兩個野生猴頭菌菌株的馴化栽培研究

張 鵬 史 磊 王金賀 劉姿彤 盛春鴿 于海洋 趙 靜 王延鋒

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，黑龍江 牡丹江 157000）

猴頭菌（Hericium erinaceus）又名猴頭菇、刺猬菌和對臉蘑，隸屬于擔(dān)子菌門、多孔菌目、齒菌科、猴頭菌屬[1]，是一種著名的藥食同源大型真菌。其子實體營養(yǎng)豐富，具有養(yǎng)胃、助消化、提高免疫等多種藥用保健功效[2]，受消費者歡迎。黑龍江省一直是我國猴頭菌主產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)量和品質(zhì)位居全國前列[3]。然而近幾年，黑龍江省猴頭菌生產(chǎn)中出現(xiàn)主栽品種單一、菌種抗逆性降低等問題，給產(chǎn)量和品質(zhì)的穩(wěn)定性造成一定不利影響。因此，發(fā)掘利用優(yōu)異猴頭菌種質(zhì)資源對產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。筆者對采集自黑龍江省不同地區(qū)的2個野生猴頭菌菌株進(jìn)行馴化栽培研究，結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2個野生猴頭菌菌株分別采自黑龍江省伊春市五營國家森林公園（E：129°16'56″，N：48°14'6″）和雙鴨山市寶清縣龍頭鎮(zhèn)（E：129°46'30″，N：44°28'36″），采用組織分離方法獲得純種，分別編號為RT27和RT28，子實體形態(tài)如圖1所示。對照菌株‘黑威9910’引自黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，編號為RT10。

圖1 2個野生猴頭菌子實體

1.2 培養(yǎng)配方

母種培養(yǎng)基采用PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g。原種培養(yǎng)基：闊葉樹木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%。栽培種培養(yǎng)料配方：闊葉樹木屑83%，麩皮15%，石膏1%，過磷酸鈣1%。

1.3 母種菌絲生長特性

從母種斜面上切取5×5（mm）大小的菌絲塊轉(zhuǎn)接到直徑90 mm的PDA平板培養(yǎng)基上，置25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，每48 h測量記錄菌絲生長長度，并觀察菌絲形態(tài)特征，待菌絲長滿后計算菌絲生長速率。每個菌株重復(fù)3次，試驗結(jié)果取平均值。

1.4 菌絲拮抗試驗

將3個菌株接種在同一PDA平板培養(yǎng)基上，25 ℃下恒溫培養(yǎng)10～15天，觀察不同菌株的菌絲交接處有無拮抗現(xiàn)象。試驗設(shè)3次重復(fù)，具體方法參考文獻(xiàn)[4]。

1.5 原種和栽培種的制備

（1）原種制備。按前述原種配方備料、拌料，調(diào)節(jié)培養(yǎng)料含水量至60%，拌勻后裝入規(guī)格15×28（cm）的聚丙烯袋，121 ℃高壓滅菌2.5 h，出鍋放涼后接入母種，于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

（2）栽培種制作。按栽培種培養(yǎng)料配方備料、拌料，含水量控制在58%左右，選用規(guī)格17×33（cm）的耐高溫聚乙烯袋裝料，每袋裝干料480 g。料袋裝筐后于121 ℃高壓滅菌3 h，待袋內(nèi)料溫降至30 ℃以下時接入原種，進(jìn)行發(fā)菌培養(yǎng)，控制溫度在23～25 ℃，空氣相對濕度在70%以下。每個菌株制備栽培種200袋。發(fā)菌期觀察記錄菌絲萌發(fā)時間、滿袋時間、菌絲長勢[5]及污染率。

1.6 出菇管理

野生猴頭菌出菇試驗在黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院食用菌科研基地進(jìn)行。將長滿菌絲的菌袋放置7～10天后轉(zhuǎn)移至出菇棚，側(cè)面開一字形口，開口長度約1.5 cm。棚內(nèi)控制溫度在15～22 ℃，空氣相對濕度在80%～90%。每天向地面和四周草簾澆水保濕，保持空氣暢通、通風(fēng)良好，二氧化碳濃度不超過1000 mg/L；同時給予100～200 lx散射光，待子實體生長至孢子彈射前采收。

出菇階段調(diào)查子實體現(xiàn)蕾時間、采收時間、子實體大小、鮮重等主要農(nóng)藝性狀，統(tǒng)計前兩潮菇總產(chǎn)量，計算生物學(xué)效率。每個處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)隨機抽取10袋調(diào)查。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS20.0對子實體大小、產(chǎn)量等指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 母種菌絲生長情況

由試驗結(jié)果可知，在PDA培養(yǎng)基上不同菌株的菌絲顏色、形態(tài)和生長速度等均存在一定差異（圖2和表1）。RT27的菌絲生長速度與對照相比無顯著性差異，菌絲呈灰白色，培養(yǎng)時間超過15天，會產(chǎn)生較多的褐色色素。RT28的菌絲潔白、粗壯，但菌絲生長速度慢，菌落邊緣不規(guī)則。

圖2 3個菌株母種在PDA平板上的菌絲生長情況

表1 3個猴頭菌菌株的母種菌絲生長情況比較

2.2 拮抗試驗結(jié)果

從圖3可以看出，野生菌株RT27、RT28與對照間均有明顯的拮抗線，RT27與RT28之間也存在拮抗反應(yīng)。說明，3個猴頭菌菌株相互間存在遺傳特異性，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

圖3 3個猴頭菌菌株間的菌絲拮抗現(xiàn)象

2.3 栽培種菌絲生長情況

由表2可知，在木屑培養(yǎng)基中，接種后2～3天，幾個菌種相繼萌發(fā)；菌絲滿袋時間RT27和RT28分別比對照提前2天和3天。RT28菌絲長勢較好，表現(xiàn)潔白、濃密、粗壯，培養(yǎng)后期吃料速度快，滿袋時間不到30天。RT27與RT28的雜菌污染率與對照差異不顯著。

表2 3個猴頭菌菌株的栽培種菌絲生長比較

2.4 不同菌株的農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量

幾個猴頭菌菌株的主要農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量表現(xiàn)如表3和圖4。菌株RT28從菌袋開口到現(xiàn)蕾需要10天，從現(xiàn)蕾到第一次采收需要13天；菌株RT27從菌袋開口到現(xiàn)蕾所需時間較長，比對照多11天，從現(xiàn)蕾到采收的時間則多達(dá)18天。從農(nóng)藝性狀看，各菌株子實體顏色潔白、菇形圓整，其中RT28菌刺短、菇體緊實，明顯大于對照，平均單菇鮮重達(dá)227.5 g；RT27的子實體大小和單菇鮮重均小于對照，商品性狀欠佳。產(chǎn)量方面，菌株RT28前兩潮的平均每袋產(chǎn)量合計達(dá)到402.8 g，顯著高于對照，生物學(xué)效率在80%以上；而RT27子實體產(chǎn)量低，生物學(xué)效率僅為74.7%。

圖4 3個猴頭菌菌株子實體形態(tài)

表3 3個猴頭菌菌株的主要農(nóng)藝性狀和子實體產(chǎn)量

3 小結(jié)與討論

本團隊于2019年9月分別從黑龍江省伊春市五營國家森林公園和雙鴨山市寶清縣龍頭鎮(zhèn)采集到2個野生猴頭菌菌株，編號RT27和RT28。通過比較不同菌株的菌絲生長特性、子實體農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量等的試驗，結(jié)果表明，3個菌株相互間均存在遺傳特異性；在木屑基質(zhì)中，菌株RT28菌絲長勢較好，表現(xiàn)濃密、粗壯，子實體較大、刺短、肉質(zhì)比較緊實，產(chǎn)量和生物學(xué)效率顯著高于對照（P＜0.05）。綜上，RT28具有成為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌株的潛力，適合作為良種選育的親本材料。

菌株RT27無論是在PDA還是木屑培養(yǎng)基中，菌絲生長表現(xiàn)均良好，但與對照比，其出菇時間明顯延遲，且子實體產(chǎn)量和生物學(xué)效率較低。說明菌株的菌絲長勢與子實體農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量沒有直接關(guān)系。這與王燦琴等的研究報道基本相符[6]。

此外，野生猴頭菌的栽培性狀表現(xiàn)可能與本身的抗逆性有關(guān)。本試驗根據(jù)牡丹江地區(qū)的自然氣候特點和當(dāng)?shù)睾镱^菌生產(chǎn)習(xí)慣，安排于5月初對菌袋進(jìn)行開口處理，但在出菇管理前期遇到異常天氣，菇棚溫度忽高忽低?？赡苡捎赗T28菌株適應(yīng)性較好，其菇蕾形成受不良環(huán)境的影響較小；而RT27菌株抗逆性差，受環(huán)境因素的影響較大，導(dǎo)致出菇時間明顯延遲。這還有待進(jìn)一步研究。