MicroRNA、TIF1γ 和HBV- DNA 在乙肝相關肝細胞癌復發中的表達分析

臧唯，索朗多吉，旦增群培

1.吉林市中心醫院肝膽外科，吉林吉林 132000；2.日喀則市定結縣人民醫院外科，西藏定結 857900

乙肝相關肝細胞癌是臨床常見腫瘤疾病，有較高發生率和病死率，嚴重危害患者的健康安全[1]。目前已知在乙肝相關性肝癌復發中乙肝病毒基因（HBVDNA）陽性的存在有重要意義，在腫瘤免疫中雖然轉錄中介因子1γ （TIF1γ）、MicroRNA 作用功能已被進行了研究分析，但尚不確定三者間的關聯性在乙肝相關肝細胞癌中的作用機制與表達情況[2]。 故該文選取2017 年1 月—2020 年12 月該院接收的78例乙肝相關肝細胞癌患者作為觀察組對象，并另選取非復發乙肝相關肝細胞癌患者78例作為作為對照組，分析在乙肝相關肝細胞癌復發中TIF1γ、MicroRNA 和HBVDNA 的表達情況，并作進一步闡述，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

把該院接收的78例乙肝相關肝細胞癌患者作為觀察組，男40例，女38例； 年齡54～79 歲，平均（66.52±2.14） 歲； 復發無法行手術治療的患者有42例，乙肝相關肝細胞癌復發采取多次或二次手術治療的患者有36例。 另選取非復發乙肝相關肝細胞癌患者78例作為對照組，男41例，女37例；年齡54～79歲，平均（66.48±1.26）歲。 兩組一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。 對于該研究，醫學倫理委員會知曉且同意研究進行。

1.2 納入與排除標準

1.2.1納入標準研究選取的乙肝相關肝細胞癌者均已經手術病理、影像學檢查確診；研究所選病例年齡均≥54 歲，但≤79 歲；所選對象均簽署知情同意書，同意研究進行。

1.2.2排除標準凝血功能障礙者； 免疫能力低下者；精神功能嚴重障礙者；對研究不配合者。

1.3 方法

實施實時熒光定量PCR（realtime PCR）技術對研究所選對象血漿中MicroRNA 表達情況及對肝臟組織細胞表達情況實施檢測； 實施PCR 測定研究所選對象的HBV-DNA 情況，開展酶聯免疫吸附試驗（ELISA），操作時應根據試劑盒說明步驟嚴格執行，并對結果進行判斷。 實施PCR 對TIF1γ 進行檢測，PCR 產物與入線性化表達載體相連接，反應條件是在42℃環境下連接15 min，在25℃環境下連接30 min。該次研究開展，所應用的PCR 儀為醫療專用設備，型號為ABI-2720，由北京世紀科信科學儀器有限公司提供； 所應用的DNA 測序儀則是由上海艾研生物科技有限公司提供，型號為ABI Prism 3730XL 型；所應用的凝膠成像儀、凝膠成像儀均是由濟南好來寶醫療器械有限公司提供，型號分別為BG-gdsAUTO 520型、DYCA-20F 型等；TIF1γ （16G9）：TIF1γ 抗體是上海創高提供，以人和鼠為適應物種。

1.4 觀察指標

觀察分析對照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 高表達、低表達水平情況；觀察分析復發非手術組、復發手術組TIF1γ、MicroRNA 高表達、低表達水平情況；觀察分析手術前后對照組、復發手術組HBV-DNA 水平陽性率情況，并對手術前后的變化情況進行探究。 陽性率=HBV-DNA 水平陽性例數/總例數×100.00%

1.5 統計方法

采用SPSS 25.0 統計學軟件進行數據處理，計量資料以（±s）表示，采用t 檢驗；計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 表達水平比較

對照組、觀察組患者的TIF1γ、MicroRNA 高表達水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；較觀察組，對照組的TIF1γ、MicroRNA 低表達水平更低，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 對照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 表達水平比較（±s）

表1 對照組、觀察組TIF1γ、MicroRNA 表達水平比較（±s）

組別TIF1γ高表達 低表達MicroRNA高表達 低表達觀察組（n=78）對照組（n=78）t 值P 值0.10±0.09 0.08±0.05 1.716 0.088 0.49±0.06 0.01±0.02 67.028 0.001 0.12±0.07 0.10±0.09 1.549 0.123 0.52±0.14 0.01±0.06 29.572 0.001

2.2 復發非手術組、復發手術組TIF1γ、MicroRNA表達水平比較

復發非手術組、復發手術組患者TIF1γ、MicroRNA 高表達水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；較復發非手術組，復發手術組患者TIF1γ、MicroRNA 低表達水平更高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 復發非手術組、復發手術組TIF1γ、MicroRNA 表達水平對比（±s）

表2 復發非手術組、復發手術組TIF1γ、MicroRNA 表達水平對比（±s）

組別TIF1γ高表達 低表達MicroRNA高表達 低表達復發非手術組（n=42）復發手術組（n=36）t 值P 值0.54±0.14 0.57±0.15 0.913 0.364 0.32±0.05 0.67±0.09 21.623 0.001 0.69±0.20 0.61±0.16 1.928 0.058 0.48±0.11 0.59±0.12 4.222 0.001

2.3 對照組、復發手術組手術前后HBV-DNA 水平陽性率比較

術前急性期、術后3 d、術后2 周時段，復發手術組、對照組陽性率比較，前者所占比高于后者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 對照組、復發手術組手術前后HBV-DNA 水平陽性率比較[n（%）]

3 討論

乙肝相關肝細胞癌是臨床常見惡性腫瘤疾病，有較高的病死率及發生率，嚴重威脅患者健康安全，影響患者生存時間。手術療法是目前臨床治療該疾病的常用方法，雖然能取得較好效果，但也存在疾病復發概率。 研究證實，導致乙肝相關肝細胞癌復發的原因和多因素相關，如TIF1γ、MicroRNA 異常水平等[3]。 而且也有報道表明，不僅在其他直腸腫瘤中MicroRNA的低表達水平處于較高狀態，而且MicroRNA 的低水平表達異常情況也會出現在乙肝相關肝細胞癌中[4]，由此能說明，MicroRNA 屬于乙肝相關肝細胞癌的抑制因子。 轉化生長因子（TGF）-β1通路橋架功能在乙肝相關肝細胞癌肝細胞中是相對繁瑣的[5-6]。 有研究指出，在乙肝相關肝細胞癌中TGF-β1 通路的激活較為常見[7]，由此得出，TIF1γ 具有能對TGF-p/Smad 激活予以調控的通路功能[8]。研究表明，肝臟癌細胞經水平表達較低的TGF-β1來使其對TGF-β1促癌效應的敏感性增強，進而會提高腫瘤復發情況發生[9]。 另外，在乙肝相關肝細胞癌復發中HBV-DNA 擔任重要角色[10]。有研究報道指出，乙肝相關肝細胞癌的復發病死率和HBV-DNA 陽性高表達有一定關聯性，且量效關系明顯，術后HBV-DNA 的高量效則是導致術后乙肝相關肝細胞癌復發的主要原因[11]。

雖然TGF-β1和MicroRNA 水平在乙肝相關肝細胞癌復發時和信號通路的功能機制、機體免疫功能機制尚未全部闡述清楚，但經測定免疫指標得出，TGFβ1與MicroRNA 存在于復發型肝相關肝細胞癌中[12-13]。TGF-β1與MicroRNA 作為一種媒介參與乙肝相關肝細胞癌的復發。由于乙肝相關肝細胞癌的發生屬于一個多步驟、多因素參與的復雜過程，和乙肝病毒（HBV）慢性持續性感染有一定關聯性[14]。HBV 慢性感染易誘發肝細胞增殖與再生、繼發性肝纖維化和肝臟炎癥受損等，從而造成肝臟惡性變化。 大部分乙肝相關肝細胞癌患者死于腫瘤快速進展相關病癥，對其進行早期診斷時只有肝移植或肝切除可作為可行有效的治愈方法[15]，然而，更為有效的治療靶點與診斷方法則無法確定。 有報道表明，在對基本細胞調節期間MicroRNA 能起到重要作用，這些過程包括細胞命運選擇和發育、凋亡和增殖，基本上60%左右的人類基因受MicroRNA 調控。 MicroRNA 能對多種類型腫瘤進行調控，其異常表達和一些腫瘤的發生有一定關聯性，其作用機制為當MicroRNA 呈現異常表達時，經對癌基因或腫瘤抑制基因的表達下調，能對腫瘤發生過程予以抑制或促進。 在該次研究中，以該院接收的78例乙肝相關肝細胞癌患者為觀察組，并另選取非復發乙肝相關肝細胞癌患者78例作為對照組，從結果中可知，在比較TIF1γ、MicroRNA 表達水平中，觀察組的低表達水平分別是（0.49±0.06）、（0.52±0.14），均高于對照組的（0.01±0.02）、（0.01±0.06）（P＜0.05）；復發手術組患者TIF1γ、MicroRNA 低表達水平分別是（0.67±0.09）、（0.59±0.12），明顯高于復發非手術組的（0.32±0.05）、（0.48±0.11）（P＜0.05）；復發手術組術前急性期、術后3 d、術后2 周HBV-DNA 水平陽性率占比分別是86.11%、80.56%、41.67%，明顯高于對照組的12.82%、17.95%、1.28%（P＜0.05）。 與周瑩等[16]的研究結果類似： 復發手術組術后3 d 占91.2%、術后2 周41.7%高于對照組。 說明TIF1γ、MicroRNA 低表達水平，HBV-DNA 的高度復制能使腫瘤對機體的復發侵犯率增加，能對乙肝相關肝細胞癌患者的預后帶來嚴重影響。 由此說明，針對乙肝相關肝細胞癌復發患者，在乙肝相關肝細胞癌早期治療診斷中上述3種因子對其評價有重要作用，臨床應用價值高[17]。

在肖鐘迪等[18]的研究中雖然只分析了MicroRNA，并未對HBV-DNA、TIF1γ 做過多研究，但從分析可知，在肝癌中miR-218 低表達，且和肺癌預后及轉移復發有一定關聯性。 這一結果與該次研究證實的MicroRNA 低表達相一致。

綜上所述，在乙肝相關肝細胞癌患者中，誘發乙肝相關肝細胞癌復發的因素主要為HBV-DNA 陽性表達，以及TIF1γ、MicroRNA 低表達水平增高，且能對乙肝相關細胞癌患者預后帶來影響。