液相色譜-飛行時間質譜法快速篩查生乳中29 種獸藥殘留的研究

霍路曼，李 藝，鄭百芹，李明陽，張淼怡，郝立武，張書宏

河北省唐山市食品藥品綜合檢驗檢測中心；河北省農產品質量安全檢測工程技術研究中心，河北唐山 063000

0 引言

近年來，乳及其制品因具有豐富的營養價值已成為人們生活中必不可少的食品之一[1]。據《2020年中國奶業統計摘要》統計，2018年、2019年、2020年，我國生乳產量分別為3 038.6 萬噸、3 201.2 萬噸、3440.0 萬噸，呈現出逐年遞增的態勢。乳品市場發展潛力巨大[2]。生乳作為乳制品的最主要原料，從生產到加工，再到運輸，經過了較長的產業鏈，因此如何保障其的質量安全問題，成為行業和消費者共同關注的焦點。

在生產端，生乳的不安全因素之一，是生乳中的獸藥殘留，其主要來自不規范使用獸藥與不嚴格執行休藥期[3，4]，最終導致生乳中獸藥殘留超過安全值[5]。通過查閱相關資料，目前生乳中獸藥殘留檢測方法包括酶聯免疫法[6]、氣相色譜法-質譜聯用法[7]、液相色譜法[8]、液相色譜-質譜聯用法[9]。但能在短時間內準確測定生乳中多數量獸藥殘留的研究與報道較少。本研究通過對樣品前處理過程進行優化，采用液相色譜高分辨飛行時間質譜技術建立了同時測定生乳中29 種獸藥殘留的快速檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

液相色譜-高分辨飛行時間質譜儀（X500R）：美國AB SCIEX公司；電子天平（PL2002）：上海梅特勒-托利多公司；渦旋儀（MS3 basic）：德國艾卡公司；振蕩器：德國海道爾夫（Heidolph）公司；氮吹儀、離心機。

1.2 材料

獸藥殘留標準品購自天津阿爾塔公司；甲酸、甲醇、乙腈為質譜純，其他試劑為分析純；試驗用水為蒸餾水（屈臣氏）；生乳樣品采于河北省唐山市的生鮮乳收購站；0.22 μm濾膜購自DIKMA公司；凈化管（Dikma ProElut QuECHERS獸藥殘留檢測專用）產自Dikma公司。

2 試驗方法

2.1 混合標準儲備溶液

分別吸取濃度為10 ng/mL的單個獸藥標準物質100 μL，用乙腈定容至10 mL，得到濃度為100 μg/mL的混合標準溶液，于-20 ℃冰箱內保存。

2.2 樣品前處理

分別吸取生乳樣品2.0 mL于50 ml離心管中，加入混合標準溶液0.1 mL，配制成含量為5 μg/mL的待測樣品，渦旋混勻后靜置10.0 min，加入8.0 mL乙腈（含0.2%的甲酸），渦旋混勻后超聲5.0 min，4 000 r/min離心10.0 min，將上層清液全部導入凈化管中，渦旋震蕩10.0 min后靜置20.0 min，隨后吸取上層清液4.0 mL氮吹至近干，用10%乙腈水定容至1.0 mL，渦旋混勻后過0.22 μm濾膜至進樣小瓶，待測。

2.3 液相色譜條件

色譜柱條件：Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1×50 mm，1.8 μm）。柱溫：40 ℃；進樣量：5 μL；流量：0.3 mL/min。正離子模式下流動相：A為水溶液加上0.1%甲酸；B為乙腈溶液加上0.1%甲酸。采集時間為20.0 min，梯度程序見表1。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式，采集方式為非依賴型數據采集模式（IDA）。具體參數見表2。

表2 質譜條件參數

2.4 數據處理

結合已建立的數據庫進行定性分析，數據采集完后使用SCIEX OS系統（Version 1.6.1.29803）中自帶的Analytics程序進行數據分析，分析方式為非靶向分析。

3 結果與討論

準確吸取2.00 g生鮮乳樣品，加入混合標準溶液0.1 mL，配制成含量為5 μg/mL的待測樣品，隨后按照上述前處理方法進行處理，將數據進行靶向分析，29 種獸藥能夠在20.0 min內被檢測出來，總離子流圖見圖1，結果見表3。從表1中可以看出29 種獸藥殘留能夠被很好的檢測出來，其中Mass Error在±2.0 mg/kg之內，Library Score得分均在90 分以上，能夠滿足快速定性的要求，提高篩查效率與準確性。

表 3 29 種獸藥殘留上機結果

圖1 29種獸藥殘留總離子流圖

表 1 梯度程序

生乳中因含有蛋白質會影響提取效果，前處理方法中，往提取液中加入了0.1%的甲酸，能夠有效地去除樣品中的蛋白質，同時，超聲處理能夠很大程度上提高提取效率。

4 結論

液相色譜-高分辨飛行時間質譜具有高通量、快速定性的優點，在建好譜庫的情況下，能夠不使用標準品來對物質進行快速定性，并且其前處理方法簡單，能夠在很大程度上節約檢測時間，提高檢測效率與準確性。

本方法通過優化的前處理方法結合液相色譜高分辨飛行時間質譜，開發了乳制品29 種獸藥殘留的快速定性方法，具有前處理簡單、靈敏度高、檢測時間快等優點，但因其在定量檢測的準確性上不如三重四級桿，因此，定量檢測暫不考慮該方法。