楊 瀚,尹開云,楊紹坤,蒙國懿,張曉燦,宋紅坤,郭文娟*
(1.云南醫藥健康職業學院,云南 昆明 650106;2.云南經濟管理學院,云南 昆明 650106;3.云南芳香技術研究院,云南 昆明 650106)
草果(Amomumtsao-ko)屬于姜科(Zingiber-aceae)豆蔻屬的多年生草本植物,又名草果子、草果仁,因其果實形狀小似果而得名草果[1]。在中國,草果的種植歷史悠久,可追溯到宋朝《太平惠民和劑局方》藥籍記載。草果生長于亞熱帶地區的闊葉林生態環境中。在中國廣泛分布在云南省、廣西壯族自治區、貴州省等地[2]。該作物種植3~4年即可結果收獲,可以持續采收10余年,是一種極其重要的經濟作物。草果植物花色大多呈現黃色,生長環境陰濕,在闊葉林中不占用優質良田,是一種可持續發展的綠色經濟作物[3]。
草果中富含多種化學成分[3-4],作為一種傳統中藥材,草果具有調節胃腸功能、降脂減肥、降血糖、抗氧化[5-9]等作用。目前,以草果為原料生產的草果保健茶、草果護膚液、草果調味油等都獲得了相關專利[10-12]。
桉油精為草果中主要的指標成分。本試驗以桉油精含量為指標,采用氣相色譜法測定紅河產草果中桉油精的含量,旨在為紅河產草果質量評價提供依據。
Agilengt 7890B氣相色譜儀,電子天平(賽多利斯SI-224,d=0.1 mg),超聲波清洗器(天津恒奧科技HU-15-005),桉油精標準品(廠家:上海安譜實驗科技股份有限公司,批號:1210022),無水乙醇:(廠家:天津市風船化學試劑科技有限公司,批號:20201106),草果(干果2019年7月9日)購于云南紅河州綠春縣。
云南省紅河產草果樣品由云南經濟管理學院醫學院藥學系中藥師易建文鑒定,標本存放于云南經濟管理學院醫學院一教301中藥材標本室,標本號:YNJG-YX-CG015。
1.2.1 測定條件
Agilent 7890B氣相色譜儀(FID檢測器),色譜柱:HP-5(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細管柱(規格:30 m×0.32 mm×0.25μm),進樣口溫度250℃,檢測器溫度300℃,分流比1∶1,氮氣流速1.5 mL·min-1。程序升溫:初始溫度65℃,以10℃·min-1升溫至150℃,再以100℃·L-1升溫至250℃,保持1 min。
1.2.2 溶液的制備
對照品儲備溶液配制:取桉油精標準品20 mg,置于10 mL的容量瓶中,加無水乙醇定容至刻度,搖勻即得(濃度:2 mg·mL-1)。
對照品上機溶液配制:量取對照品儲備溶液1~10 mL于容量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻即得(濃度:0.2 mg·mL-1)。
標準曲線溶液的配制:分別量取對照品儲備溶液10μL、25μL、100μL、250μL、400μL于1 mL量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻即得,濃度分別為20μg·mL-1、50μg·mL-1、200μg·mL-1、500μg·mL-1、800μg·mL-1。
樣品溶液的制備:取試樣粉碎并全部通過2號篩,其中試樣Ⅰ為粉碎后放置一段時間的樣品,試樣Ⅱ為每次臨用前粉碎的樣品。稱取過2號篩的試樣Ⅱ約3 g,精密稱定,置于100 mL具塞錐形瓶中,精確加入75%乙醇25 mL,密封,浸泡。置于超聲提取器內(提取溫度25℃)提取30 min,靜置15 min,取上清液用0.45μm濾膜過濾,即得。
取配置好的對照品溶液,進樣1μL。以峰面積為縱坐標、進樣量(ng)為橫坐標,得到標準曲線回歸方程Y=0.2049X+7.9136(R2=0.999),進樣量在20~800 ng,線性關系良好。結果見表1。
取對照品上機溶液連續進樣6針,記錄峰面積,結果見表2。

表2 桉油精精密度試驗
參照樣品溶液的配制方法,取試樣Ⅱ制備6份樣品溶液,分別依次進樣1μL。記錄桉油精的保留時間和相應的峰面積,并計算桉油精的含量,結果見表3。

表3 桉油精重復性試驗
取制備好的供試品試液,密封,在4℃冰箱分別擺放0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別進樣1μL。記錄桉油精的保留時間和相應的峰面積,結果見表4。

表4 桉油精穩定性試驗
全程加標,加標量分別為所測樣品含量的100%(平行測定9次),取試樣Ⅱ,參照樣品溶液的配制,樣品含量為0.47%,結果見表5。

表5 桉油精準確度試驗
參照對照品溶液的配制方法,配制對照品溶液1份,用配制對照品的溶劑作為溶劑空白溶液,分別進樣,在對照品主要成分保留時間左右的位置,空白溶液相對應的時間應無雜質干擾峰,結果見圖1、圖2、圖3。

圖1 空白溶液色譜

圖2 對照品溶液色譜

圖3 供試品溶液色譜
本研究建立了紅河產草果桉油精的含量測定方法,對線性范圍、精密度、準確度等各方面進行考察,發現該方法專屬性好、實用性強,結果穩定可靠。