p16/ Ki67 雙染檢測在分流宮頸LSIL/ HSIL及預測LSIL 轉歸中的臨床應用價值

張 娟

山東省淄博市婦幼保健院婦科，山東淄博 255000

宮頸癌是臨床上較為常見的一種婦科惡性腫瘤，具有較高的發病率及致死率，以浙江省2010—2014年數據為例，發病率占全部癌癥發病率2.81%，居各部位癌癥發病的第10 位，死亡發病比例為0.18∶1，嚴重威脅到患者的生命安全[1]。在宮頸癌發生前，患者宮頸組織會經歷一系列病變過程，包括低度鱗狀上皮內病變（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）與高度鱗狀上皮內病變（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL），及早確診并選擇合理的治療方案可有效降低治療難度，提升治療效果，因此，在診斷時采用有效的檢測方案具有重要意義[2]。宮頸組織學檢查是臨床針對宮頸疾病診斷的金標準，但由于患者接受程度較低，無法進行普及，隨著醫學檢查手段的發展，臨床提出對患者進行p16/Ki67 雙染檢測，以期獲得較好的診斷效果，更好的對宮頸LSIL 與HSIL 進行分流，并預測LSIL 轉歸情況[3-4]。本研究選取300 例宮頸疾病患者作為研究對象進行p16/Ki67 雙染檢測。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年2月山東省淄博市婦幼保健院婦科收治的300 例宮頸疾病患者作為研究對象，年齡18～77 歲，平均（47.50±29.50）歲。根據宮頸細胞學診斷結果將患者劃分為未見上皮內瘤樣病變及惡性細胞（no intraepithelial neoplasia and malig nant cells，NILM）、無明確診斷意義的鱗狀上皮細胞病變（atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS）、LSIL 以及非典型鱗狀細胞不除外高級別上皮內病變及以上（atypical squamous cells with squamous intraepithelial lesions several times higher cannot be excluded，ASU-H+）四組；根據宮頸組織學診斷結果不同分為宮頸炎、LSIL、HSIL 以及宮頸癌四組。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

納入條件： ①所有患者均接受組織病理活檢確診[5]，且確診屬于原發性宮頸疾病；②患者已簽署知情同意書。

排除條件：①近期接受了相關治療的患者；②患有其它惡性疾病的患者； ③懷孕或處于哺乳期的患者；④存在自身免疫疾病的患者；⑤存在精神疾病，無法配合本次研究者。

1.2 方法

所有患者均接受組織學診斷、細胞學診斷以及p16/Ki67 雙染檢測。

組織學診斷： 醫護人員采集所有患者宮頸組織，參照病理活檢操作規范以此進行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、裱片、HE 染色后，由3 名高年資的病理學醫師進行診斷。

細胞學診斷： 醫護人員采集患者宮頸上皮細胞，將其固定于95%乙醇后進行巴氏染色，利用TBS 診斷系統進行細胞學診斷。

p16/Ki67 雙染檢測：由醫護人員對患者宮頸標本進行切片，利用全自動免疫組化染色儀（品牌：瑞士羅氏Roche，型號：Bench Mark XT）進行染色，試劑盒選用美國Ventana Medical Systems 生產的p16/Ki67 單克隆抗體雞尾酒試劑，采用免疫組織化學染色法進行檢測。判定陽性標準：細胞內同時出現細胞質棕染與細胞核紅染；判定陰性標準：細胞內未同時出現細胞質棕染與細胞核紅染。

1.3 觀察指標及評價標準

①比較宮頸細胞學診斷結果不同的患者接受p16/Ki67 雙染檢測后結果為陽性的概率。②比較宮頸組織學診斷結果不同的患者接受p16/Ki67 雙染檢測后結果為陽性的概率。③分析p16/Ki67 雙染檢測對宮頸組織學診斷結果為HSIL 與宮頸癌患者的診斷效能，即將宮頸組織學診斷結果作為標準，計算p16/Ki67 雙染檢測診斷HSIL 與宮頸癌的靈敏度、特異度、陽性預測值。敏感度＝真陽性患者例數/（真陽性＋假陰性）患者例數×100%，特異度＝真陰性患者例數/（真陰性＋假陽性）患者例數×100%，陽性預測值＝真陽性患者例數/（真陽性＋假陽性）患者例數×100%。④分析p16/Ki67 雙染檢測與宮頸組織學診斷結果為LSIL 患者之間的關系，即對LSIL 患者隨訪1年時間，統計LSIL 轉歸情況。

1.4 統計學方法

所有數據選用SPSS21.0 軟件分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，計數資料用率（%）表示，比較用檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義，多組間率的兩兩比較采用Bonferroni 方法矯正，檢驗水準α=原α 水平/比較次數。

2 結果

2.1 宮頸細胞學診斷結果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測陽性率的比較

ASCUS 組與LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統計學意義（χ2=1.022，P=0.312）；NILM組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASCUS 組，差異有統計學意義（χ2=42.024，P＜0.001）；NILM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL 組，差異有統計學意 義（χ2=54.121，P＜0.001）；NULM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統計學意義（χ2=96.928，P＜0.001）；ASCUS 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統計學意義（χ2=40.175，P＜0.001）；LSIL 組p16/Ki67 雙 染 檢 測 陽 性 率 低 于ASU-H+組，差異有統計學意義（χ2=29.685，P＜0.001）（表1）。

表1 宮頸細胞學診斷結果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測陽性率的比較[n（%）]

2.2 宮頸組織學診斷結果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測陽性率的比較

HSIL 組與宮頸癌組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統計學意義（χ2=2.929，P=0.087）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL 組，差異有統計學意義（χ2=17.085，P＜0.001）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統計學意義（χ2=92.582，P＜0.001）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統計學意義（χ2=95.575，P＜0.001）、LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統計學意義（χ2=67.404，P＜0.001）、LSIL 組p16/Ki67雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統計學意義（χ2=87.131，P＜0.001）（表2）。

表2 宮頸組織學診斷結果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測后出現的差異[n（%）]

2.3 宮頸組織學診斷結果為HSIL 與宮頸癌患者的p16/Ki67 雙染檢測的診斷效能

p16/Ki67 雙染檢測診斷結果顯示HSIL 與宮頸癌陽性的患者共145 例，靈敏度為91.20%，特異度為82.23%，陽性預測值為78.62%（表3）。

表3 宮頸組織學診斷結果為HSIL 與宮頸癌患者的p16/Ki67 雙染檢測的診斷效能

2.4 LSIL 患者隨訪1年時間的轉歸情況

對宮頸組織學診斷結果為LSIL 的74 例患者進行1年隨訪，p16/Ki67 雙染檢測為陰性的患者出現病變進展的概率為5.88%（3/51），低于p16/Ki67 雙染檢測為陽性的患者出現病情進展的概率30.43%（7/23），差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

宮頸鱗狀上皮內病變指的是宮頸癌前病變過程，根據病變程度可分為LSIL 與HSIL。其中，LSIL 患者病變程度較低，具有可逆性，可通過物理治療逆轉正常，而HSIL 患者病變程度較高，臨床治療一般采用合理的術式切除病灶，因此對患者進行準確的診斷，可幫助醫師選擇正確的治療方案，提高患者治療效果[6-7]。宮頸組織學檢查作為臨床診斷宮頸疾病的金標準，其需要獲取患者宮頸組織標本，患者存在一定的排斥心理，無法得到臨床普及，而宮頸細胞學檢查敏感性較低，容易發生漏診和誤診情況，因此，迫切需要一種簡便、可靠的檢測手段提高對患者診斷的準確性[8-10]。高紅敏等[11]研究發現，p16/Ki67 雙染檢測具有較高的靈敏度、特異度，且檢測標本容易獲得，對患者機體損傷較小，結果易于觀察，可作為宮頸癌篩查的重要方法。在正常宮頸細胞當中，p16 是一種宮頸癌前病變生物標記物，而Ki67 則是核抗原與細胞增殖的標志物，兩者的表達是相互排斥的，但當細胞周期失調而致異常增殖時，兩者會出現同時表達的情況[12-14]。p16/Ki67 雙染檢測指的是對患者病變細胞進行免疫組化雙染標記，然后其中p16 抗體與Ki67 抗體的表達進行檢測，當兩者結果均為陽性時，提示為高級病變，從而為臨床判斷患者病情嚴重程度提供依據，使患者能夠合理的治療[15-17]。

本研究結果顯示，宮頸細胞學診斷結果顯示，ASCUS 組與LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；NILM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASCUS 組，差異有統計學意義（P＞0.05）；NILM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL組，差異有統計學意義（P＞0.05）；NULM 組p16/Ki67雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統計學意義（P＞0.05）；ASCUS 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統計學意義（P＞0.05）；LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統計學意義（P＞0.05）。HSIL 組與宮頸癌組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL 組，差異有統計學意義（P＞0.05）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統計學意義（P＞0.05）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統計學意義（P＞0.05）、LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統計學意義（P＞0.05）、LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統計學意義（P＞0.05）。p16/Ki67 雙染檢測診斷結果顯示HSIL 與宮頸癌陽性的患者共145 例，靈敏度為91.20%，特異度為82.23%，陽性預測值為78.62%。對宮頸組織學診斷結果為LSIL 的74 例患者進行1年隨訪，p16/Ki67 雙染檢測為陰性的患者出現病變進展的概率低于p16/Ki67 雙染檢測為陽性的患者，差異有統計學意義（P<0.05）。提示接受細胞學診斷后的四組患者以及接受組織學診斷的四組患者病情嚴重程度均為由低到高，而患者在接受p16/Ki67 雙染檢測后，其陽性率也呈現逐步提升的情況，p16/Ki67雙染檢測陽性率隨宮頸疾病患者病情嚴重程度的增高而增加，而p16/Ki67 雙染檢測陽性率在LSIL 與HSIL 兩組之間存在較大的差異，在HSIL 與宮頸癌等高級別病變的診斷中具有較高的靈敏度、特異度及陽性預測值，因此p16/Ki67 雙染檢測陽性率可作為LSIL 與HSIL 分流的依據，同時，對宮頸組織學診斷結果為LSIL 的74 例患者進行1年隨訪，p16/Ki67雙染檢測為陰性的患者出現病變進展的概率低于p16/Ki67 雙染檢測為陽性的患者，差異有統計學意義（P<0.05），提示p16/Ki67 雙染檢測能夠較好的預測LSIL 患者轉歸情況。黎法文等[18]研究結果顯示，p16/Ki67 雙染檢測結果的陽性率會隨著宮頸疾病患者的病情加重而不斷增加，并在LSIL 與HSIL 之間存在較大差異，可作為臨床分流LSIL 與HSIL 的重要手段，該結果與本研究結果一致，提示p16/Ki67雙染檢測可作為臨床診斷宮頸疾病嚴重程度的重要方法。

綜上所述，p16/Ki67 雙染檢測能夠對宮頸疾病嚴重程度進行有效的診斷，能夠分流LSIL/HSIL，并對LSIL 的轉歸具有較高的預測價值，值得臨床推廣應用。