紫外分光光度法測定依折麥布片含量的效果分析

陳良宇，和順芳，沈報春，張 偉

（1 昆明醫科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室 云南 昆明 650500）

（2 云南龍津康佑生物醫藥有限公司 云南 昆明 650503）

（3 昆明龍津藥業股份有限公司 云南 昆明 650503）

依折麥布片是由美國默克（Merck）公司和先靈葆雅（Schering-Plough）公司共同研制的選擇性抑制膽固醇吸收的藥物[1]，是第1 個被FDA 批準上市的膽固醇吸收抑制劑[2]。其機制主要是選擇性地抑制人體內小腸黏膜上傳輸蛋白NPC1L1 的活性，有效減少腸內膽固醇的吸收，降低血漿中膽固醇水平和肝臟內膽固醇的儲存量[3]。此藥在臨床上用于治療原發性高膽固醇血癥，家族性純合子高膽固醇血癥（HoFH），純合子谷甾醇血癥[4]，混合性高脂血癥和冠心病等。《美國藥典》第41 版[5]中依折麥布片的含量測定均采用高效液相色譜法，該方法專屬性強，準確度高，但使用高效液相色譜法檢測時操作繁瑣，耗費時間長，成本高。因此本文將嘗試采用紫外分光光度法對依折麥布片的含量進行測定，以期開發出一種準確、快速、經濟的檢測方法。

1.儀器與試藥試劑

Evolution 350 紫外可見分光光度計（美國Thermofisher Scientific 公司），UV-2700 紫外可見分光光度計（日本島津公司），Ultimate 3000 高效液相色譜儀（美國Thermofisher Scientific 公司），Secura225D-1CN 半微量電子天平（德國賽多利斯公司），SK8300GT 超聲波清洗機（上海科導超聲儀器有限公司）。

依折麥布對照品（USP 標準品，批號R075K0）；依折麥布片（云南龍津康佑生物醫藥有限公司提供，規格10 mg，批號20201118、01210303、01210304）；乙腈（色譜純，安徽時聯特種溶劑股份有限公司，批號6308BW07）；冰醋酸（分析純，四川西隴科技股份有限公司，批號20201127）；水是實驗室的自制純化水。聚四氟乙稀微孔濾膜（天津圣信唯科技有限公司提供）。

2.方法和結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取依折麥布的對照品適量，用稀釋劑（乙腈﹕水﹕冰醋酸=60﹕40﹕0.1）溶解，制成濃度為20 μg/mL 的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取依折麥布片10 片，置500 mL量瓶中，加稀釋劑適量，超聲30 min，稀釋劑定容至刻度，搖勻，過濾；精密量取續濾液5 mL，置50 mL 量瓶中，稀釋劑定容至刻度，搖勻即得。

2.1.3 測定方法 照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2020 年版四部通則0401[6]）在選定的測定波長處依次測定空白溶劑、空白輔料溶液、對照品溶液及供試品溶液。

2.2 專屬性

取依折麥布片（批號：20201118）5 片，于50 mL 量瓶中分別進行酸、堿、氧化、高溫和光照強制破壞。另按處方比例制備空白輔料溶液[7]，取空白溶劑及上述溶液在190～400 nm范圍內進行紫外光譜掃描，從圖1來看，在248 nm 波長處，空白溶劑和空白輔料不影響主要成分檢測；酸、堿、氧化、高溫和光照強制破壞后，樣品在248 nm 波長處無吸收干擾，因此本試驗選擇248 nm 作為依折麥布片的檢測波長。

圖1 依折麥布檢測波長的選擇

2.3 線性關系考察

以濃度為20 μg/mL 的對照品溶液作為100%濃度的線性溶液，分別配制25%、50%、75%、100%、125% 和150%濃度的線性溶液，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2020 年版四部通則0401[6]）測定其吸光度，得到吸光度與濃度的回歸方程為：A=0.0384C+0.0049，其中r=0.9999（n=6）見圖2。結果表明依折麥布在濃度范圍為5～30 μg/mL 內的線性關系良好。

圖2 依折麥布片含量測定標準曲線圖

2.4 穩定性試驗

按“2.1.2”項配制1 份供試品溶液，室溫放置，分別在0、1、2、4、8 h 測定吸光度，實驗結果表明，吸光度RSD為0.64%，供試品溶液中主成分在室溫下8 h內穩定。

2.5 精密度試驗

2.5.1 重復性 取同一批次的樣品（批號：2001118）6 份，每份10 片進行精密稱量，根據“2.1.2”項配置供試品溶液，測定吸光度并計算含量，實驗結果表明，依折麥布的平均含量（n=6）為101.05%，RSD 為0.52%，表明該方法的重復性良好。

2.5.2 中間精密度 按“2.1.2”項重復配制6 份供試品溶液，在不同時間使用不同儀器測定吸光度，實驗結果表明，依折麥布的平均含量（n=6）101.02%，RSD為0.26%。重復性試驗與中間精密度共12 份數據的平均含量（n=12）為101.03%，RSD 為0.35%，表明該方法的精密度能達到含量分析要求。

2.6 回收率試驗

精密稱定依折麥布對照品適量，制備成1 mg/mL 的對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液1.6、2.0、2.4 mL 置100 mL 量瓶中，各加入空白輔料約18 mg，制備成80%、100%、120%的回收率溶液，每個濃度平行制備3 份，分別測定各溶液的吸光度并計算回收率及RSD，平均回收率101.06%，RSD 為0.33%。結果表明，該方法具有良好的回收率，見表1。

表1 回收率試驗結果

2.7 樣品測定

取3 批依折麥布片，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，每批制備3 份，測定吸收度并計算含量，另參照《美國藥典》第41 版[5]中依折麥布片含量測定方法按高效液相色譜法（《中國藥典》2020 年版0512[8]）測定相同3 批依折麥布片的含量。結果表明，各批含量之間沒有顯著差異。此外，本法測定含量與HPLC 法結果無顯著差異，具有可靠性，見表2。

表2 3 批依折麥布片中依折麥布含量測定結果（%）

3.討論

本文建立紫外分光光度法測定依折麥布片含量的方法。根據掃描光譜可知依折麥布最大吸收波長在232 nm處，但空白輔料在該波長處有少量干擾，故選擇248 nm作為檢測波長；而濃度為20 μg/mL 的溶液在248 nm 波長處的吸光度在0.7 左右，符合朗伯-比爾定律的適用范圍；本方法檢測快速，成本低，可較好滿足仿制藥集采經濟性的要求。

本文根據依折麥布具有強紫外吸收的特性，采取紫外分光光度法測定依折麥布片的含量，從線性關系、準確度試驗、精密度試驗、穩定性試驗及樣品測定中得到試驗結果可知，該方法準確、快速、經濟，可以作為制劑質量控制的快速檢測方法來使用。