4′-氯地西泮和二氯西泮的大鼠肝微粒體體外代謝研究

李 樂，趙君博，嚴 慧，鄧虹霄，范先煜，劉萬卉，向 平

(1.煙臺大學藥學院，山東 煙臺 264005；2.司法鑒定科學研究院，上海市法醫學重點實驗室，上海市司法鑒定專業技術服務平臺，上海 200063)

圖1 二氯西泮(a)和4′-氯地西泮(b)的結構式Fig.1 Chemical structures of diclazepam (a) and 4′-chlorodiazepam (b)

肝微粒體體外溫孵法可以較好地模擬人體內的代謝過程，肝臟血流量豐富而且含有大部分代謝酶，其中細胞色素P450(CytochromeP450, CYP450)酶是藥物Ⅰ相代謝的重要酶系，在生物轉化過程中發揮著至關重要的作用[13]。藥物代謝可分為2類：Ⅰ相(氧化、還原和水解)和Ⅱ相(共軛)。該模型已經在醫藥學領域內廣泛應用，具有簡便、代謝過程快、重現性好、易大量操作等優勢，在法庭科學領域對新型毒品代謝物的研究方面具有良好的應用前景。目前，美國國家科學技術研究院(National Institute of Standard and Technology, NIST)GC-MS質譜庫(2017版)中缺乏二氯西泮的信息，關于這2種化合物代謝物的詳細信息更是鮮有報道[14-15]。

本工作擬采用液相色譜-Q-Exactive組合型四極桿Orbitrap質譜(LC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技術分離并檢測4′-氯地西泮和二氯西泮在體外肝微粒體孵育體系中的代謝產物，結合二級質譜(MS/MS)鑒定代謝產物的結構，并推測其代謝途徑，旨為建立生物樣品中該類物質的檢驗方法提供依據。

1 實驗部分

1.1 儀器與裝置

Thermo Fisher Ultimate 3000液相色譜儀，配備LC-Q-Exactive Orbitrap MS：美國Thermo Fisher公司產品，配有電噴霧離子源(HESI)及Xcalibur數據處理系統；DK-S22電熱恒溫水浴鍋：上海精宏試驗設備有限公司產品；Minspin高速離心機：德國Eppendorf公司產品；XW-80A渦旋混合器：上海醫大儀器有限公司產品；Milli-Q Synthesis超純水純化系統：美國Millipore公司產品。

1.2 材料與試劑

二氯西泮、4′-氯地西泮: 美國Cerilliant公司產品；……