瑤藥皂布葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張 婷 劉華東* 劉安韜 盧月妹

1.廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530023；2.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

瑤醫(yī)藥是我國民族醫(yī)藥的重要組成部分，具有理論簡潔、簡單實用、療效確切、療法別具一格等特點[1-2]。皂布葉是瑤醫(yī)藥常用藥材之一，廣泛分布于廣西、廣東、云南等西南各省及自治區(qū)，為鼠李科尼泊爾鼠李Rhamnusnapelensis(Wall.)Laws的全株，別名葉青、泡角等，民間用于祛風(fēng)除濕，利水消脹，主治風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、慢性肝炎、肝硬化腹水等病癥[3-4]。在瑤醫(yī)中具有祛風(fēng)除濕、行氣止痛的功效，用于崩閉悶(風(fēng)濕痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、播沖(跌打損傷)和碰腦(骨折)等病癥。皂布葉中主要成分為黃酮和蒽醌等多酚類化合物[5]，劉安韜等[5]對皂布葉的研究表明，皂布葉有良好的抗痛風(fēng)作用。為了更好地開發(fā)和利用其資源，研究建立了瑤藥皂布葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分別對水分、總灰分和浸出物進行了測定，并采用紫外-可見分光光度法測定藥材中總蒽醌的含量，研究結(jié)果為完善皂布葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 TU-1901紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)；賽多利斯分析天平BSA8201(賽多利斯上海貿(mào)易有限公司)；XS204電子天平(梅特勒-托利多國際貿(mào)易上海有限公司)；KQ2200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DFT-100高速粉碎機(大德藥械有限公司)；SX2-8-16型馬弗爐(上海力辰邦西儀器科技有限公司)；HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)； DHG-9055A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海吉眾儀器有限公司)；98-I-b電熱套(天津泰斯特儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 藥品與試劑 1,8-二羥基蒽醌(批號：110829-9702，中國食品藥品檢定研究院)；醋酸鎂、95%乙醇、無水乙醇、甲醇和氯仿等均為分析純。

12批次皂布葉樣品采收于廣西武鳴縣，靖西縣等地，干燥粉碎后備用。詳見表1。

表1 皂布葉樣品信息表

圖1皂布葉植物圖

圖2 皂布葉植物墨線圖(摘自《中國植物志》)

2 方法與結(jié)果

2.1 水分、總灰分和浸出物的測定

2.1.1 測定方法 水分測定照《中國藥典》(2020年版)四部通則0832水分測定法“第二法”測定；總灰分測定照《中國藥典》(2020年版)四部通則2302灰分測定法“總灰分測定法”測定。文獻[4]表明，皂布葉中主要含有蒽醌和黃酮類化合物，極性相對較大，因此用水溶性浸出物和醇(95%乙醇)溶性浸出物來考察皂布葉中所含活性成分含量。照《中國藥典》(2020年版)四部通則2201浸出物測定法中熱浸法測定水溶性浸出物和醇溶性浸出物。

2.1.2 測定結(jié)果 12批樣品的水分、總灰分和浸出物的測定結(jié)果見表2。根據(jù)測定結(jié)果，12批藥材水分?jǐn)M定為不得超過13%，總灰分?jǐn)M為不得超過6.0%，水溶性浸出物擬不低于15.0%，醇溶性浸出物含量擬為不低于12.0%。

2.2 總蒽醌含量測定 皂布葉中主要成分為蒽醌類化合物[4]，采用紫外-可見分光光度法，醋酸鎂-甲醇顯色，測定皂布葉中總蒽醌含量。

2.2.1 蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(0.1037 mg/mL) 精密稱取10.37 mg 1,8-二羥基蒽醌，至100 mL量瓶，加甲醇適量溶解，用甲醇稀釋至刻度。

2.2.2 醋酸鎂-甲醇溶液的配制(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%) 稱取2.50 g醋酸鎂溶于500 mL甲醇中，儲于棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?/p>

表2 皂布葉樣品水分、總灰分及浸出物測定結(jié)果 (n=3，%)

2.2.3 樣品溶液的制備 取0.2 g樣品粉末，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密量取50%甲醇50 mL，超聲(常溫)30 min，放冷，補足重量。過濾，精密量取25 mL濾液置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加 3.0 mol/L 鹽酸15 mL，水浴水解30 min，放冷，用乙酸乙酯10 mL分兩次萃取，合并萃取液蒸干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶，加甲醇至刻度。精密量取1 mL至50 mL量瓶，加4 mL醋酸鎂-甲醇顯色，用甲醇稀釋至刻度。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL置于 50 mL 容量瓶中，分別加入醋酸鎂-甲醇溶液至 4 mL，搖勻顯色，加甲醇至刻度，以試劑空白為參比，在230 nm 處測定吸光度(A)。以1,8-二羥基蒽醌濃度(C)為橫坐標(biāo)(mg/mL)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合回歸方程。如圖3所示。從圖3可知，得醋酸鎂-甲醇法測定蒽醌的回歸方程為：A=0.78C+0.0419，R2=0.9962，在0.002074～0.01037 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程圖

2.2.5 樣品含量測定 對12個批次皂布葉樣品(1～12號)進行干燥粉碎后，采用“2.2.3”進行供試品溶液的配制，照紫外-可見分光光度法，在230 nm波長下測定其吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算其含量。結(jié)果見表3。

由表3可知，皂布葉中總蒽醌的含量最高可達52.44 mg/g，最低為23.08 mg/g，平均含量為 37.64 mg/g；對照藥材采收表，皂布葉藥材在9～10月份含量達到較高值，隨著植物開花結(jié)果，全株藥材的蒽醌物質(zhì)含量有下降趨勢，一般在1～2月降到最低。皂布葉藥材總蒽醌含量擬不低于20.0 mg/g。

表3 12個批次皂布葉樣品總蒽醌含量

3 討論

3.1 研究基礎(chǔ) 作者前期對皂布葉藥材進行了性狀和顯微鑒別研究[7]，研究表明皂布葉藥材莖表面有大量皮孔，葉含色素類物質(zhì)，干燥后呈灰黑色。皂布葉藥材的莖髓薄壁細胞壁有念珠狀增厚并有紋孔，藥材粉末中含有豐富的石細胞和草酸鈣簇晶，為藥材性狀和顯微鑒別提供了依據(jù)，本研究進一步補充了藥材質(zhì)量研究數(shù)據(jù)。

3.2 藥材檢查數(shù)據(jù)的確定 皂布葉樣品之間的水分、總灰分、浸出物和含量測定結(jié)果有一定的差異，與樣品的采收時間有一定的關(guān)系。根據(jù)測定結(jié)果，12批樣品的質(zhì)量較穩(wěn)定，考慮到廣西氣候較為濕潤，故建議將藥材水分?jǐn)M定為不得過13.0%；總灰分不得高于6%，水浸出物和醇浸出物不得低于15%和12%。

3.3 含量測定方法考察 皂布葉中化學(xué)成分以多酚類為主，其中的蒽醌類成分顯示出良好的抗炎，抑菌和抗氧化等[8-11]和抗痛風(fēng)活性[6]。因此，針對藥材中總蒽醌建立測定方法，并對樣品制備方法進行考察，包括超聲提取的溫度，時間和提取溶劑及顯色應(yīng)用等，最終確定提取條件為常溫超聲50%甲醇提取30 min，藥材取樣0.2 g時，用醋酸鎂顯色劑4 mL。12個批次皂布葉藥材的總蒽醌含量在23.08～52.44 mg范圍內(nèi)，建議皂布葉藥材總蒽醌含量應(yīng)不少于20.0 mg/g；

3.4 測定方法存在的問題 采用紫外-可見分光光度法進行含量測定具有較好的專屬性和廣泛的應(yīng)用范圍，在確定吸收波長條件下可以實現(xiàn)快速偵測。但由于光譜法本身的條件限制，測定樣品的濃度過高會影響測定的準(zhǔn)確度，另外會有同吸收峰的物質(zhì)所干擾，影響準(zhǔn)確度。高效液相色譜(HPLC)主要利用物質(zhì)理化性質(zhì)上的差異進行分離和定量測定。HPLC專屬性強，準(zhǔn)確度更高，但在含量測定中，對樣品的組分的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)的明確性要求較高，測定成分更明確，所需時間長。研究主要針對皂布葉藥材中蒽醌類成分進行測定，而不是單體成分，測定方法便捷，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可以作為皂布葉藥材質(zhì)量控制的方法。在以后的研究中，課題組將進一步深入研究該藥材的藥效成分，建立專屬性更強的測定方法。

綜上所述，研究在前期研究基礎(chǔ)上增加了皂布葉藥材的水分、總灰分和浸出物等檢查項，建立了測定藥材總蒽醌含量的方法，完善了皂布葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為該藥材的全面質(zhì)量控制提供依據(jù)。