HPLC-MS/MS法檢測奶粉中酪蛋白磷酸肽的含量

◎ 楊余語，劉 飛，溫林鳳，劉 果，曹 庸

（1.廣州綠萃生物科技有限公司，廣東 廣州 510663；2.華南農業大學 食品學院，廣東省功能食品活性物重點實驗室，廣東省天然活性物工程技術研究中心，廣東 廣州 510642）

天然功能活性肽在促進鈣吸收、改善睡眠、降血壓、改善骨關節和抗菌消炎等方面具有獨特功效，蘊藏著巨大的市場潛力。乳蛋白質由酪蛋白和乳清蛋白組成，酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides，CPP）具有磷酸基團，可作為Ca、Fe、Zn等金屬離子的載體，防止這些金屬離子在小腸中沉淀，從而提高金屬離子的吸收率[1-3]。一般使用具有特異性的蛋白酶水解酪蛋白制備得CPP。維生素D可促進Ca2+吸收，但Ca2+的吸收速率取決于Ca2+的濃度。在非酸性條件下，Ca2+易形成不溶性鹽而造成鈣流失，酪蛋白磷酸肽的C端和N端分別具有一個磷酸絲氨酸殘基，可與Ca2+結合為可溶性復合物，防止鈣沉淀的產生，有效增加鈣在體內的滯留時間。目前，通常采用酶水解法、微生物發酵法和化學合成法制備生物活性肽，使用膜分離、離子交換層析、凝膠過濾層析和高效液相色譜技術進行分離和純化，通過色譜、質譜等方法進行表征，并通過體內和體外試驗對其活性評價和穩定性進行研究[4-6]。對于活性好的肽，可根據活性肽的特點，引入功能性食品、醫療、保健品和化妝品等行業中。目前，CPP已廣泛應用于保健品及嬰幼兒奶粉中，CPP的檢測方法有電泳法、鋇鹽法、高效液相色譜法及液相色譜-質譜聯用法，鋇鹽法適合檢測含量較高的CPP樣品，對微量檢測誤差較大，液相色譜檢測法穩定高效，但部分樣品存在的干擾較大[7-10]。……