苗藥地瓜藤的理化鑒別及其總皂苷含量測定

徐 鋒 吳 潔 陳 滕 張 梅 黃旭龍 吳紅梅

貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025

苗藥是指在苗嶺山脈、烏蒙山脈、武陵山脈、鄂西山脈及大廟山脈的苗族聚居地種植、生長的中草藥[1]。苗藥與中藥的藥性、藥物分類等都有較大的區別，如苗藥的藥性體現在“五經”“五性”“熱藥”“冷藥”上[2]，而中藥的藥性則體現在“四氣五味”“升降浮沉”“歸經”“毒性”等方面。苗藥地瓜藤為桑科植物地瓜榕(FicustikouaBur.)的莖、葉，其味苦，性寒，為苗族人民常用藥材，具有清熱利濕、活血通絡、解毒消腫的功效，主治肺熱咳嗽，痢疾，水腫，黃疸，風濕疼痛等[3]。研究[4-8]表明地瓜藤具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理活性，具有良好的開發應用價值。而關于地瓜藤的化學研究報道相對較少，分離得到的地瓜藤成分主要為三萜皂苷類、黃酮類、甾體類、香豆素類和有機酸類等[9]。但地瓜藤的整體化學組成和皂苷含量情況尚未見報道，不利于民族藥地瓜藤的進一步開發與應用。鑒于此，研究鑒定了地瓜藤的化學組成，并對不同產地地瓜藤藥材中的總皂苷進行了測定與評價。

1 儀器與材料

UV-6100S紫外-可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)，HH-4恒溫水浴鍋(上海力辰邦西儀器科技公司)，FA1004B電子天平(上海市安亭電子儀器廠)，800Y粉碎機(永康市鉑歐五金制品有限公司)，DZF-O真空干燥箱(上海賀德實驗設備有限公司)。

齊墩果酸(批號：H04J9Z62784，上海源葉生物有限公司)，地瓜藤藥材經貴州中醫藥大學生藥實驗室王祥培教授鑒定為桑科植物地瓜藤(FicustikouaBur．)的干燥莖、葉，來源見表1。其余試劑均為分析純。

表1 樣品來源信息表

2 方法與結果

2.1 地瓜藤的理化鑒別 稱取地瓜藤藥材粉末10 g，置于250 mL錐形瓶中，加水100 mL，常溫下浸漬 24 h，濾過。剩余藥渣再加水30～40 mL，在60 ℃水浴上加熱1 h，濾過，取續濾液作糖、蒽醌、香豆素及內酯、黃酮、鞣質、生物堿、皂苷和強心苷類的鑒別研究，以蒸餾水作空白對照。結果表明地瓜藤中含有糖、香豆素、黃酮、皂苷和強心苷類成分(表2)。

表2 化學成分定性檢識結果

2.2 地瓜藤總皂苷的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對照品0.1002 g，置容量瓶中加甲醇定容至 50 mL，即得濃度為2.004 mg/mL的齊墩果酸對照品溶液。

2.2.2 地瓜藤供試品溶液的制備 精密稱取地瓜藤粉末適量，用95%甲醇回流提取90 min，提取3次，提取完成后合并濾液，水浴揮干，然后甲醇定容至刻度，即得地瓜藤供試品溶液。

2.2.3 波長的選擇 制備好的齊墩果酸對照品溶液和地瓜藤供試品溶液，在紫外-可見分光光度計上進行掃描，發現在514 nm處有最大吸收波長，故選擇514 nm為本實驗的測定波長。

2.2.4 線性關系 用0.1 mL的移液管精密移取齊墩果酸對照品溶液0.0350、0.0450、0.0550、0.0650、0.0750和0.0850 mL分別置于5 mL容量瓶中，精密加入香草醛-冰醋酸(25 mg香草醛加冰醋酸定容至5 mL，即得)0.2 mL，然后加高氯酸0.8 mL，混勻，置60℃水浴加熱15 min，立即用水冷卻5 min，加入4 mL的冰醋酸，搖勻，靜置5 min后，在514 nm處測定吸光度，以齊墩果酸的濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標計算線性回歸方程和相關系數。結果如圖1所示。

圖1 齊墩果酸的標準曲線圖

2.2.5 精密度考察 精密吸取同一濃度齊墩果酸對照品溶液，連續測量6次，計算其相對標準偏差(RSD)。平均吸光度為0.5011，RSD值為0.11%<2.00%，表明方法的精密度良好。

2.2.6 重復性考察 取同一批次的樣品6份，分別精密稱定，提取制備，然后對這6批樣品進行平行試驗，測其吸光度。其RSD值為2.20%<3.00%，表明方法的重復性良好。

2.2.7 加樣回收實驗 取同一批次的地瓜藤粉末適量，加入齊墩果酸對照品溶液，然后進行提取、制備和計算后，根據回收率= (A-C)/B×100%(A為加入對照品后測得的量，B為加入對照品的量，C為供試品中所含的量)，計算其回收率。結果見表3。

表3 加樣回收率實驗的結果 (n=6)

2.2.8 樣品含量測定 分別精密稱取不同批次干燥至恒重的地瓜藤粉末適量，按確定的提取和顯色方法測量，并根據標準曲線的回歸方程計算，以地瓜藤干燥品計算各批次藥材中總皂苷的含量，結果見表4。不同產地的地瓜藤總皂苷的含量差異較大，這可能與其產地的氣候、土壤和光照等因素有關。

表4 不同產地地瓜藤皂苷含量的測定結果

3 討論

民族藥地瓜藤的理化鑒別表明地瓜藤含有糖類、香豆素類、黃酮類、皂苷類和強心苷類成分，但是目前的報道主要集中于三萜皂苷類、黃酮類、甾體類、香豆素類和有機酸類成分，本次的鑒別研究結果可為苗藥地瓜藤的化學研究提供一定的參考。現代研究[10]發現中藥中總皂苷具有較好的降血脂、降血壓、抗炎和抗氧化等藥理作用，提示地瓜藤總皂苷可能為其主要的藥效物質基礎。

地瓜藤總皂苷含量測定的研究中，本文分別考察了提取方式、時間、次數、溶劑和溶劑濃度等。對于提取方式的考察(超聲、回流)，發現回流提取效果好于超聲提取；考察提取時間發現，90 min 的提取效果好于60 min，能保證地瓜藤皂苷成分提取完全；對于提取次數，考察了提取1次、2次、3次和4次的效果，發現提取3次已經將藥材中皂苷提取完全；對于提取溶劑和溶劑濃度，考察了乙醇和甲醇的提取效果及溶劑不同濃度(30%、50%、70%和95%)的提取效果，發現95%甲醇的提取效果較好。

實驗利用香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法對不同產地地瓜藤中總皂苷的含量進行測定。為了能夠保證實驗的靈敏度，所用的顯色劑必須要現配現用，且必須要嚴格保證加熱的溫度與顯色時間。在測定過程中，顯色后的供試品溶液穩定性良好，能夠滿足實驗測試需要。不同產地地瓜藤的提取制備以及含量測定要保持一致，防止實驗時產生過失誤差而導致實驗數據發生變化。依據地瓜藤中總皂苷的測定結果可知，在所測的11個不同產地地瓜藤的總皂苷含量相差較大，其中含量最高的是重慶市永川區陳食鎮雙河村為38.02 mg/g，含量最低的是重慶市永川區朱龍花村為11.27 mg/g。地瓜藤的總皂苷含量可能與其生境相關，也提示地瓜藤藥材的質量差異較大，需要引起重視，該結果也與課題組前期研究和文獻報道結論相符[11-12]。

苗藥具有應用鮮品的特色，故貴州省地方標準收載地瓜藤藥材為其新鮮或干燥地上部分[13]。鮮品和干品所含成分是否存在較大差異，尚未得到解答。此外，本研究所建立的地瓜藤總皂苷含量測定方法是否適用于地瓜藤鮮品，仍需進一步研究。在實驗過程中發現地瓜藤藥材容易霉變，有報道[14]豬飼喂霉爛地瓜藤會引起中毒。因此，質量控制是資源豐富的地瓜藤開發與應用的關鍵環節，具有重要的現實意義。