柏子仁提取液對小鼠生發作用研究

于 陽 崔新剛 崔海洋 張興超 孫雅欣

牡丹江醫學院，黑龍江 牡丹江 157011

人類健康的標志是頭發，但近幾年脫發人群越來越多，而且越來越年輕化。病理性脫發是頭皮正常，頭發過度脫落，無其他特殊癥狀，病情長時間反復發作的現象[1]。脫發嚴重影響人外觀形象，造成心理負擔，甚至妨礙人群的正常社交、學習和工作，目前現代醫學尚未探明發病原因，西醫對脫發的治療一般是刺激毛囊，免疫抑制劑和長期激素治療，治療藥物依賴性強，停藥或減量后復發幾率高，且費用高昂，經濟負擔大[2]。

中醫藥治療脫發由來已久，在《黃帝內經》《本草綱目》《神農本草經》等眾多醫書中都有記載。《黃帝內經》中有“發為血之余，腎其華在發”。中醫認為頭發的生長榮枯，主要與人的精血有關，精血與心肝腎關系密切，心主血脈，肝藏血，腎藏精，精為先天之本，可轉化為血，發為血之余，精血充足，頭發自然烏黑濃密，精血虛衰，頭發也會日漸干枯脫落[3]。人的心情不暢，壓力過大，精血失養也易導致脫發。《本草綱目》中記載柏子仁“養心氣，潤腎燥，安魂定魄，益智寧神；燒瀝，澤頭發”。柏子仁味甘而補，辛而能潤，既養心腎，兼益脾腎。《神農本草經》也把柏子仁(柏實)列為上品。但中藥在治療脫發中多采用復方方劑，對于單一中藥治療脫發效果難以明確。本研究以脫發小鼠模型為研究對象，探討柏子仁的生發作用，為中藥臨床使用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 基本特性 柏子仁是常用的中藥材，為柏科植物側柏的干燥成熟種仁，《神農本草經》列為上品，呈橢圓形或卵形，一般表面黃白色，也有淡黃棕色，長4～7 mm，直徑1.5～3 mm[4-5]。外包膜質內種皮，有深褐色的小點，頂端略尖。質軟，富油。味淡氣微香,性平,歸心、腎、大腸經。可養心安神，潤腸通便，止汗。用于陰血不足，虛煩失眠，心悸怔忡，腸燥便秘，陰虛盜汗。

化學成分:柏子仁化學成分眾多，含脂肪油約14%，含柏木醇、谷甾醇、雙萜類、少量揮發油、維生素A、皂苷和蛋白質等。研究[6]表明柏子仁的多種藥理作用都與化學成分密不可分,其在諸多方面都有較好的療效，臨床應用非常廣泛。徐新剛等[7]采用氣相色譜-質譜聯用( GC-MS)方法對柏子仁油進行定性鑒定和定量分析，鑒定出了柏子仁油中的幾種脂肪酸:其中飽和脂肪酸主要是2.62%硬脂酸，6.58%十六烷酸;不飽和脂肪酸占脂肪酸的87.51%，主要為54.17%亞麻酸，2.62%二十碳三烯酸，22.97%亞油酸，7.75%花生四烯酸。經測定柏子仁生品中總皂苷0.142%，柏子仁中含有的萜類化合物主要為二萜，并以半日花烷型二萜為主，不同產地柏子仁中多糖含量為 4.19%～7.01%。

1.2 實驗動物及造模 選用昆明小鼠50只，體重在18～22 g，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。劑量組分別為：高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性對照組和陰性對照組。把每只小鼠背部毛發剪短，脫毛面積約2 cm×3 cm，再用脫毛劑(15%Na2S)涂于小鼠后背，約1～2 min 后，用溫水清洗，反復1～2次，至小鼠后背光滑[8]。

1.3 實驗藥品及配置 柏子仁購于安國藥源商貿有限公司，水為蒸餾水。柏子仁提取液制備：取柏子仁100 g加八倍水浸泡1 h后，加熱煮沸2 h，過濾，將濾渣加7倍水，加熱煮沸2 h過濾，合并二次濾液加熱濃縮至0.860 g/mL，備用。取米諾地爾用純水配置成0.15 mg/mL的溶液備用。

1.4 給藥方法 將柏子仁提取液，分別稀釋為0.860 g/mL，0.215 g/mL，0.053 g/mL的高、中、低3個劑量濃度。以蒸餾水為陰性對照組，以米諾地爾為陽性對照組，每組小鼠按0.4 mL/20 g劑量灌胃給藥，每日1次，連續24 d。每6天對小鼠背部脫毛區毛發生長評價1次。并每天記錄小鼠皮膚顏色變化(由粉變白時間，維持白色時間)，并在第24天脫頸處死小鼠，將背部脫毛區毛皮剪下，用14 mm打孔器于每鼠的脫毛區相同位置取一圓形皮片，把皮片上所有毛發用手術刀刮下，稱重[9]。在每鼠脫毛區相同位置取最長毛發10根，用游標卡尺測量其長度，以10根毛的均長代表每只鼠的毛均長，并計算出各組小鼠毛發的均長值[10]。

2 結果

2.1 柏子仁提取液對小鼠脫毛區毛發生長作用的影響 第0天各劑量組評分均為0分，無差別，表明各組在實驗過程的評分具有可比性。第6天除中劑量組外，其余各劑量組評分均為0分，表明中劑量組評分要優于其余各組。第12天時低劑量組和陰性對照組的評分仍為0分，遠低于其他三組；高劑量組評分分別與陽性對照組和中劑量組比較均略低，差異均有統計學意義(P<0.05)；陽性對照組評分與中劑量組比較相似，差異無統計學意義(P>0.05)。第18天各劑量組評分相互比較均有差異，且差異均具有統計學意義；陰性對照組評分低于低劑量組，低于高劑量組，低于陽性對照組，低于中劑量組。第24天陰性對照組評分均低于其余各組，且差異具有統計學意義；陽性對照組評分與中劑量組比較相仿，差異無統計學意義(P>0.05)；且二者分別與低劑量組和高劑量組比較，差異均具有統計學意義(P<0.05)；高劑量組評分與低劑量組比較相似，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。各劑量組評分隨時間變化。如圖1所示。

表1 柏子仁提取液對小鼠脫毛區毛發生長作用情況

圖1 各劑量組脫毛區體毛生長評分與時間關系

評分標準：無毛生長為0分；淺毛長滿脫毛區為1分；新生毛長度及密度約為未脫毛區的一半為2分；新生毛長與未脫毛區無差別為3分；出現不規則毛生長的小鼠按面積比率計算。

2.2 柏子仁提取液對小鼠脫毛區皮膚顏色變化的影響 各劑量組的皮膚由粉變白的時間比較：高劑量組與中劑量組比較相似，差異無統計學意義(P>0.05)；且均少于低劑量組、陰性對照組和陽性對照組，差異均具有統計學意義(P<0.05)；低劑量組、陰性對照組和陽性對照組比較差異均具有統計學意義(P<0.05)，其分別是低劑量組時間少于陽性對照組，少于陰性對照組。各劑量組的皮膚維持白色時間比較均有差異，且差異均具有統計學意義(P<0.05)，其分別是陰性對照組時間少于陽性對照組，少于低劑量組，少于高劑量組，少于中劑量組。

表2 柏子仁提取液對小鼠脫毛區皮膚顏色變化的影響

2.3 柏子仁提取液對小鼠脫毛區再生體毛的毛長及重量影響 柏子仁提取液對小鼠脫毛區再生體毛照片對照圖如圖2所示。無論是毛長還是毛重在各劑量組的比較中：陰性對照組與低劑量組比較相似，差異均無統計學意義(P>0.05)；且二者均低于陽性對照組、高劑量組和中劑量組，差異均具有統計學意義(P<0.05)；陽性對照組、高劑量組和中劑量組相互比較相似，差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表3。

圖2 柏子仁提取液對小鼠脫毛區再生體毛照片對照圖

表3 柏子仁提取液對小鼠脫毛區再生體毛的毛長及毛重影響

3 討論

3.1 柏子仁提取液保留了柏子仁生發功效 柏子仁含有油脂、皂苷、氨基酸、萜類等多種化學成分，但經研究[11]表明認為柏子仁發揮主要作用的化學成分為皂苷，皂苷易溶于水，柏子仁中大約含有57.04%的油脂，其中只含有微量的揮發油，所以本實驗使用的提取方法不會破壞柏子仁中的主要成分，最大程度的保留了柏子仁的生發功效。

3.2 柏子仁提取液對于脫發確有療效 精血虛、肝腎不足、心神不寧是脫發形成的原因。“發為血之余”，肝藏血,腎藏精，精血虛,肝腎不足﹐心情不佳，壓力過大導致心血失養，多種綜合不利因素導致頭發失去滋養而脫發[12]。從中醫角度治療脫發以養血活血，補益肝腎，養心安神常常有好的療效。柏子仁味甘而補，辛而能潤，既養心腎，兼益脾腎，柏子仁提取液具有滋補肝腎、烏須生發的功效﹐能滋補肝腎、養血生津、烏須生發。從而能加快毛發生長以達到治療脫發的目的。

小鼠在整個實驗過程中，高中低劑量組體重均增加，精神狀態良好，全部存活，中劑量組小鼠脫毛區的生長評分、顏色改變、毛長及毛重與陰性對照組相比均增加，與陽性對照組相比均相似(參見表1、表2和表3結果)。說明柏子仁實驗用量的安全性高，治療脫發療效確切，為明確柏子仁單一藥物對脫發治療的作用奠定了實驗基礎。

3.3 不同劑量柏子仁提取液生發效果存在差異 藥理實驗結果表明,不同濃度的柏子仁提取液對小鼠脫毛區毛發的再生情況具有明顯的差異。低劑量組的小鼠脫毛區毛長和毛重、開始時的生長評分與陰性對照組相似，實驗后期的生長評分及脫毛區顏色改變與陰性對照組比較略有差別；這些指標又同時明顯差于陽性對照組。這說明柏子仁提取液確實有生發效果，但由于劑量較低而效果不明顯，這與其他學者在相關研究較為相似[2]。

中劑量組的毛發生長評分、脫毛區顏色改變、毛長和毛重與陽性對照組比較相似或略好，同時又明顯優于陰性對照組和低劑量組。尤其是毛發生長評分隨時間變化表現得更為明顯，參見圖1。表明隨著給藥劑量不斷增加，藥物發生作用愈加明顯，對于生發效果不同劑量差異體現的愈加顯著，這也與王玉斐等[10]研究結果較為相似。

高劑量組的毛發生長評分、脫毛區顏色改變、毛長和毛重與陽性對照組比較相似或略有不同；但與中劑量組比較時，相似或略差；同時又優于陰性對照組和低劑量組。其首先表明與低劑量組和陰性對照組比較，隨著給藥劑量不斷增加，藥物發生作用明顯，生發效果有所提升。其次表明與中劑量組比較時，隨著給藥劑量增加，生發效果并沒有得到改善，高劑量使小鼠減慢毛發生長速度，延后進入毛發生長期，縮短生長周期，抑制毛發再生。體現出柏子仁提取液不但具有顯著的生發效果，還具有一定毒性，即在一定條件下能夠略抑制生發。中濃度都能有效促進小鼠體表毛囊的再生或增多﹐但高濃度劑量組小鼠再生毛發生長較對照組緩慢,說明高濃度會影響小鼠體表毛囊正常的生理功能，可能由于高濃度劑量對肝腎有毒性，而頭發的生長榮枯，主要與人的精血有關，精血與心肝腎關系密切，所以高劑量組體現出中毒的抑制作用。因各個劑量組的生發效果，可參見圖2。

綜上，不同劑量的柏子仁提取液對于生發效果有著一定的差異：劑量過低，達不到生發的效果；而劑量過高又會產生一定的抑制作用，使得生發效果略有降低，這與王常明等[13]研究其他中藥的生發結果相仿。因此，對于柏子仁在臨床用藥時，劑量要得到足夠重視。