犬細小病毒、犬腺病毒Ⅰ型和犬腺病毒Ⅱ型三聯PCR診斷方法的建立

于永樂，王吉貴，蘇 俊，楊雙雙，劉 瑩，李沛然，李兆達，劉維全*

(1．青島農業大學 動物醫學院，山東 青島 266109；2.中國農業大學 生物學院 農業生物技術國家重點實驗室，北京 100193)

犬細小病毒病是由犬細小病毒(canine parvovirus，CPV)引起的一種急性、高度接觸性病毒性的傳染病，臨床上以出血性腸炎和化膿性心肌炎為特征[1]。CPV最早于1978年從患出血性腸炎的犬中被分離得到，是從臨床病犬中分離的第2種細小病毒(canine parvovirus type 2，CPV-2)，目前普遍認為CPV-2是貓細小病毒(feline parvovirus，FPV)的遺傳變種[2-3]。新型CPV-2變異毒株CPV-2a和CPV-2b毒株已成為優勢毒株，在我國廣泛流行。近年來，CPV-2c逐漸被分離得到，而且其感染宿主范圍不斷擴大，急需開展廣泛的流行病學調查[4-6]。

犬腺病毒(canine adenovirus，CAV)依據其血凝結果和中和試驗等差異，可劃分為CAV-Ⅰ和 CAV-Ⅱ 2個常見亞型，其中CAV-Ⅰ感染常導致犬傳染性肝炎(ICH)的發生，臨床上以神經系統癥狀、黃疸、壞死性肝炎、彌散性血管內凝血和血管炎為主要表現，還會導致非化膿性腦炎和腎小球腎炎出現[7-9]；CAV-Ⅱ可引起傳染性喉氣管炎和腸炎，感染了CAV-Ⅱ的犬通常表現出持續的高燒、咳嗽，并伴隨有其他臨床表現，如扁桃體炎、喉氣管炎、肺炎、嘔吐和腹瀉，是引起犬病毒性腸炎的主要病原體之一[10-11]。

目前CPV、CAV-Ⅰ和 CAV-Ⅱ在臨床上混合感染嚴重，單靠常規的臨床和實驗室診斷技術難以快速、準確的作出鑒別診斷，急需要建立新的快速、簡便、特異的診斷技術，以提供臨床或實驗室使用。對于上述3種病毒的單項PCR檢測方法已分別被成功建立且應用，但二聯和三聯PCR檢測方法由于反應組分更加復雜，反應體系優化難度增大，一直難以建立和良好應用。……