Captiva EMR-Lipid小柱凈化-超高效液相色譜串聯質譜法快速測定雞肉中12種獸藥殘留

◎ 許均圖，陳德斌，陳 燕，唐春玲

（廣州華鑫檢測技術有限公司，廣東 廣州 510663）

雞肉含有豐富的蛋白質和維生素等營養物質，同時脂肪和膽固醇含量較低，是人們日常生活中重要的食品。由于農戶在養殖過程中不合理使用和濫用獸藥，并在飼料中違規添加獸藥或不遵守休藥期等原因，使雞肉產品中獸藥殘留超標問題屢見報道。雞肉的質量安全越來越成為人們關注的問題[1]。我國現行國家標準規定了許多類獸藥殘留的檢測方法，但是這些方法很多都是針對同一類獸藥殘留，而且前處理方法較為煩瑣，靈敏度較低。因此有必要建立一種檢出限低且簡單快速同時檢測雞肉中多類別獸藥殘留的方法[2-3]。

高效液相色譜串聯質譜法是一種兼具高效分離和定性定量的新型分析方法，具有高特異性和高靈敏度，被廣泛應用于獸藥殘留、農藥殘留和毒素的分析檢測[4-5]。本研究選取日常檢測中常見的磺胺類、喹諾酮類、氯霉素類和五氯酚等獸藥殘留作為研究對象，通過優化前處理方法和色譜條件，結合Captiva EMRLipid脂質凈化技術，建立了快速同時測定雞肉中磺胺類、喹諾酮類、氯霉素類和五氯酚等12種獸藥殘留的超高效液相色譜串聯質譜分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試劑

甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，MREDA公司；超純水，MILLIPORE超純水機制備；其他試劑均為分析純。

1.1.2 標準品

磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺喹噁啉、諾氟沙星、氧氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星、氯霉素、氟苯尼考和五氯酚，均購自安譜公司。上述標準品用甲醇溶解，配制成100 μg·mL-1的儲備液，保存于-20 ℃冰箱中。用乙腈配制混合標準使用液，其中磺胺類、喹諾酮類濃度為1.0 μg·mL-1，氯霉素類、五氯酚濃度為100 ng·mL-1。

1.1.3 儀器

超高效液相色譜串聯三重四極桿串聯質譜儀（Waters UPLC，Waters公司；TSQ Quantum，賽默飛公司）；超聲波儀（昆山市超聲儀器有限公司）；多管渦旋振蕩器（安譜公司）；氮吹儀（北京八方世紀）；高速冷凍離心機（湖南赫西）；Captiva EMR-Lipid固相萃取柱（600 mg/6 mL，安捷倫公司）。

1.2 樣品前處理

準確稱取（2.00±0.01）g均質好的雞肉樣品，加入1 mL超純水，渦旋分散后，準確加入10 mL 2%甲酸乙腈溶液振蕩5 min，超聲5 min，再加入5 g無水MgSO4、1 g NaCl振蕩1 min，4 ℃下10 000 r·min-1離心5 min。準確移取5 mL上層乙腈溶液至15 mL離心管中，加入1 mL超純水，混勻后過Captiva EMRLipid小柱，加入1 mL 80%乙腈淋洗，擠干并收集所有流出液于5 mL離心管中，50 ℃下氮吹濃縮至0.5 mL，用純水定容至1.0 mL，混勻后過0.22 μm PTFE濾膜，待上機分析。

1.3 色譜質譜條件

色 譜 柱 為Agilent Eclipse Plus C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），柱溫35 ℃。正離子模式下和五氯酚的流動相為0.1%甲酸溶液含5 mmol·L-1甲酸銨-（A）和甲醇（B），流速0.2 mL·min-1。梯度洗脫程序：0～1 min，10% B；1～5 min，10%～95% B；5～7 min，95% B；7.1～10 min，10% B。負離子模式下流動相為甲醇∶水=6+4，流速0.2 mL·min-1。進樣量：2 μL。

電噴霧離子源；鞘氣：35 aux，輔助氣：15 aux，毛細管溫度：350 ℃；電噴霧電壓：正離子4 500 V、負離子3 500 V；掃描模式：選擇反應監測（SRM）；各個化合物經優化后的質譜參數見表1。

表1 獸藥殘留的質譜檢測參數表

2 結果與分析

2.1 前處理條件優化

2.1.1 提取溶劑的選擇

比較了乙腈和甲酸濃度為1%、2%和5%的酸化乙腈作為提取溶劑的提取效率，結果表明甲酸的加入有助于提高磺胺類、喹諾酮類和五氯酚藥物的回收率，其中2%甲酸乙腈的總體回收率最好，因此選擇甲酸濃度為2%的酸化乙腈作為提取溶劑。由于酸化乙腈會使樣品結塊，不利于提取，因此在提取前加入1 mL水分散樣品，并加入無水MgSO4和NaCl，通過鹽析作用減少水溶性雜質的溶出，提高了提取效率。

2.1.2 凈化方法的選擇

雞肉中含有豐富的蛋白質和脂質，如果不經過凈化直接上樣分析，很容易污染離子源，同時較強的基質效應也會降低待分析物的響應，使得定量結果偏低，因此應選擇適當的凈化方式。本研究選擇安捷倫Captiva EMR-Lipid小柱作為凈化手段。EMR小柱無需活化、能凈化樣品蛋白質、脂質等干擾物，操作簡單。

2.2 方法學確認

2.2.1 線性范圍和檢出限

采用空白雞肉樣品處理后，加入標準溶液，配制成濃度為0.1～100.0 ng·mL-1的基質標準溶液，上機測定。12種獸藥殘留的線性關系良好，相關系數均大于0.995。以信噪比法計算各獸藥殘留的方法檢出限，12種獸藥殘留的檢出限見表2。

2.2.2 方法的回收率

采用無上述獸藥殘留檢出的空白雞肉樣品加標，按上述前處理方法進行處理，計算回收率，如表2所示。12種獸藥殘留的檢出限為0.1～2.0 μg·kg-1，回收率為68.1%～105.9%，相對標準偏差為1.9%～11.9%。

表2 檢出限、加標回收率和精密度實驗結果表（n=6）

2.3 實際樣品檢出

應用建立的方法對市售的雞肉樣品進行檢測，共檢出陽性樣品2批，其中恩諾沙星1批1 089 μg·kg-1；五氯酚1批22.0 μg·kg-1。將陽性樣品用國家標準方法復測驗證，結果與本研究方法吻合，說明了本研究方法的準確性。陽性樣品的SRM譜圖見圖1。

圖1 陽性樣品的SRM譜圖

3 結論

本研究建立了使用Captiva EMR-Lipid脂質凈化技術，結合超高效液相色譜串聯質譜法快速測定雞肉中磺胺類、喹諾酮類、氯霉素類和五氯酚等12種獸藥殘留的分析方法，并應用于實際樣品的檢測。結果表明該方法操作簡單、回收率和精密度較好、靈敏度高，適合應用于雞肉中獸藥殘留的快速篩查。