免疫組化法和熒光原位雜交法在乳腺癌HER2 表達水平檢測中的應用比較

廖玉婷，張嘉文，張麗君，梁遠秋，高敏，陳靖

南方醫科大學附屬東莞醫院病理科，廣東東莞 523000

乳腺癌是全球范圍內女性發病率和病死率均高的惡性腫瘤，復發和轉移的發生率高，嚴重威脅女性的生命健康和生活質量，早發現、早診斷、早治療能夠顯著改善患者的預后[1]。 乳腺X 線檢查、超聲檢查、MRI 檢查等是乳腺癌早期篩查的重要手段，隨著細胞分子生物技術的不斷發展，孕激素受體（progesterone receptor, PR）、Ki67、雌激素受體 （estrogen receptor,ER）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2, HER2）等分子標志物被用于診斷乳腺癌，預測治療敏感性和患者預后，顯示出良好的臨床應用價值[2-3]。 研究顯示15%～25%乳腺癌中HER2表達水平升高，HER2 過表達與不良生物學特征和臨床結局有關，抗HER2 治療能顯著改善HER2 陽性乳腺癌患者的預后[4]。《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范（2019 年版）》中指出為期1 年曲妥珠單抗輔助治療依然是早期HER2 陽性乳腺癌術后治療的標準選擇，以曲妥珠單抗為基礎的化療能顯著提升HER2陽性乳腺癌患者的治療效果，改善預后，因此通過免疫組化法（immunohistochemistry, IHC）和熒光原位雜交法（fluorescence in situ hybridization, FISH）檢測乳腺癌HER2 表達情況對于篩選靶向治療藥物，制定治療方案有重要意義[2-5]。 該研究應用IHC 檢測HER2蛋白的表達水平，收集2019 年1 月—2020 年12 月在該院就診的乳腺癌患者188例為研究對象，應用FISH 檢測HER2 基因的擴增情況，探究兩種方法的檢測一致性，以其指導臨床診斷和治療。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集該院就診的乳腺癌患者188例為研究對象，乳腺癌患者年齡為25～78 歲，中位年齡51 歲。納入標準：①所有研究對象均經影像學和病理學檢查確診為原發乳腺癌患者； ②患者的臨床病理學資料完整；③患者對研究內容知情同意。 排除標準：①接受過放療或化療者；②合并其他惡性腫瘤者；③合并嚴重感染者；④合并慢性消耗性疾病或肝腎等重要臟器功能衰竭者；⑤接受過內分泌或手術治療者；⑥合并高血壓糖尿病等基礎疾病者。

1.2 方法

記錄患者的年齡、組織學分類等臨床資料，手術中取腫瘤組織，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋用于IHC或FISH 檢測。 將組織切片脫蠟修復，IHC 染色使用HER2 檢測試劑盒（免疫組化法）（Dako Denmark A/S）進行檢測，結果根據《乳腺癌HER2 檢測指南（2014版）》[6]判定，0、1+為陰性，3+為陽性，2+為不確定。FISH檢測使用乳腺癌HER2 基因檢測試劑盒（廣州安必平醫藥科技股份公司）進行檢測，結果根據《乳腺癌HER2檢測指南（2014 版）》判定，HER2/CSP≥2.0 為擴增陽性，HER2/CSP＜2.0 且平均HER2≥6.0 為擴增陽性，HER2/CSP＜2.0 且平均HER2＜4.0 為擴增陰性，HER2/CSP＜2.0 且4.0≤HER2＜6.0 為擴增不確定，需增加判讀的細胞數或更換腫瘤蠟塊重新實施FISH 檢測。

1.3 統計方法

采用SPSS 24.0 統計學軟件處理數據，計數資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢測HER2 的結果比較

188例乳腺癌患者中，IHC 3+乳腺癌患者46例，占比24.46%，2+乳腺癌患者73例，占比38.82%，0/1+乳腺癌患者69例，占比36.70%；FISH 檢測HER2 擴增陽性的患者有62例，占比32.97%，HER2 擴增陰性的患者有126例，占比67.03%，兩種檢測方法的陽性率間比較，差異有統計學意義（χ2=85.990，P＜0.05）。 見表1。

表1 兩種方法檢測HER2 的結果比較

2.2 兩種方法檢測的靈敏度和特異度比較

當IHC 和FISH 檢測結果都為陰性時，兩種方法的一致性檢驗Kappa=0.399，FISH 檢測的靈敏度為94.20%，特異度為48.74%，兩種方法比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；當IHC 和FISH 檢測結果都為陽性時，兩種方法的一致性檢驗Kappa=0.639，FISH 檢測的靈敏度為86.96%，特異度為84.51%，兩種方法比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；當IHC 檢測結果為2+時，兩種方法的一致性檢驗Kappa=0.120，FISH檢測的靈敏度為75.34%，特異度為38.26%，兩種方法比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

乳腺癌是我國女性發病率最高的惡性腫瘤，臨床常用TNM 分期及影像學檢查結果對乳腺癌進行描述，近年來ER、PR、Ki67、HER2 等分子標志物被用于制定乳腺癌患者靶向治療方案，降低患者的病死率，提升臨床治療效果[7]。由編碼基因ERBB2 擴增可導致HER2 過表達，持續激活下游信號通路，與腫瘤細胞侵襲性升高和不良預后有關，赫賽汀（注射用曲妥珠單抗）為靶向HER2 的單克隆抗體，適用于HER2 過度表達的轉移性乳腺癌，可作為單一藥物治療已接受過1 個或多個化療方案的轉移性乳腺癌或與紫杉醇或者多西他賽聯合，也可用于接受手術、含蒽環類抗生素輔助化療和放療后的HER2 過度表達乳腺癌的輔助治療，與紫杉醇等聯合應用可使患者生存期延長，改善生活質量，同類藥物帕妥珠單抗、拉帕替尼也被用于乳腺癌臨床治療[8-9]。 因此，使用IHC 或FISH檢測得到的IHC3+或IHC2+/FISH+結果是定義HER2陽性的明確依據，是臨床制定治療方案的重要依據，HER2 狀態的準確判斷是療效預測和患者篩選的前提，有重要的臨床價值。

IHC 和FISH 是臨床常用的HER2 表達水平檢測方法，美國臨床腫瘤學會/美國病理學會（American society of clinical oncology/college of American pathologists, ASCO/CAP） 發布的乳腺癌HER2 檢測指南中推薦使用IHC 檢測HER2 蛋白表達狀態，應用FISH檢測HER2 基因擴增水平，而IHC 檢測HER2 表達結果中2+結果被判定為可疑病例，仍需進行FISH 檢測進一步判定[10]。 該研究取乳腺癌患者的腫瘤組織，分別用IHC 和FISH 方法檢測HER2 表達情況，188例乳腺癌患者中，IHC 檢測HER2 表達陽性（3+）的患者占比24.46%，可疑陽性患者占比38.83%，陰性患者占比36.70%；FISH 檢測HER2 擴增陽性的患者占比32.97%，HER2 擴增陰性的患者占比67.03%，顯著高于IHC 檢測HER2 陽性和陰性的患者比例，提示FISH 在HER2 表達狀態判定中有更確定的檢測結果。

當IHC 檢測結果為2+時，兩種方法的檢測一致性最差，當IHC 檢測結果為0/1+或3+時，兩種方法的檢測一致性較好，FISH 檢測的靈敏性較高，提示患者在臨床診斷時IHC 檢測為2+，需進行FISH 檢測明確診斷，作為最后的治療依據，和指南中提到的檢測方案相符[11]。 IHC 檢測技術難度和試劑成本低廉，對實驗室條件要求較低，檢測收費較FISH 低，在臨床檢測中顯示出更大的應用優勢，更易于在基層醫療機構中推廣應用。

HER2 位于17 號染色體上，部分患者可能存在17 號染色體為多倍體的情況，導致HER2 基因表達水平較高，董兵斌等[12]應用HER2/CEP17 信號比反應HER2 基因擴增狀態，降低FISH 檢測過程中可能出現的假陽性，預測新輔助化療患者的預后病理狀態。該研究中IHC HER2 0/1+和FISH 陰性、IHC HER2 3+和FISH 陽性檢測均顯示出良好的一致性，但兩種方法的檢測結果均有顯著性差異，因此，對于IHC 和FISH 的HER2 檢測結果臨床是都需要參考的，對于IHC HER2 2+的乳腺癌患者，需根據患者ER、PR、BRCA1 和BRCA2 等分子標志物的表達情況綜合選擇治療方案[13]。

綜上所述，IHC 和FISH 是臨床常用的乳腺癌HER2 表達的檢測方法，IHC 檢測結果為HER2 2+時，應使用FISH 檢測進一步判定，實際工作中可結合具體情況，合理高效應用各種檢測方法，為臨床治療提供準確依據。