循環濾泡輔助T細胞在老年T細胞淋巴瘤感染病人中的價值

鄭菲菲 朱嵐 申衛紅

外周T細胞淋巴瘤是一組有成熟T細胞免疫表型的異質型形態改變的侵襲性腫瘤。它們占所有非霍奇金淋 巴 瘤（non?hodgkin lymphoma，NHL）病 例 的7%。大多數外周T細胞淋巴瘤病人CD4陽性，但很少有CD8陽性、CD4和CD8雙陽性或有自然殺傷（NK）細胞免疫表型。研究顯示，在T細胞性淋巴瘤感染中，機體內CD8＋T細胞等經典免疫細胞在其中起相當重要的作用［1］。

濾泡輔助T細胞（Tfh）是最近發現的定位于人類淋巴濾泡組織內的一種新型免疫細胞群體，其在調控人類B細胞產生抗體的過程中起非常重要的作用。但是，由于人體中Tfh細胞的獲得比較困難，因而關于Tfh的臨床研究非常少見。Morita等［2］的研究顯示，循環濾泡輔助T細胞（cTfh）的功能就是淋巴濾泡中Tfh細胞的功能，這為我們研究老年性T細胞性淋巴瘤的機制提供了一些新穎的研究方法。本研究從T細胞性淋巴瘤感染這一角度出發，探討Tfh在老年性T細胞性淋巴瘤感染發病中的相關機制，為疾病的治療提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 本研究共有3組研究對象：T細胞性淋巴瘤感染組、藥物治療組及健康對照組。T細胞性淋巴瘤感染組納入標準［3］：外周血涂片分析有淋巴細胞增多。T細胞性淋巴瘤感染組和藥物治療組均選用2020年1～10月在江南大學附屬醫院血液科住院的T細胞性淋巴瘤感染病人各55例，其中感染組男30例，女25例，平均年齡（70.8±8.2）歲；治療組男28例，女27例，平均年齡（70.1±8.0）歲。藥物治療組納入標準：采用CHOP（環磷酰胺、阿霉素、長春新堿、強的松）、CHOEP（環磷酰胺、阿霉素、長春新堿、依托泊苷和強的松）、劑量調整的EPOCH（依托泊苷、潑尼松、長春新堿、環磷酰胺、阿霉素）、HyperCVAD（環磷酰胺、長春新堿、阿霉素和地塞米松），與大劑量甲氨喋呤和阿糖胞苷交替進行治療。健康對照組選擇同時期在本院健康體檢者55例，其中男30例，女25例，平均年齡（65.8±4.7）歲。參加本研究的所有對象均簽署了知情同意書。本研究獲得江南大學附屬醫院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本收集：分別于早晨采集研究對象的空腹靜脈以及EDTA?K抗凝的外周血各4 mL，分別進行相關處理后，集中冰箱保存，準備待檢。

1.2.2 采用流式細胞儀檢測CD134水平：采用美國BD PharMingen公司的流式細胞儀試劑盒進行檢測，檢測流程嚴格按照說明書進行。

1.2.3 ELISA試劑盒檢測IL?21、IL?4水平：各組收集樣本上清后，嚴格按照試劑盒廠家說明書進行操作，根據各檢測濃度和吸光度（OD）值算出標準曲線的回歸方程進行計算。

1.3 統計學方法 所有數據采用SPSS 22.0統計軟件進行處理分析，所得數據采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 流式細胞術檢測cTfh表面相關分子標志物水平比較 流式細胞儀檢測分析結果顯示：T細胞淋巴瘤感染組CD134的比例為（22.30±6.45）%，高于健康對照組［（3.70±2.18）%］以及藥物治療組［（12.90±4.68）%］，差異有統計學意義（P＜0.05）；經過藥物治療后，T細胞淋巴瘤感染病人的cTfh細胞比例明顯下降，但仍高于健康對照組，說明相關藥物治療有效。見圖1。

圖1 3組cTfh表面CD134水平

2.2 3組IL?21、IL?4的表達水平比較 ELISA檢測結果顯示，T細胞淋巴瘤感染組血清中IL?21、IL?4的水平明顯高于藥物治療組及健康對照組，藥物治療組明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 3組IL?21、IL?4表達水平比較（±s，ng／L，n＝55）

表1 3組IL?21、IL?4表達水平比較（±s，ng／L，n＝55）

注：與對照組比較，?P＜0.05；與藥物治療組比較，△P＜0.05

組別 IL?21 IL?4 T細胞淋巴瘤感染組142.85±5.57?△ 115.66±6.33?△藥物治療組 88.87±6.13? 70.44±5.87?健康對照組 29.09±3.88 19.38±4.52

3 討論

T細胞淋巴瘤是起源于淋巴造血系統的惡性腫瘤，主要表現為無痛性淋巴結腫大，肝脾腫大，全身各組織器官均可受累，伴發熱、盜汗、消瘦、瘙癢等全身癥狀，給人們身心健康帶來很大的危害。國內外研究顯示，其發病機制主要包括免疫介導和T細胞直接損傷兩種。目前病因不清。一般認為，可能和基因突變，以及病毒及其他病原體感染、放射線、化學藥物，合并自身免疫病等有關［4］。以前的研究顯示，普通T細胞免疫紊亂在其中占主要作用，而最新的國內外免疫學研究熱點顯示，cTfh細胞參與其中，并起到非常重要的作用。cTfh細胞是國際新發現的一群新型免疫細胞群體，其顯著的特征性趨化因子受體為CXCR5，以及特異表面分子標志物CD134、CD95、CD154、CD69、CD57等及其分泌的細胞因子IL?4和IL?21，它們相互作用，在cTfh細胞的發育及形成進程中起非常重要的作用，參與T細胞淋巴瘤感染的免疫應答調節過程，并在其中起關鍵作用。而另一方面，IL?21受體廣泛分布于B細胞、cTfh細胞中，其能通過自分泌的方式正向促進T細胞淋巴瘤病人體內CXCR5的表達［5?7］。

本研究結果顯示，T細胞淋巴瘤感染組CD134比例高于藥物治療組以及健康對照組，而且差異有統計學意義；經過藥物治療后，T細胞淋巴瘤感染病人的cTfh細胞比例明顯下降，但仍高于健康對照組，說明臨床藥物治療有效。在細胞因子方面，T細胞淋巴瘤感染組中血清IL?21、IL?4的水平明顯高于藥物治療組及健康對照組，經過臨床藥物治療后，T細胞淋巴瘤感染病人的IL?21、IL?4水平明顯下降，但仍高于健康體檢組。結合這兩方面的結果，說明cTfh細胞及其分泌的細胞因子IL?21、IL?4等在機體消除T細胞淋巴瘤感染的過程中起核心的作用，臨床如若調節cTfh細胞相關標志物比例將會對T細胞淋巴瘤的治療起非常重要的作用，有利于病人的康復。