睪酮對水牛卵泡顆粒細胞雌激素合成能力的影響

張 俊，汪浩鑫，陳夢佳，閆 茜，盧嘉卡，余 慶，石德順，陸鳳花

(廣西大學 動物科學技術學院/亞熱帶農業生物資源保護與利用國家重點實驗室，廣西 南寧 530004)

顆粒細胞(granulosa cells，GCs)在卵泡發育和閉鎖過程中起至關重要作用，一方面GCs控卵泡閉鎖[1-8],另一方面GCs分泌雌激素，雌激素能促進卵泡發育和抑制GCs凋亡，卵泡的發育閉鎖與GCs狀態密切相關[9-11]。以卵泡內膜細胞分泌雄激素作為底物，在雌激素合成關鍵酶細胞色素芳香化酶(CYP19A1)作用下，同時在促卵泡素(FSH)調控下，GCs合成雌激素雌二醇促進卵泡生長[12-14]。

卵巢內雄激素主要是雄烯二酮和睪酮，在細胞色素17β羥類固醇脫氫酶(17β-HSD)作用下，雄烯二酮可轉化為睪酮。有研究報道睪酮可通過激活PI3K/AKT/FOXO3信號通路誘導小鼠原始卵泡的激活[15]。有研究指出睪酮能促進牛卵巢初級卵泡向次級卵泡的轉變，且直接通過睪酮受體發揮其調節作用[16]。也有研究表明睪酮可直接通過其受體發揮作用，通過提高間隙連接蛋白CX37表達促進小鼠卵巢發育[17]。但睪酮對水牛GCs雌激素合成的影響，目前尚未見有報道。本研究通過在水牛GCs培養液中添加睪酮，探討睪酮對水牛GCs雌激素合成相關基因表達和雌二醇分泌水平的影響，進而研究睪酮對水牛GCs雌激素合成能力的影響，以期從雌激素合成角度為進一步研究水牛卵泡發育雌激素分泌機理奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及配制睪酮(testosterone，Tes)購自Solarbio公司；DMEM和血清(FBS)購自Gibco公司；其他試劑無特別說明均購自Sigma公司。細胞培養液：DMEM+10%FBS+60 mg/L青霉素+100 mg/L鏈霉素，并用0.22 μm微孔濾器過濾。……