微小RNA-18a聯合子宮動脈血流參數對早發型子癇前期的預測價值

王勇，李傳剛

子癇前期（preeclampsia，PE）根據其發病時間可分為早發型子癇前期（early-onset preeclampsia，EPE）和晚發型子癇前期。E-PE發病時間較早、距胎兒足月時間較長，與晚發型子癇前期相比孕婦及胎兒的預后普遍更差，若能在早期對E-PE高風險孕婦實施有效的干預，可降低E-PE的發病率［1］。子宮動脈血流檢測是評估E-PE風險的傳統方法，可通過阻力指數（resistance index，RI）、搏動指數（pulse index，PI）、子宮動脈收縮期與舒張期血流速度比值（systolic phase velocity/diastolic phase velocity，S/D）等參數了解孕婦的子宮動脈血流阻力情況，但其預測E-PE的敏感度較低［2］。研究顯示，滋養細胞浸潤能力下降導致的子宮螺旋動脈重鑄障礙是PE的病理 基 礎［3］。微 小RNA-18a（microRNA-18a，miR-18a）被認為是與PE密切相關的微小RNA。Jairajpuri等［4］研究發現，PE患者血漿中miR-18a表達水平下調，尤其在重度PE中下調更為明顯。另有研究證實，miR-18a可影響滋養細胞的浸潤能力，在PE的發生、發展中均起到重要作用［5］。目前，有關miR-18a聯合子宮動脈血流參數對E-PE的預測價值的相關研究鮮見。本研究對此進行分析，以期為臨床相關研究提供參考。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2020年1月—12月于南方醫科大學南方醫院孕檢的孕婦628例，納入標準：（1）年齡20～40歲，完成了本次研究所需檢測項目。（2）孕16～20周時入組，均為單胎妊娠。（3）有完整臨床資料以及隨訪資料。排除標準：（1）非自然受孕。（2）流產或因E-PE以外的原因提前終止妊娠。（3）合并惡性腫瘤、血液系統疾病、免疫系統疾病。（4）有嗜煙、嗜酒等不良習慣。（5）合并精神疾病，無法配合研究。（6）合并妊娠期糖尿病等其他妊娠疾病。所有孕婦均隨訪至孕34周。隨訪方式為門診檢查，根據孕婦是否發生E-PE將其分為E-PE組（34例）和對照組（594例），E-PE診斷標準參考人民衛生出版社《婦產科學》第9版。E-PE組和對照組年齡、入組孕周、孕次、產次、收縮壓及舒張壓比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。本研究經我院倫理委員會批準，患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2主要儀器與試劑 彩色多普勒超聲診斷儀（GE公司Voluson E8）；血壓計（魚躍醫療設備股份有限公司）；PCR檢測儀7500（Bio-Rad公司）；Trizol試劑、實時定量PCR試劑盒（Invitrogen公司）；逆轉錄試劑盒（Fermentas公司）。

1.3研究方法

1.3.1一般資料收集 在孕16～20周時，采用彩色多普勒超聲診斷儀檢測所有孕婦的子宮動脈血流情況，探頭頻率為3.5 MHz，膀胱輕度充盈情況下收集RI、PI、S/D等參數。另檢測所有孕婦孕16～20周時的收縮壓和舒張壓。

Tab.1 Comparison of general information between the EPE group and the control group表1 E-PE組和對照組的一般資料比較（±s）

Tab.1 Comparison of general information between the EPE group and the control group表1 E-PE組和對照組的一般資料比較（±s）

均P＞0.05；1 mmHg=0.133 kPa

組別對照組E-PE組t n 594 34年齡（歲）27.33±5.84 28.15±4.67 0.804入組孕周（周）18.18±1.26 18.32±1.03 0.636孕次（次）1.72±0.31 1.68±0.24 0.740組別對照組E-PE組t產次（次）0.69±0.15 0.66±0.13 1.142收縮壓（mmHg）117.24±15.28 122.05±13.69 1.795舒張壓（mmHg）77.45±8.97 80.21±9.64 1.738

1.3.2miR-18a的相對表達水平檢測 收集所有研究對象在孕16～20周時的空腹靜脈血5 mL，在室溫下靜置60 min，3 000 r/min離心10 min提取血清，于-20℃冰箱中保存待測。實時定量PCR法檢測血清miR-18a的相對表達水平，應用Trizol試劑提取血清中的總RNA，逆轉錄試劑盒逆轉錄為cDNA，再以cDNA為模板、以U6為內參，采用實時定量PCR試劑盒和PCR檢測儀檢測血清miR-18a的相對表達水平。反應體系：cDNA 1μL、上下游引物各1μL、熒光定量PCR參比染料2μL、PCR Master Mix 10μL、RNase-free water補足至20μL。miR-18a引物：上游5′-GTGCTAAGGTGCATCTAGT?GCAG-3′，下游5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。內參U6引物：上 游5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；下 游5′-AAC?GCTTCACGAATTTGCGT-3′。PCR引物由北京奧科公司合成，采用2-ΔΔCt法計算血清中miR-18a的相對表達水平。

1.3.3血清miR-18a、RI、PI、S/D對E-PE的預測價值 采用受試者工作特征（ROC）曲線分析血清miR-18a、RI、PI、S/D對E-PE的預測價值。聯合應用時采用并聯診斷分析法，即兩者均為陽性或一陰一陽最終結果均判定為陽性，兩者均為陰性則將最終結果判定為陰性。

1.4統計學方法 采用SPSS 20.0軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料以均值±標準差（±s）表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗。相關性分析采用Pearson相關。ROC曲線分析血清miR-18a、RI、PI、S/D對E-PE的預測價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組血清miR-18a相對表達水平、子宮動脈血流參數比較 與對照組比較，E-PE組血清miR-18a相對表達水平降低，而子宮動脈血流參數RI、PI及S/D升高（P＜0.05），見表2。

2.2 血清miR-18a相對表達水平與RI、PI、S/D的相關性分析 E-PE患者血清miR-18a相對表達水平與RI、PI、S/D均呈負相關（r分別為-0.426、-0.489、-0.397，均P＜0.05）。

2.3 血清miR-18a、RI、PI、S/D對E-PE的預測價值分析 ROC分析顯示，血清miR-18a、RI、PI用于預測E-PE發生風險效果一般，敏感度均較低，miR-18a和PI診斷特異度較好，見表3、圖1。

Tab.2 Comparison of serum miR-18a relative expression and uterine artery blood flow parameters between the 2 groups表2 2組血清miR-18a相對表達水平、子宮動脈血流參數比較 （±s）

Tab.2 Comparison of serum miR-18a relative expression and uterine artery blood flow parameters between the 2 groups表2 2組血清miR-18a相對表達水平、子宮動脈血流參數比較 （±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別對照組E-PE組t n 594 34 miR-18a 1.03±0.34 0.73±0.17 5.106＊＊RI 0.49±0.14 0.56±0.12 2.855＊PI 0.80±0.16 0.96±0.22 5.542＊＊S/D 1.86±0.57 2.19±0.63 3.264＊＊

Tab.3 Analysis of the predictive value of serum miR-18a and uterine artery blood flow parameters for E-PE表3 血清miR-18a、子宮動脈血流參數對E-PE的預測價值分析

2.4 血清miR-18a聯合各項子宮動脈血流參數對E-PE的預測價值分析miR-18a聯合PI對E-PE的預測價值較高，敏感度82.35%、特異度83.84%，約登指數0.662，見表4。

Tab.4 Analysis of the predictive value of serum miR-18a combined with various uterine artery blood flow parameters for E-PE表4 血清miR-18a聯合各項子宮動脈血流參數對E-PE的預測能力

3 討論

PE是引起不良妊娠結局的重要疾病之一，最新《婦產科學》第9版中已摒棄了輕度PE概念，但依然保留了重度PE概念，以便臨床更加重視PE的危害［6-7］。除了短期不良影響之外，PE還會導致患者遠期心血管疾病的發病風險增高，并且其后代在妊娠時PE發病率明顯高于正常人群［8］。由于PE患者處于妊娠期，臨床用藥受到諸多限制，目前尚缺乏有效治療手段，因此在早期對疾病進行有效預測，盡早進行針對性干預，將對疾病防治起到積極作用。研究證實，在孕16～22周應用小劑量阿司匹林能使EPE高危孕婦受益［9］。正常妊娠時為更好地維持胎兒發育，在孕早、中期會出現“子宮血管重鑄”，主要表現為血流阻力下降，血排量增多［10］。PE患者由于滋養層細胞浸潤能力不足引起胎盤淺著床，胎盤因血供出現障礙，釋放多種胎盤因子，引起氧化應激反應和炎癥反應，血管內皮功能受損，促使血管收縮，進而導致血流循環阻力增加，出現高阻低排的現象［11］。RI、PI、S/D等參數是臨床評估子宮動脈血流的常用指標，其中RI可反映血流阻力大小，PI反映整個心動周期的血流波形情況，S/D是綜合考量收縮期血流速度與舒張期血流速度的指標。本研究結果顯示，E-PE組的RI、PI、S/D等子宮動脈血流參數均高于對照組，提示E-PE患者子宮動脈血流阻力增加，血排量減少，存在明顯的子宮動脈血流異常，這與相關研究結果一致［12］。

目前，PE的具體發病機制尚未完全闡明，但已確定子宮螺旋動脈重鑄障礙引起的胎盤缺血、缺氧是其重要的病理基礎，而滋養細胞浸潤能力下降則是導致重鑄障礙的主要原因［13-14］。miR-18a是miR-17-92簇成員之一，既往研究多集中在其與惡性腫瘤的關系方面［15］。近年來研究顯示，miR-18a參與了PE的發生、發展［16］。目前，關于miR-18a與PE的臨床研究較少。本研究結果顯示，與對照組相比，E-PE組的血清miR-18a呈異常低表達，這與Jairajpuri等［4］研究具有一致性。Xu等［17］研究證實，miR-18a可增強滋養細胞浸潤能力，而miR-18a缺失則可導致滋養細胞浸潤能力下降。基質金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9均是可有效促進滋養細胞浸潤能力的蛋白酶［18］。研究發現，在抑制miR-18a的表達后人絨毛膜滋養層細胞（HTR-8）中MMP-2、MMP-9的表達也明顯降低，認為miR-18a可影響滋養細胞浸潤能力［19］。因此，miR-18a對滋養細胞浸潤能力的影響可能是其參與PE發生、發展的作用機制之一。本研究結果顯示，E-PE患者血清miR-18a相對表達水平與RI、PI、S/D均呈負相關，提示miR-18a的表達情況可能與患者的子宮動脈血流情況有關，考慮可能是因為miR-18a表達降低可導致滋養細胞浸潤能力下降，引起子宮螺旋動脈重鑄障礙，進而出現子宮動脈血流高阻低排的現象，使得RI、PI、S/D等參數異常升高。

目前，臨床主要根據高血壓、蛋白尿、血小板減少、肝腎功能損害等情況綜合診斷PE，但這些臨床癥狀通常在孕20周以后才逐漸顯現，且需疾病發展至一定程度后才會出現明顯的臨床癥狀。實際上，PE患者在出現這些臨床癥狀之前，機體就發生了明顯的病理性改變，如滋養細胞浸潤能力下降和子宮動脈血流異常［20］。本研究通過ROC曲線分析發現，血清miR-18a、RI、PI、S/D對E-PE均有一定的預測價值，但敏感度普遍較低，而miR-18a聯合PI對EPE的預測價值較高，提示miR-18a與子宮動脈血流參數PI聯合應用可進一步提升對E-PE的預測價值。

綜上所述，miR-18a在E-PE患者血清中表達下調，且其表達水平與RI、PI、S/D等子宮動脈血流參數均呈負相關。miR-18a聯合PI對E-PE的預測價值較高，對臨床早期預測E-PE的發生有一定的應用價值，后續將分析miR-18a與PE患者妊娠結局的關系，進一步探討miR-18a對不良妊娠結局的預測價值。