頂空氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量

駱海春 陳高健 姚起艷 張雪梅

北海市食品藥品檢驗所，廣西 北海 536000

珍珠明目滴眼液是由珍珠液、冰片兩味中藥組成，具有清熱瀉火、養肝明目作用，用于肝虛火旺引起的視力疲勞癥和慢性結膜炎，長期使用可以保護視力。該藥為二十世紀80年代由江蘇省衛生廳批準的中藥滴眼液，目前收載于《中藥成方制劑》第17冊[1]，是基本藥物品種[2]。珍珠明目滴眼液生產過程中運用到乙醇作為助溶劑，《中國藥典》2020年版四部通則0861中規定，乙醇為第三類溶劑殘留，不得超過0.5%[3]。雖然目前該滴眼液的檢驗標準中乙醇殘留量并未做要求，鑒于《中國藥典》2020年版相對于前版藥典增加了許多藥品的溶劑殘留項目，可見控制溶劑殘留會成為今后醫藥工業生產上的趨勢。珍珠明目滴眼液作為眼藥制劑，質量標準還需要完善，可將乙醇殘留量作為標準提高項目。文獻資料中，只有氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量的記載[4]，此方法為直接進樣法，直接進樣法容易污染系統和檢測器，而且樣品基質也可能會干擾檢測過程。因此，建立了頂空氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量，本方法采用氣體進樣，可專一性收集樣品中的易揮發性成分，避免了不揮發成分對系統和檢測器的污染以及對檢測的干擾，具有更高靈敏度和分析速度，可以進一步有效控制產品質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀(含FID檢測器)；DANI HSS86.50頂空進樣器；AX205DU電子分析天平。

1.2 試藥 乙醇純度標準物質(批號：GBW06112 15002，中國計量科學研究院，標準值：99.8%)；叔丁醇(批號：0451905，標準值99.9% )，水為娃哈哈純凈水。珍珠明目滴眼液6批次(批號：190403，北海國發海洋生物產業股份有限公司制藥廠；批號：191104，湖北潛江制藥股份有限公司；批號：SC201115，蘇州工業園區天龍制藥有限公司；批號：191024，蘇州太湖美藥業有限公司；批號：20100402，武漢五景藥業有限公司；批號：20080205，武漢五景藥業有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：HP-INNOWAX石英毛細管柱(30 m×0.530 mm,1.00 μm)；載氣為氮氣，流速：4.0 mL/min；分流比2∶1，氫氣 30 mL/min；空氣400 mL/min。檢測器溫度：250 ℃；進樣口溫度：200 ℃；初始溫度70 ℃，保持5 min，升溫至180 ℃，保持8 min，頂空進樣，平衡溫度70 ℃，平衡時間15 min；進樣量1 mL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內標溶液的制備 精密稱取叔丁醇 0.2206 g，置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置100 mL量瓶中，添加水至刻度，混勻，作為內標溶液。

2.2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取乙醇純度標準物質1.0017 g，至100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密量取對照品儲備液2～25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液0.1 mL與內標溶液0.5 mL，置 20 mL 頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 精密稱取珍珠明目滴眼液1.0 g置5 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液0.1 mL與內標溶液 0.5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，作為供試品溶液。

2.3 系統適應性實驗 取對照品溶液、供試品溶液 ，按“2.1”項下的色譜條件分別進行測定，供試品溶液中乙醇與內標溶液中叔丁醇峰完全分開，保留時間分別為2.07和1.89，分離度為4.17，理論塔板數乙醇為39154，叔丁醇為30302。供試品溶液如圖1所示。

圖1 供試品溶液色譜圖

2.4 專屬性試驗 取陰性對照(水)按“2.1”項下的色譜條件進行測定。結果陰性對照(水)對乙醇測定無干擾。如圖2所示。

圖2 陰性對照圖

2.5 線性關系考察 精密量取2.2.2項下的對照品儲備液0.25、0.5、1、2、4、8 mL，分別置 25 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。制成0.1000、0.1999、0.3999,0.7998、1.5995、3.1990 mg/mL的系列對照品溶液。分別精密量取上述系列對照品溶液0.1 mL及內標0.5 mL置20 mL頂空進樣瓶中，密封。按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以乙醇峰面積與叔丁醇的峰面積比值Y為縱坐標，以對照品溶液的濃度X為橫坐標，計算得到回歸方程：Y=1.1164X-0.0176(r=0.9999)。結果表明乙醇在0.1000～3.19990 mg范圍內，對照品與內標峰面積比與檢測濃度呈良好的線性關系。

2.6 檢出限 精密量取濃度為0.1000 mg/mL的對照品溶液逐步稀釋，精密量取稀釋后的對照品溶液0.1 mL和內標溶液0.5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，按“2.1”項下色譜條件進行測定，以基線噪音的3倍計算，得到乙醇的最低檢出量為0.0513 μg。

2.7 精密度實驗 按2.2.3項下方法制備對照品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進行，記錄色譜圖。計算待測組分乙醇峰面積與內標物質叔丁醇面積比值的RSD為0.78 %。實驗結果表明，本方法的穩定性良好。

2.8 重復性實驗 精密稱取同一批珍珠明目滴眼液(批號：190403)按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進行，記錄色譜圖。按內標法計算乙醇含量，其乙醇含量分別為：0.217%，0.214%，0.215%，0.212%，0.216%，0.218%。平均值為0.215%，RSD為0.92%。實驗結果表明，本方法的重復性良好。

2.9 穩定性實驗 精密稱取同一批珍珠明目滴眼液(批號：190403)按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別于0、2、4、8、12、16、20、24 h進樣，記錄色譜圖。計算待測組分乙醇峰面積與內標物質叔丁醇面積比值的RSD為0.85%。實驗結果表明，本方法 24 h 內穩定性良好。

2.10 加樣回收率實驗 精密稱取已知乙醇殘留量的珍珠明目滴眼液(批號：190403)約0.5 g，置5 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”項下乙醇對照品儲備液0.1、0.5、1.0 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。結果平均加樣回收率為98.28 %，RSD為1.11 %。見表1。

表1 乙醇加樣回收率實驗結果

2.11 樣品含量測定 精密稱取6批樣品按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進行，記錄色譜圖。圖譜如圖3所示，測定結果見表2。

圖3 6批樣品圖譜

表2 6批樣品乙醇殘留量

3 討論

3.1 色譜柱的選擇 在研究過程中[5-7]，進行了色譜柱的選擇研究，經過比較FFAP、DB-1、HP-INNOWAX，最終選擇HP-INNOWAX，待測物乙醇與內標叔丁醇可以達到較好的分離度和較高的理論塔板數，且無其他雜質峰干擾。

3.2 內標物質的選擇 本實驗考查了丙酮、異丙醇、正丙醇、二氧六環、N-N二甲基甲酰胺、叔丁醇、乙酸乙酯共7種內標物質[8-9]，結果表明叔丁醇出峰快、無干擾，與乙醇的分離度好，故選擇叔丁醇為內標物質。

3.3 頂空條件的選擇 本實驗采用頂空平衡時間為15 min，比較了60、70、80、90、100 ℃的頂空平衡溫度，結果表明70 ℃時已氣化完全。故選擇70 ℃作為頂空平衡溫度。

3.4 測定結果討論 從結果可以看出6批樣品中乙醇殘留量從0.2 %到0.5 %不等，變動幅度差別較大，雖然大部樣品控制在0.5 %以內，但有兩批樣品超出了《中國藥典》乙醇殘留量0.5 %的限值，可見該滴眼液在生產過程中乙醇量的控制并不嚴格，建議明確乙醇的使用量，增加珍珠明目滴眼液的乙醇殘留量的檢查項，以進一步規范珍珠明目滴眼液的生產，保證藥品的安全有效性。