赤峰市售小麥粉交鏈孢霉毒素污染研究

代永霞 李萌萌 劉清濤

（赤峰市疾病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古赤峰 024000）

交鏈孢霉毒素是由交鏈孢霉產(chǎn)生的一類有毒代謝產(chǎn)物，常污染水果及其制品、谷物及其制品等。目前已知的具有明顯毒性的交鏈孢霉毒素有70多種[1]，交鏈孢酚（AOH）、交鏈孢酚單甲醚（AME）是主要代謝產(chǎn)物，分布最廣，而且產(chǎn)生的毒性有協(xié)同作用，具有遺傳毒性[2]和致突變性[3]。TeA與其他真菌毒素會(huì)產(chǎn)生急性毒性作用，于1979年被列入美國(guó)國(guó)家職業(yè)安全與衛(wèi)生研究所的《有毒化學(xué)物質(zhì)登記冊(cè)》。TeA無誘變性，但能抑制氨基酸聚合，阻止蛋白質(zhì)和DNA的合成，干擾核糖體釋放新的蛋白質(zhì)[4]。TEN具有植物毒性，對(duì)某些物種有針對(duì)性萎黃病[5]，TEN被認(rèn)為是ATP合成終端的能量傳遞抑制劑，能抑制光合磷酸化[6]。

交鏈孢霉毒素的毒性作用已引起業(yè)界關(guān)注，交鏈孢霉毒素對(duì)人食道上皮細(xì)胞的作用機(jī)理已有報(bào)道，是我國(guó)林縣地區(qū)食道癌高發(fā)的潛在原因之一[7]。由于交鏈孢霉能在低溫下生長(zhǎng)，因而也是造成冷藏條件下貯存和運(yùn)輸?shù)氖称犯瘮∽冑|(zhì)的重要原因[8]。食品中交鏈孢霉毒素的污染已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。我國(guó)尚缺乏系統(tǒng)、完整和準(zhǔn)確的各類食品中交鏈孢霉毒素的污染水平資料。獲取各類食品中交鏈孢霉毒素污染水平數(shù)據(jù)，并結(jié)合人類膳食消費(fèi)量資料進(jìn)行我國(guó)居民膳食暴露該類毒素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，是對(duì)未來研究具有促進(jìn)性的課題，也是目前和未來的研究重點(diǎn)。本文對(duì)4種交鏈孢霉毒素在小麥粉中污染進(jìn)行分析，以期加強(qiáng)交鏈孢霉毒素的預(yù)防及監(jiān)測(cè)工作，保障人們的主食安全。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試驗(yàn)儀器。安捷倫液質(zhì)聯(lián)用儀，美國(guó)Organo-mation氮吹儀，杰爾森固相萃取儀,賽默飛高速冷凍離心機(jī)，上海之信儀器有限公司生產(chǎn)的超聲波提取器，梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn)的電子天平。

1.1.2 試驗(yàn)試劑。乙腈（MREDA色譜純），甲醇（TED IA色譜純），無水磷酸二氫鈉（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥），磷酸（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥），碳酸氫銨（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥）；細(xì)交鏈孢菌酮酸（TeA）、交鏈孢酚（AOH）、騰毒素（TEN）、交鏈孢酚單甲醚（AME）同位素內(nèi)標(biāo)液；細(xì)交鏈孢霉菌酮酸-13C2（TeA-13C2）；0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液；樣品提取液（450 mL乙腈和100 mL甲醇加到450 mL 0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液中，混勻）；1.0 mmol/L碳酸氫銨溶液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備及提取。選取赤峰市售小麥粉為試驗(yàn)材料，準(zhǔn)確稱取混勻樣品 5 g，加入100 μL 1.0 μg/mL內(nèi)標(biāo)液，加入25 mL樣品提取液，漩渦混勻30 s，超聲處理20 min，冷卻至室溫，于10 000 r/min、低溫（4℃）條件下離心10 min，準(zhǔn)確吸取上清液5 mL于另一個(gè)50 mL離心管中，加入15 mL磷酸二氫鈉溶液，漩渦混勻，固相萃取柱（SPE）凈化后，以 Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）為分析柱，以0.15 mmol/L碳酸氫銨水溶液-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，以負(fù)離子電噴霧模式電離（ESI-），多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

1.2.2 基質(zhì)加標(biāo)工作曲線的繪制。稱取6份空白樣品，每份5.0 g，按樣品處理步驟提取凈化，洗脫液氮吹至近干，準(zhǔn)確加入混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和同位素內(nèi)標(biāo)工作液（1.0 μg/mL），用10%甲醇溶液配制成基質(zhì)加標(biāo)工作曲線。將基質(zhì)加標(biāo)工作曲線溶液上機(jī)測(cè)定，得到4種交鏈孢霉毒素及同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖和峰面積，以TeA濃度為橫坐標(biāo)，以TeA與TeA-13C2的峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線；分別以AOH、TEN和AME的濃度為橫坐標(biāo)，以AOH、TEN和AME的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制AOH、TEN和AME的工作曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種交鏈孢霉毒素的檢出量

由表1可知，4種交鏈孢霉毒素的檢出量明顯不同，交鏈孢菌酮酸（TeA）檢出量明顯高于其他3種交鏈孢霉毒素。

表1 4種交鏈孢霉毒素檢測(cè)結(jié)果 單位：（μg·kg-1）

2.2 4種交鏈孢霉毒素的檢出率

從表2可以看出，騰毒素（TEN）的檢出率最高，為100%；交鏈孢酚（AOH）和交鏈孢酚單甲醚（AME）的檢出率為96.7%；交鏈孢菌酮酸（TeA）的檢出率為90%。不同監(jiān)測(cè)地區(qū)樣品中同一種交鏈孢霉毒素檢出率也不同：交鏈孢菌酮酸（TeA）在不同地區(qū)檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.005）；交鏈孢酚（AOH）在不同地區(qū)檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.25）；騰毒素（TEN）檢出率均為100%，不同地區(qū)無差異；不同地區(qū)交鏈孢酚單甲醚（AME）檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 4種交鏈孢霉毒素的檢出率 單位：%

3 結(jié)論與討論

共檢測(cè)120份小麥粉樣品，其中TeA檢出率為90%，TEN檢出率為100%，AOH和AME的檢出率均為96.7%。赤峰市售小麥粉中交鏈孢菌酮酸（TeA）、交鏈孢酚（AOH）、騰毒素（TEN）和交鏈孢酚單甲醚（AME）4種交鏈孢霉毒素污染率很高，應(yīng)該引起相關(guān)部門的高度重視。

有研究表明，小麥粉雖然被交鏈孢霉污染了、有產(chǎn)生交鏈孢霉毒素的潛力，但并不一定有交鏈孢霉毒素檢出。因此，從產(chǎn)品分離到交鏈孢霉并不意味著一定可檢測(cè)到毒素[8]。交鏈孢霉毒素的污染水平和穩(wěn)定性受溫度、壓力、濕度、不同食品基質(zhì)的影響，因而可以通過改善貯存、運(yùn)輸條件，改變加工工藝如溫度、壓力、酸度、時(shí)間等減少交鏈孢霉毒素[10]。依托各級(jí)食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)平臺(tái)，進(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)量，在大數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上完善和修訂國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，才能最大限度降低小麥粉中交鏈孢霉毒素污染程度。