E.tenella胞內(nèi)生殖前期對宿主細(xì)胞的損傷作用

呂曉玲，趙素芬，2，鄭明學(xué)*，王運盛，2，張 黎

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山西 太谷 030801；2.北京市動物園，北京 100044 )

柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella,E.tenella)為已知9種雞球蟲中致病力最強、危害性最大的一種，雞感染后表現(xiàn)出精神萎靡、食欲不振、生長受阻、便血等癥狀[1-3]。E.tenella蟲體進入盲腸黏膜上皮細(xì)胞后迅速發(fā)展成為裂殖體，裂殖體成熟后會向其釋放大量的裂殖子從而損傷盲腸上皮細(xì)胞，使得黏膜上皮細(xì)胞迅速發(fā)生變性、壞死、崩解和脫落[4-5]。目前，E.tenella子孢子在胞內(nèi)生殖前期是否對宿主細(xì)胞有損傷作用尚不明確。雞盲腸上皮細(xì)胞為E.tenella天然宿主細(xì)胞，故本試驗在E.tenella感染原代雞胚盲腸上皮細(xì)胞模型的基礎(chǔ)上，通過觀測細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞骨架、細(xì)胞活性等方法明確E.tenella胞內(nèi)生殖前期對宿主細(xì)胞的損傷作用，該結(jié)果將為探究宿主如何對抗E.tenella感染提供新的思路，并為進一步揭示E.tenella致宿主細(xì)胞損傷的機制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 蟲株與動物15日齡SPF雞胚，購自北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司；柔嫩艾美耳球蟲山西分離強毒株(EtSX01)孢子化卵囊，由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院獸醫(yī)病理實驗室制備并保存。

1.2 主要試劑DMEM培養(yǎng)基購自Hyclone公司；嗜熱菌蛋白酶、β-actin antibody購自Sigma公司；胎牛血清購自TBD公司；beta Tubulin Loading Control Monoclonal Antibody購自Invitrogen公司；免疫組化試劑盒、DAB顯色液購自邁新科技有限公司；乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 原代雞胚盲腸上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)將15日齡SPF雞胚置于無菌工作臺中，取出并充分洗滌盲腸，將其剪成1 mm3左右的組織塊；……