胃癌組織中再生基因、轉錄輔助因子退變樣蛋白表達與淋巴結轉移的相關性

練火軍 魏 穎 楊 靜

1.江西省上饒市人民醫院消化內科，江西上饒 334000；2.江西省上饒市人民醫院病理科，江西上饒 334000

胃癌是常見惡性腫瘤之一，發病率與病死率均居高不下，特別是在東亞發展中國家其發病率攀升趨勢明顯，現階段胃癌已經成為全球重要衛生問題[1]。該病起病隱匿，患病初期，因個體重視度不高，導致疾病診出時，往往已處于中晚期，且存在合并轉移、侵襲的可能，治療欠及時，患者預后往往不達預期[2]。轉移與侵襲是導致患者不良預后的主要原因。隨著醫學領域對胃癌疾病進展分子水平的不斷深入探索，發現諸多蛋白如轉錄輔助因子退變樣蛋白（vestigial-like family member 4，VGLL4） 及促生長因子如再生基因（regeneration gene 1α，REG1α）在胃癌的發生、進展過程中有著舉足輕重的地位[3]。本研究旨在通過觀察胃癌組織中REG1α、VGLL4 表達及淋巴結轉移情況，分析胃癌組織中REG1α、VGLL4 表達與淋巴結轉移之間的相關性，以指導臨床治療，旨在改善患者預后。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年10月至2020年10月上饒市人民醫院收治的82 例胃癌患者作為研究對象，根據患者是否合并淋巴結轉移分為轉移組（55 例）與未轉移組（27 例）。轉移組中，男30 例，女25 例；年齡34～82 歲，平均（60.65±9.46）歲；賁門腫瘤34 例；非賁門腫瘤21 例；分化程度[5]：低分化38 例，中高分化17例；淋巴結轉移41 例；臨床分期[6]：Ⅰ～Ⅱ期26 例，Ⅲ～Ⅳ期29 例。未轉移組中，男17 例，女10 例；年齡33～82 歲，平均（59.45±8.52）歲；賁門腫瘤18 例，非賁門腫瘤9 例；分化程度：低分化19 例，中高分化8 例；淋巴結轉移20 例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期12 例，Ⅲ～Ⅳ期15 例。兩組的一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。納入標準：均符合胃癌相關診斷標準[4]；臨床各方面無丟失和缺損；在本院行胃癌根治術者；未合并其他臟器嚴重疾病。排除標準：合并免疫、血液系統異障礙者；合并神經功能異常者；合并胃部分切除術病史者；凝血功能差。

1.2 方法

主要試劑：鼠抗人REG1α 單克隆抗體，購自美國Neomarkers 公司；兔抗人VGLL4 單克隆抗體，購自武漢博士德生物技術有限公司。鏈酶菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（streptomyces avidin peroxidase linkage，SP）試劑盒、胰蛋白酶及二氨基聯苯氨酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新公司。標本準備：各組織標本均脫水，經10%甲醛固定，二甲苯透明；常規石蠟包埋，5 μm 連續厚切片。然后根據SP 免疫組化染色法對REG1α、VGLL4 蛋白進行檢測，檢測過程嚴格按照說明進行。一抗陰性對照使用磷酸鹽緩沖液進行代替。

1.3 觀察指標及評價標準

比較兩組REG1α、VGLL4 陽性表達率，并分析上述蛋白表達與淋巴結轉移的相關性。REG1α、VGLL4表達結果判斷[7]：根據染色強度、陽性細胞百分比判定。①染色強度：陽性標準為在細胞核或細胞漿內出血棕黃色或褐色顆粒。無色記0 分，灰黃色記1 分，金黃色記2 分，棕褐色記3 分。②陽性細胞率計算：從每張切片中隨機選取5 個高倍視野并計算、觀察陽性細胞數，陽性細胞率=陽性細胞數/觀察細胞數×100%。0 分：無陽性細胞，1 分：陽性細胞<10%，2 分：陽性細胞10%～50%，3 分：陽性細胞＞50%～75%，4 分：陽性細胞>75%。總積分：上述2 項評分的乘積。陽性：總積分>4 分。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson 相關性分析對REG1、VGLL4 與淋巴結轉移的相關性進行分析，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組REG1α、VGLL4 表達情況的比較

轉移組REG1α 陽性表達率高于未轉移組，VGLL4 陽性表達率低于未轉移組，差異有統計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組REG1α、VGLL4 表達情況的比較[n（%）]

2.2 REG1α、VGLL4 與淋巴結轉移的相關性

Pearson相關性分析結果顯示，REG1α 表達與胃癌淋巴結轉移呈正相關，VGLL4 表達與胃癌淋巴結轉移呈負相關（P＜0.05）（表2）。

表2 REG1α、VGLL4 與淋巴結轉移的相關性

3 討論

胃癌是人類第二位常見的惡性腫瘤，其發病率僅次于肺癌，70%以上的胃癌患者確診時已是中晚期，預后較差[8]。胃癌主要是遺傳、環境、社會等多種因素共同作用的結果，而轉移與侵襲是導致患者不良預后的主要原因。胃癌淋巴結轉移過程是一個多因素、多步驟作用的結果，諸多研究考慮在此過程中，是否可通過調控某種分子的表達，來延緩或者阻斷淋巴癌轉移，繼而控制病情進展，為治療爭取時間窗口，以改善患者預后[9-10]。

REG1α 是新發現的生長因子，主要存在并集體于胃黏膜中，正常情況下表達低，只有在胃黏膜遭受各種理化因子損害時表達，具有修復黏膜的作用[11]。周群燕等[12]發現REG1α 的表達在正常胃黏膜、萎縮胃黏膜及胃癌組織中出現進行性加重現象，表明REG1α 極大可能在癌變過程中發揮舉足輕重的作用，但具體機制尚不清楚。國外報道指出，REG1α 在低分化胃癌中呈高表達，而高表達REG1α 者預后較差[13]。但目前有關在胃癌組織中上調的機制尚未明確，但認為可能與胃泌素、白細胞介素-6、淋巴結轉移等有關[14]。VGLL4 是新近發現的抑癌基因，諸多研究顯示，VGLL4 在多種信號通路中發揮重要作用[15-17]。且VGLL4 可通過特殊通路競爭性阻斷某種信號通路，繼而在細胞增殖、分化、轉移及上皮-間質轉化等方面產生作用，最終達到控制腫瘤生長的目的。韓新影等[18]指出，VGLL4 在抑制胃癌疾病進展中具有重要作用。本研究轉移組REG1α 陽性表達率高于未轉移組，VGLL4 陽性表達率低于未轉移組，差異有統計學意義（P＜0.05）；Pearson 相關分析結果顯示，REG1α 表達與胃癌淋巴結轉移呈正相關，VGLL4 表達與胃癌淋巴結轉移呈負相關（P＜0.05），提示胃癌組織中REG1α 表達增高、VGLL4 表達下降可能提示胃癌發生轉移。然而本研究樣本量偏少，實驗結果可能存在偏倚，后期有待進一步擴大樣本深入研究。

綜上所述，REG1α、VGLL4 可作為評估胃癌患者是否發生淋巴結轉移的有效指標，且其表達情況與胃癌淋巴結轉移存在顯著相關性。