外周血有核紅細胞項目的性能驗證及臨床意義探討

程瑜，先潔，黃佳佳，李月

1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗科，重慶 400010；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，重慶 400016

有核紅細胞(nucleated red blood cell,NRBC)是一種幼稚的骨髓紅系細胞，健康成年人血液中無NRBC,但在新生兒或幼兒血液中可見[1-3]。一旦成年人外周血中出現(xiàn)NRBC，則多為病理狀態(tài)[4-6]，常見于血液系統(tǒng)疾病，如溶血性貧血、急慢性白血病等。由于外周血NRBC具有細胞核，血液分析儀可能會將其當(dāng)作白細胞，而干擾白細胞計數(shù)[7-8],所以檢測NRBC以校正白細胞計數(shù)對保證血液分析結(jié)果的可靠性具有關(guān)鍵意義。大量研究報道NRBC增多與病死率升高和疾病預(yù)后不良密切相關(guān)，故檢測NRBC亦有重要的臨床作用[9-11]。

ISO15189 CNAS-CL02:2012《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》要求實驗室應(yīng)在設(shè)備安裝和使用前驗證其性能并符合相關(guān)檢驗的要求[12]。為了解XN-3000對外周血NRBC計數(shù)的準(zhǔn)確性和可靠性，該研究參考WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》等[13]指南文件對XN-3000檢測的NRBC進行項目性能驗證，并進一步分析臨床患者樣本的NRBC百分率與疾?。ǚ茄合到y(tǒng)疾病）轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

所用標(biāo)本均來自重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院住院患者；儀器提示有核紅細胞陽性，且入組對象為非血液系統(tǒng)疾病患者。

1.2 儀器與耗材

日本SYSMEX全自動血細胞分析儀XN-3000及原裝配套的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，BASO瑞氏吉姆薩染液，Olymus光學(xué)顯微鏡。

1.3 方法

標(biāo)本性能驗證方案參考相關(guān)指南文件，判斷標(biāo)準(zhǔn)由于沒有國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，研究采用廠家說明書有核紅細胞計數(shù)的性能要求。

1.3.1 儀器檢測NRBC血液采集后2 h內(nèi)完成測定。儀器按計劃進行校準(zhǔn)，檢測前按要求進行每日室內(nèi)質(zhì)控，在控后按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程檢測樣本。

1.3.2 攜帶污染率 將混勻的高濃度血液樣本連續(xù)測定3次，其測定值分別為H1、H2、H3；再連續(xù)測定低濃度血液樣本3次，其測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率（CR=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%）。

1.3.3 精密度 批內(nèi)精密度：取含高、中、低3個水平NRBC%的新鮮全血,按常規(guī)檢測方法連續(xù)重復(fù)檢測11次,取后10次結(jié)果計算均值（Mean）、變異系數(shù)(Coefficient of Variation,CV)和標(biāo)準(zhǔn)差(Standard Deviation,SD)；批間精密度：取含高、中、低3個水平NRBC%的新鮮全血，每天檢測1次，計算連續(xù)6 d的NRBC%數(shù)據(jù)的變異系數(shù)。

1.3.4 線性范圍 選取1份高值NRBC%的全血樣本（H），用儀器的稀釋液分別按照0%、20%、40%、60%、80%、100%的比例進行混合配置，每個稀釋度測定2次計算平均值，將實測值與理論值求偏差，計算Y=aX+b，驗證線性范圍。

1.3.5 NRBC百分率與病死率的相關(guān)性分析 選擇在該院住院期間外周血NRBC＞0的患者進行回顧性研究。收集入組患者的基本信息、預(yù)后結(jié)果，分成80例死亡組與197例好轉(zhuǎn)組，將兩組的NRBC%進行分析。

1.3.6 NRBC百分率的趨勢性分析 分析死亡組與好轉(zhuǎn)組的多次檢測結(jié)果，對死亡組與好轉(zhuǎn)組的NRBC%作趨勢性分析。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗，協(xié)方差統(tǒng)計采用多次測定數(shù)據(jù)的趨勢性分析；計數(shù)資料采用頻數(shù)或率（%）表示，比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 攜帶污染率

SYSMEX XN-3000檢測高、低濃度NRBC的攜帶污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%=0.12%（廠家標(biāo)準(zhǔn)≤2.0%），故該檢測系統(tǒng)攜帶污染率可接收，見表1。

2.2 精密度驗證

SYSMEX XN-3000檢測NRBC批內(nèi)精密度（低、中、高值）變異系數(shù)分別為6.11%、3.35%、0.88%；批間精密度（低、中、高值）變異系數(shù)分別為5.34%、3.54%、1.43%。結(jié)果均符合廠家要求（廠家標(biāo)準(zhǔn)≤25%），故該檢測系統(tǒng)精密度可接收，見表2、表3。

表3 XN-3000全自動血細胞分析儀NRBC批間精密度低、中、高值驗證結(jié)果

2.3 線性范圍驗證

SYSMEX XN-3000檢測NRBC的線性范圍回歸方程Y=0.997 9X+0.519 4，a值（斜率）為0.997 9，r2為0.997 6，結(jié)果均符合廠家要求（廠家標(biāo)準(zhǔn)：a值在1±0.05范圍，r≥0.975或r2≥0.95），故檢測項目線性區(qū)間可接受，見表4。

表4 XN-3000全自動血細胞分析儀線性范圍驗證結(jié)果

2.4 NRBC百分率與病死率的關(guān)系分析

將收集的80例死亡組與197例好轉(zhuǎn)組的NRBC%（若有多次檢測結(jié)果，取最后一次數(shù)據(jù)）進行t檢驗，分析兩組的差異性，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-4.332，P＜0.05）。

2.5 NRBC百分率的趨勢性分析

將收集的進行多次檢測（2～6次不等）的17例死亡組與25例好轉(zhuǎn)組的NRBC%進行協(xié)方差分析，分析兩組趨勢性變化，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=6.326，P=0.022）。

3 討論

全自動血液分析儀計數(shù)外周血NRBC是近年發(fā)展起來的一項新技術(shù),已開始應(yīng)用于臨床,為臨床實驗室簡便、快速準(zhǔn)確地計數(shù)NRBC提供了重要依據(jù)。目前國內(nèi)外開始使用SYSMEX XN-3000血液分析儀(簡稱XN-3000)對外周血中NRBC進行計數(shù)，其原理是利用熒光染色對細胞核進行染色，流式法測定側(cè)向熒光強度(反映細胞核酸含量多少)和前向散射光強度(反映細胞體積大小)，將其與白細胞、紅細胞以及血小板區(qū)別。

該次性能驗證參照參考WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》，對SYSMEX XN-3000檢測NRBC的攜帶污染率、精密度、線性范圍等性能指標(biāo)進行驗證。但因新鮮全血標(biāo)本中NRBC受儲存條件、時間影響較大，所以實驗中批間精密度只計算連續(xù)6 d的NRBC%數(shù)據(jù)的變異系數(shù)。由于NRBC的性能驗證暫時沒有國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，該研究采用廠家說明書的標(biāo)準(zhǔn)。該研究結(jié)果顯示,該項目的攜帶污染率為0.12%，≤2.0%的廠家標(biāo)準(zhǔn)，說明不同濃度間的交叉污染很小；批內(nèi)、批間精密度的變異系數(shù)均≤25%，也達到廠家說明書的標(biāo)準(zhǔn)；回歸曲線為Y=0.997 9X+0.519 4，r2=0.997 6均在1±0.05范圍內(nèi)，r≥0.975，說明線性良好，可報告范圍滿足臨床要求。說明XN-3000具有精密度高、線性范圍寬、簡單快速等優(yōu)點。

臨床病例分析的結(jié)果顯示，80例死亡組的NRBC%明顯高于197例好轉(zhuǎn)組的NRBC%，該結(jié)果與相關(guān)學(xué)者研究符合[14-15]。NRBC%趨勢性分析發(fā)現(xiàn)，進行多次檢測的死亡組，其NRBC%呈上升趨勢，多次檢測的好轉(zhuǎn)組的NRBC%呈下升趨勢或者先升后降的趨勢。患者的NRBC%的持續(xù)升高與其預(yù)后不良有一定關(guān)系[16-19]。在整個病情進展過程中，NRBC%持續(xù)降低與病情好轉(zhuǎn)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

該課題的啟動，也是源于重慶市物價局在2018年4月20日批準(zhǔn)有核紅細胞計數(shù)收費標(biāo)準(zhǔn)（CAAY1000）的啟動。有核紅細胞計數(shù)的正常參考范圍為0，臨床大部分樣本的有核紅細胞計數(shù)結(jié)果均為0，故不推薦每個樣本的血常規(guī)均出具有核紅細胞計數(shù)的結(jié)果，這無疑會增加患者的經(jīng)濟支出，且對大多數(shù)患者的臨床診斷治療與預(yù)后沒有輔助意義。根據(jù)第3版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》，推薦NRBC%≥1%的結(jié)果報告給臨床。實驗室在收取該項目費用前，一定要做項目的性能驗證和每日室內(nèi)質(zhì)控，期待不久的將來衛(wèi)健委臨檢中心組織該項目的實驗室間質(zhì)量評價活動，完善正確度驗證，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。