藥手冊，制定并頒布實施了河北省地方標準 “雞免疫操作技術規程”，并在沿海、冀東等試驗站30 個養雞場推廣應用。

四是建立了蛋雞痛風快速診斷方法

雞痛風病主要是通過臨床表現和病理剖檢變化進行初步診斷，不能對其進行早期診斷，為此， 本研究通過使用雙氯芬酸鈉藥物建立成年蛋雞的痛風病理模型， 確定發生雞痛風時的尿酸臨界值，借助人痛風病快速診斷原理，通過尿酸干化學試驗， 研發出可以快速準確診斷雞痛風病的尿酸干化學試紙條，具有較好的特異性、重復性、敏感性，可在臨床上推廣及應用。

推廣創新成果 助推蛋雞產業發展

五年期間， 李佩國率領團隊在河北省不同地區試驗站的示范場積極開展蛋雞疫病檢測與防控技術的推廣工作。 “任何科技創新成果只有落地實施推廣應用并產生作用， 才能真正展現價值。 ” 李佩國告訴記者，“我們的科研創新成果——種雞場雞白痢和禽白血病的凈化技術、建立的診斷方法、 雞場用藥和免疫操作技術規程都得到了不同程度地推廣應用， 并取得了良好的效果。 ”

據李佩國介紹， 其團隊先后對秦皇島都山金牧種禽科技有限公司、 張家口市綠色田園禽業科技有限公司、 贊皇縣天然農產品開發有限公司、河北大午農牧集團種禽科技有限公司、天凱牧業種禽有限公司、 來源六旺川養殖有限公司、石家莊寶豐種雞場、河北灤平華都食品有限公司種雞場、河北三興家禽育種有限公司、河北華裕家禽育種公司、滄州志華種雞場等11 個種雞場調研， 選擇了6 個示范場開展種雞雞白痢與禽白血病的檢測與凈化技術的推廣， 涉及種雞100 萬套，五年來，對6 個示范場采集蛋清或肛拭子樣本共8862 份，進行ALV-P27 抗原和雞白痢的檢測。 發現國外引進品種海蘭褐和國內自主培育的大午金鳳、大午小金鳳、京白939、農大3 號、北農1 號、農大3 號等品種的雞白痢和禽白血病的檢出率均較低，其中雞白痢的年檢出率為0～0.32%， 禽白血病的年檢出率為0～1.25%， 其中大午家禽育種公司種對雞禽白血病和雞白痢凈化保持較好；而地方品種太行雞和壩上長尾雞的雞白痢和禽白血病的檢出率相對較高，且逐年下降。

建立的禽傳染性支氣管炎和雞安卡拉病的ELISA 檢測方法及禽痛風快速診斷方法在秦皇島、唐山、滄州、石家莊等地區30 個商品蛋雞場推廣應用， 三種方法具有很好的特異性、 重復性、敏感性，提高了疾病診斷水平。

編制的蛋雞安全用藥手冊和雞免疫操作技術規程在秦皇島、唐山、滄州、石家莊等地區30個商品蛋雞場推廣應用， 指導養雞場正確使用藥物，進一步提升了雞場免疫操作的技術水平，提高雞只免疫效果， 對養雞業健康發展起到積極的推動作用。

發揮技術優勢 著力提升產業脫貧實效

脫貧攻堅戰全面勝利后， 做好鞏固拓展脫貧攻堅成果同鄉村振興有效銜接， 是習近平總書記做出的重大決策部署。 為此，團隊成員持續深入青龍縣、淶源縣、南皮縣開展產業技術扶貧工作，通過實地調研指導、電話咨詢、舉辦培訓會、 贈送獸藥等方式， 協調青龍前嶺養殖合作社、秦皇島都山金牧種禽科技有限公司、來源六旺川養殖合作社和滄州市澤豐禽業有限公司解決貧困戶的就業問題， 為貧困戶脫貧提供基礎保障。 另一方面，就當地蛋雞養殖戶，通過建立聯合體，為養殖戶提供優質雞苗、飼料和相關技術，并在雞舍建設上提供方案，大大降低了養殖戶的風險，使養戶達到少投入，多獲利的目的，做到了真正的精準扶貧，直接帶動1000 余貧困戶增收。 此外，李佩國團隊常年為秦皇島、唐山及周邊地區進行疾病檢測與技術服務， 為養雞場提供藥物敏感檢測和禽流感H5、H7、H9 和新城疫抗體效價的監測服務，五年來，共進行藥敏檢測950 次，抗體檢測10500 份，解決了蛋雞養殖企業疫病診斷、免疫、用藥等生產實際問題。

厚積薄發破難攻堅，匠心履職勇攀高峰。 五年來， 李佩國帶領團隊始終立足于蛋雞養殖企業，致力于維護蛋雞產業健康發展，孜孜不倦地奮斗在蛋雞疫病防控路上，初心不悔，矢志不渝……