基于網絡藥理學和分子對接探討太白楤木皂苷治療缺血性 腦卒中的藥效物質及作用機制

陶星茹，劉珂娣，趙石，李偉紅，陳海霞，2，董泰瑋，衛培峰，段佳林，奚苗苗，5*（.陜西中醫藥大學藥學院，陜西 咸陽 72046；2.空軍軍醫大學西京醫院藥劑科，西安 7002；.陜西中醫藥大學第二附屬醫院國家藥物臨床試驗機構，陜西 咸陽 72000；4.西北工業大學醫學研究院，西安 70072；5.西安天工生物醫藥研究所，西安 7002）

腦卒中在全球范圍已成為僅次于心血管疾病和癌癥的第三大致死病因，其發病率、致殘率、死亡率及復發率持續上升，嚴重危害人類健康[1]。腦卒中主要分為缺血性腦卒中（IS）和出血性腦卒中，缺血性腦卒中占臨床病例的70%～80%[2]。臨床上對于缺血性腦卒中的有效治療藥物只有重組組織型纖溶酶原激活劑（rt-PA），但由于治療時間窗的限制，大多數患者無法得到及時有效的治療[3-6]。研究顯示，恢復缺血半暗帶血流量，恢復血供及氧供，促進血管新生，增加腦組織缺血區氧供，可以挽救缺血導致的組織損傷，進而改善神經功能[7]。 中藥太白楤木是五加科楤木屬（Aralia）的落葉灌木或小喬木，太白楤木皂苷（saponins fromAralia Taibaiensis，sAT）提取自太白楤木根皮，具有心腦血管保護、降血脂、降血糖等藥理作用[8]。課題組前期研究結果表明，太白楤木皂苷可降低大腦中動脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）大鼠腦梗死體積，改善MCAO大鼠神經功能學評分，表現出良好的神經保護作用[9]。但是，sAT治療IS的藥效物質、生物過程及分子機制尚不清楚。

網絡藥理學廣泛用于中藥藥效物質及作用機制的研究，與中醫學整體觀念、辨證論治的思想相契合，同時與中藥多途徑、多靶標的治療原理一致[10]，分子對接技術廣泛用于中藥及中藥復方作用藥效物質預測及驗證[11]，因此，本研究擬通過網絡藥理學的研究策略，尋找 sAT治療IS的藥效物質，揭示sAT治療IS的生物學過程及分子機制，并通過半柔性對接方法及細胞實驗進行初步驗證。

氧糖剝奪/復氧復糖（oxygen and glucose deprivation/reperfusion，OGD/R）模型為IS研究的常用細胞模型[12]，氧糖剝奪模擬腦缺血病程，復氧復糖模擬再灌注病程，人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）是用于研究血管新生的經典細胞[13]，因此，本研究構建HUVECs OGD/R模型，闡明sAT促進血管新生治療IS的藥效物質基礎和具體作用機制，為sAT的臨床應用及二次開發提供理論依據。

1 材料

1.1 儀器

371型CO2培養箱（美 國Thermo公 司），YQX-Ⅱ型厭氧培養箱（上海躍進醫療器械有限公司），MultiskanSky型酶標儀（美國Thermo公司），生物顯微鏡（奧林巴斯有限公司），BSC-1100ⅡA2-X型生物安全柜（山東博科生物產業有限公司），TD4型臺式離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司），BSA124S型分析天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]，THZ-100型恒溫搖床（上海一恒儀器有限公司），QL901型渦旋儀（海門市其林貝爾儀器有限公司），電泳儀（北京凱元信瑞儀器有限公司），凝膠成像系統（北京賽智創業科技有限公司）。

1.2 試藥

去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa對照品（辰光生物科技有限公司，批號：26020-14-4，純度＞98%）；胎牛血清（FBS，以色列BI公司，批號：1928625）；青霉素-鏈霉素雙抗溶液（批號：20210331）、胰蛋白酶消化液（批號：CR2103040）、杜氏磷酸鹽緩沖液（D-PBS，pH 7.4，批號：21031022）（武漢塞維爾生物科技有限公司）；DMEM/F-12高糖培養基（美國Corning公司，批號：10092013）；DMEM無糖培養基（大連美侖生物科技有限公司，批號：MA0582-Jul-03F）；二甲基亞砜（DMSO，美國MP公司，批號：Y181007）；CCK-8試劑盒（蘭杰柯科技有限公司，批號：70120258）；人血管內皮生長因子酶聯免疫吸附檢測試劑盒（武漢伊萊特生物科技有限公司，批號：VIXCFZ2X4W）；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（陜西中暉赫彩生物醫藥科技有限公司，批號：BG1103）；VEGF抗體（Servicebio，批 號：AC2102017D）；GAPDH抗 體（Servicebio，批號：LS194236）；其余試劑均為分析純或實驗室常用規格；水為超純水。

1.3 細胞

HUVECs由空軍軍醫大學西京醫院藥劑科贈予。

2 方法

2.1 網絡藥理學研究

2.1.1 sAT化學成分收集及其治療IS的靶標獲取 通過查閱中國知網（CNKI）及PubMed數據庫，全面收集sAT化學成分，并對sAT化學成分治療所有疾病的靶標進行預測。在GeneCards和OMIM數據庫中以“stroke”為關鍵詞，在CTD數據庫中以“stroke”“cerebral infarction”和“middle cerebral artery”為關鍵詞進行檢索，獲得的靶標取與sAT化學成分預測靶標的交集，即sAT化學成分治療IS的靶標。將獲得的靶標導入STRING數據庫，限定物種為人類，置信分數設置為0.400，獲得各靶標互作信息。

2.1.2 sAT化學成分治療IS的靶標的GO富集分析及KEGG富集分析 將獲得的sAT化學成分治療IS的靶標導入DAVID數據庫，以“P＜0.05”為篩選條件，對sAT化學成分治療IS的靶標進行GO富集分析。以“P＜0.05”及“count≥5”為篩選條件，對sAT化學成分治療IS的靶標進行KEGG通路富集分析。

2.1.3 核心靶標預測 核心靶標是基于蛋白質相互作用網絡得到的，在信號通路中具有重要調控作用的靶標。最大團體中心性算法（maximal clique centrality，MCC）能夠從網絡中的高連接度靶標與低連接度靶標中捕獲到網絡中的核心靶標，MCC值越大代表靶標在網絡中越重要[14]。故本研究將STRING數據庫中獲得的靶標互作信息導入Cytoscape 3.7.6軟件中，采用CytoHubba插件中的MCC算法，篩選sAT化學成分治療IS的核心靶標。

2.2 分子對接驗證

將sAT化學成分與部分核心靶標進行半柔性對接，以探究sAT化學成分治療IS的分子機制。靶標蛋白結構全部來源于RCSB蛋白數據庫（http://www.rcsb.org/），選取結構相似且分辨率較高的人源受體晶體結構[15]。利用ChemBio Draw Ultra14.0繪制sAT化學成分的結構并保存為Mol2格式。運行Autodock Vina程序對接來驗證sAT化學成分與部分核心靶標的結合效果，根據結合能小于－7.0 kcal·mol－1篩選得到潛在的藥效物質[16]，并用Discovery Studio軟件對結合模式進行可視化。

2.3 細胞實驗驗證

2.3.1 細胞培養 HUVECs使用完全培養基（即含10%FBS、1%青霉素-鏈霉素雙抗的DMEM/F-12高糖培養基），置于37℃、5%CO2恒溫培養箱中培養，每2日更換一次培養基，待細胞融合至90%左右時，用0.25%胰蛋白酶消化并進行傳代。

2.3.2 細胞分組及造模 將HUVECs分為6組，正常組：完全培養基培養；OGD/R模型組：給予DMEM無糖培養基放于厭氧培養箱中培養5 h，取出換成含藥的完全培養基放于CO2培養箱中培養24 h；溶劑組：給予DMEM無糖培養基放于厭氧培養箱中培養5 h，再換成含0.1%DMSO的完全培養基放于CO2培養箱中培養24 h；去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa低、中、高劑量組：給予DMEM無糖培養基放于厭氧培養箱中培養5 h，再取出換成含10、20、40 μmol·L－1去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa（溶劑為0.1%DMSO，濃度根據前期預實驗結果設置）的完全培養基于CO2培養箱中培養24 h。

2.3.3 CCK-8法檢測細胞活性 以5×104個/孔將HUVECs接種于96孔板中，待細胞貼壁后，按“2.3.2”項下方法分組處理，同時設置不含細胞和藥物的空白對照組，每組設置3個復孔。造模給藥完成后，更換含10%CCK-8液的完全培養基，于37℃、5%CO2細胞培養箱中孵育2 h，使用酶標儀在450 nm波長處檢測各孔的光密度（OD）值并計算細胞活性，實驗重復3次。

2.3.4 試劑盒檢測細胞VEGF水平 以2×105個/孔將HUVECs接種于6孔板中，待細胞貼壁后，按“2.3.2”項下方法分組處理，每組設置3個復孔。造模給藥完成后，細胞消化離心后，加入300 μL含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液放于冰上裂解，離心，取上清液，根據試劑盒說明書進行檢測。實驗重復3次。

2.3.5 蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測細胞VEGF蛋白表達 以5×105個/孔將HUVECs接種于培養瓶中，待細胞融合至90%左右時，按“2.3.2”項下方法分組處理。造模給藥完成后細胞消化離心，每管加入400 μL含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液放于冰上裂解，離心，取上清液，用BCA蛋白檢測試劑盒檢測蛋白濃度，加入5×蛋白上樣緩沖液試劑后，加熱變性。10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離等量的蛋白質（20 μg），電泳后轉移到PVDF膜上。5%脫脂牛奶在TBST緩沖液中室溫下封閉2 h，隨后加入VEGF及GAPDH抗體，4℃搖床孵育過夜。TBST洗膜30 min后，加入二抗羊抗兔IgG孵育2 h后，再用TBST緩沖液洗膜30 min后，用凝膠成像系統成像并用Lane 1D軟件進行蛋白半定量分析。實驗重復3次。

2.3.6 統計分析 采用SPSS 20.0軟件對數據進行統計分析。組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Tukey檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 sAT的化學成分收集與靶標預測

從CNKI及PubMed數據庫收錄的文獻中共收集31個sAT化學成分（見表1）。對31種化學成分進行靶標預測，將預測的靶標導入UniProt數據庫，限定研究物種為人類，進行校正和剔重，共獲得416個靶標。

表1 sAT中31種化學成分的基本信息 Tab 1 Basic information of the 31 ingredients from sAT

3.2 IS發病機制靶標收集及sAT化學成分治療IS的靶標獲取

通過CTD、GeneCards、OMIM 3個數據庫，共獲得383個無重復的IS發病機制相關靶標。將sAT中31個化學成分對應的416個預測靶標與IS相關的383個靶標導入Venn在線繪圖工具，取交集共獲取71個共同靶標即sAT化學成分治療IS的靶標，其Uniprot ID、蛋白質及基因名信息見表2。

表2 71個sAT化學成分治療IS靶標的基本信息 Tab 2 Basic information of 71 targets from sAT for IS

3.3 sAT化學成分治療IS靶標的GO及KEGG富集分析

對71個sAT化學成分治療IS的靶標進行GO富集分析，以P＜0.05為篩選條件，共得到241個生物過程（BPs）、30個細胞成分（CCs）與66個分子功能（MFs）。富集的生物過程結果表明，sAT化學成分治療IS的靶標主要參與凋亡過程的負調控、缺少配體的外源性凋亡信號通路、細胞增殖的正向調控、對缺氧的反應、ERK1和ERK2級聯正向調控、細胞遷移正向調控、血管生成正向調控；富集的細胞成分結果表明，sAT化學成分治療IS的靶標主要分布在細胞外間隙、細胞膜、膜筏、細胞外區域、胞漿；富集的分子功能結果表明，sAT化學成分治療IS的靶標主要參與酶結合位點、絲氨酸型酶內切酶活性、蛋白結合、相同的蛋白結合、蛋白激酶活性、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性。

對71個sAT化學成分治療IS的靶標進行KEGG富集分析，以P＜0.05為篩選條件，共得到104條KEGG通路，根據count值≥5篩選與IS相關的前20條信號通路，結果表明，sAT化學成分主要通過黏著斑、PI3K-Akt、HIF-1、VEGF、Toll樣受體、凋亡等信號通路治療IS（見表3）。

表3 71個sAT化學成分治療IS靶標涉及的生物過程、信號通路以及參與調控的核心靶標 Tab 3 Target of 71 sAT ingredients for IS included biological process，signaling pathway，and core target involved in regulation

3.4 核心靶標預測

STRING中保存獲得的蛋白質相互作用關系數據庫作為TSV文件，導入Cytoscape 3.7.6軟件。利用CytoHubba插件篩選得到前20個核心靶標，即TNF、CASP3、VEGFA、PTGS2、EGFR、JUN、STAT3、MAPK1、MMP9、MMP2、ESR1、MAPK8、MAPK14、FGF2、IL1B、MMP3、MMP1、PLG、BCL2L1、CASP8。

3.5 分子對接結果

根據GO及KEGG富集分析結果，發現sAT化學成分治療IS靶標多參與血管內皮功能調節。因此本研究將sAT中31種化學成分與核心靶標中與血管新生相關靶標進行對接，即VEGFA、MMP9、MMP2、FGF2、EGFR，將其作為對接蛋白，由于KDR為VEGFA的主要受體，與血管新生過程息息相關，因此，將其納入對接蛋白，對接蛋白基本信息見表4。對接結果提示，31種化學成分都與多個靶標有不同程度的有效結合。結合能小于－7.0 kcal·mol－1，同時作用于5個靶標的有3個化學成分，分別為楤木皂苷D、去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa、竹節參皂苷Ⅰb；同時作用于4個靶標的有12個化學成分。選擇與6個靶標結合最好的5種化學成分深入分析，結果見圖1～6。

表4 AutoDock Vina計算中6個靶標的參數設置及對應結果 Tab 4 Parameters setting and corresponding results of 6 targets by AutoDock Vina calculation

3.5.1 去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與VEGFA相互作用 去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與VEGFA對接結果如圖1，去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa羥基的氫與TRP105及LEU4形成2個氫鍵作用，母核與TYR104形成Pi-σ鍵，與LYS45、VAL58、LEU47和PRO59形成烷基及Pi-烷基鍵。

圖1 去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與VEGFA對接結果圖Fig 1 Docking diagram of deglucose-chikusetsu saponin Ⅳa with VEGFA

3.5.2 去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與FGF2相互作用 去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與FGF2對接結果如圖2，去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa羥基的氫與GLY122形成氫鍵，與ARG33及ARG81氨基酸殘基形成2個氫鍵作用，此外，母核與ARG39形成烷基鍵，甲基與TYR124形成Pi-烷基鍵。

圖2 去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與FGF2對接結果圖Fig 2 Docking diagram of deglucose-chikusetsu Saponin Ⅳa with FGF2

3.5.3 竹節參皂苷Ⅰb與EGFR相互作用 竹節參皂苷Ⅰb與EGFR對接結果如圖3，竹節參皂苷Ib與ASP323、BMA3283氨基酸殘基形成2個氫鍵作用，此外，母核與ALA122及LEU178形成烷基鍵。

圖3 竹節參皂苷Ⅰb與EGFR對接結果圖Fig 3 Docking diagram of chikusetsu saponin Ⅰb with EGFR

3.5.4 蕷知子皂苷Ⅳ與MMP2相互作用 蕷知子皂苷Ⅳ與MMP2對接結果如圖4，蕷知子皂苷Ⅳ與GLY81、ASP80、ASP77、TYR74、LEU82、ALA84分別形成6個氫鍵作用，母核與TYR142、LEU83、HIS130形成烷基及Pi-烷基鍵。

圖4 蕷知子皂苷Ⅳ與MMP2對接結果圖Fig 4 Docking diagram of yuzhizioside Ⅳ with MMP2

3.5.5 太白楤木皂苷Ⅸ與MMP9相互作用 太白楤木皂苷Ⅸ與MMP9對接結果如圖5，太白楤木皂苷Ⅸ與ASP235、TYR248、TYR245、LEU188、ALA191、MET247、GLY186形成7個氫鍵作用，母核與HIS236、LEU187、HIS230形成烷基及Pi-烷基鍵。

圖5 太白楤木皂苷Ⅸ與MMP9對接結果圖Fig 5 Docking diagram of taibaienoside Ⅸ with MMP9

3.5.6 楤木皂苷D與KDR相互作用 楤木皂苷D與KDR對接結果如圖6，楤木皂苷D與GUL885形成1個氫鍵作用，母核與HIS1026、LEU889、ILE1044、VAL899、CYS1024、ILE888、CYS1045形成烷基及Pi-烷基鍵。

圖6 楤木皂苷D與KDR相互作用對接結果圖Fig 6 Docking diagram of araloside D with KDR

3.6 體外細胞實驗

3.6.1 細胞活性 與正常組比較，模型組細胞活性顯著降低（P＜0.01），提示OGD/R模型引起HUVECs活性下降。與模型組比較，溶劑組細胞活性無明顯變化，去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa各濃度組細胞活性均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），提示其可提高HUVECs OGD/R損傷后的活性且呈劑量-效應依賴關系，結果見圖7。

圖7 各組細胞活性檢測結果（±s，n＝3）Fig 7 Survival rate of cells in each group（±s，n＝3）

3.6.2 細胞中VEGF水平測定結果 與正常組比較，模型組細胞VEGF水平顯著降低（P＜0.01），提示OGD/R模型引起HUVECs中VEGF水平下降。與模型組比較，溶劑組細胞VEGF水平無明顯變化，去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa中、高濃度組細胞VEGF水平均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），提示其可提高HUVECs OGD/R損傷后的VEGF水平且呈劑量-效應依賴關系，結果見圖8。

圖8 各組細胞中VEGF水平測定結果（±s，n＝3）Fig 8 VEGF content of cells in each group（±s，n＝3）

3.6.3 細胞中VEGF蛋白表達結果 與正常組比較，模型組細胞蛋白表達顯著降低（P＜0.01），提示OGD/R模型引起HUVECs中VEGF蛋白表達下降。與模型組比較，溶劑組細胞VEGF蛋白表達無明顯變化，去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa中、高濃度組細胞VEGF蛋白表達均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），提示其可提高HUVECs OGD/R損傷后的VEGF蛋白表達且呈劑量-效應依賴關系，結果見圖9。

圖9 各組細胞中VEGF蛋白表達結果（±s，n＝3）Fig 9 VEGF protein expression of cells in each group（±s，n＝3）

4 討論

中藥所含化學成分復雜，其藥理作用是中藥所含多種藥效物質通過多途經、多環節和多靶標所表現出來的綜合或整合作用[29]，作用機制復雜，中藥藥效物質的研究是目前中醫藥研究面臨的最重要、最關鍵的問題。中藥治療腦卒中歷史悠久，大量體內外研究已證明多種中藥制劑或其單體成分可通過促進血管新生，發揮神經保護作用[30]。中藥多成分作用于多靶標的藥用特點與疾病復雜的作用機制相對應，但其主要藥效成分的研究仍不明確，為闡明其作用藥效物質，本文采用網絡

藥理學及分子對接技術篩選，節約了大量人力、物力和財力，為新藥的研發提供了一定的參考。

通過網絡藥理學研究，收集了31種sAT化學成分及其治療IS靶標71個。GO和KEGG富集分析提示sAT化學成分治療IS主要與血管內皮功能調節、細胞凋亡、炎癥反應、鈣離子超載生物過程相關。血管內皮功能調節是治療IS的關鍵環節[31]，sAT化學成分通過作用于VEGFA、EGFR、FGF2等核心靶標調控VEGF、PI3KAkt、HIF-1等信號通路，進而影響細胞增殖、遷移、血管生成正向調控和細胞外基質分解等生物過程。細胞凋亡貫穿IS發生、發展的整個過程，sAT化學成分通過作用于CASP3、BCL2L1等核心靶標調控Apoptosis、FOXO、MAPK等信號通路，進而影響細胞凋亡過程。研究表明，通過上調OGD VECs細胞和MCAO大鼠PI3K/AKT蛋白表達，促進Bcl-2表達，減少ROS的生成，減少細胞凋亡，可發揮腦保護作用[32]。炎癥級聯反應是IS發展過程中的一個關鍵因素，sAT化學成分可通過作用于TNF、PTGS2、IL1B等核心靶標，調控TNF、toll樣受體、NOD樣受體等信號通路，進而影響炎癥過程。研究表明，在腦缺血早期階段，促炎因子TNF-α的分泌或合成增加是導致腦梗死的主要原因[33]。鈣信號通過激活內源性神經保護機制在保護腦缺血-再灌注損傷中發揮作用，sAT化學成分通過作用于MAPK1、MAPK8、PLC等核心靶標，調控鈣信號通路，進而影響胞質鈣離子正調控等生物過程。鈣信號通路系統可以和其他信號通路調節細胞應激后的適應性，通過阻止胞外鈣離子過度內流，避免細胞內鈣離子超載對缺氧神經元進行保護[34]。

根據GO及KEGG富集分析結果，我們發現sAT化學成分治療IS靶標多參與血管內皮功能調節，分子對接結果顯示去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa、楤木皂苷D、竹節參皂苷Ib與血管新生靶標結合較好，很有可能是其治療IS的藥效物質。

VEGF是現公認最重要的也是最有效的一種高度特異性促血管內皮生長的細胞因子，直接參與缺血缺氧組織或器官的血管生成[35]。VEGF家族有許多成員，其中VEGFA是VEGF家族中最重要的成員，KDR是VEGF特異性結合高親和力的受體，激活下游蛋白發揮生物功能，對于血管修復具有重要作用[36]。分子對接結果顯示去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa和楤木皂苷D與VEGFA/KDR強烈結合，很可能是太白楤木皂苷治療IS作用于VEGFA/KDR靶標的藥效物質。MMPs是一組依賴鈣離子和鋅離子的蛋白內切酶，其中MMP2、MMP9與血管新生關系最為密切。分子對接結果顯示，楤木皂苷D、去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa及竹節參皂苷Ib都能與MMP2及MMP9很好地結合。FGFs是由FGF基因家族編碼的結構相關的一組蛋白質多肽，FGF家族在促進血管生長、改善神經功能缺損等方面發揮重要作用，FGF2是其家族中的一種，能間接促進VEGF生成，對于腦卒中后神經發生和血管生成至關重要。EGFR是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，EGF與其受體EGFR結合后，磷酸化激活下游信號分子ERK和Elk-1，從而促進細胞生存，在細胞增殖及血管新生方面起重要作用。分子對接結果顯示去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa和FGF2結合最好，竹節參皂苷Ib與EGFR結合最好。

基于VEGFA與血管新生過程密切相關并且與去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa對接效果最好，因此本研究選取去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa與對接靶標VEGFA，驗證去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa是否通過作用于VEGFA靶標促進血管新生，發揮腦保護作用。通過復制HUVECs OGD/R模型，觀察不同劑量去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa對HUVECs活性及VEGF的釋放和蛋白表達的影響。結果顯示，去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa能夠提高細胞活性，促進VEGF的釋放和蛋白表達且呈劑量-效應依賴關系。

綜上所述，本研究通過網絡藥理學初步闡明了sAT化學成分治療IS的可能作用機制，并利用分子對接技術對sAT化學成分促進血管新生治療IS的藥效物質及作用機制進行了初步探討，共篩選出15種同時與多個血管新生相關靶標結合的化學成分，其中最具潛力的為去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa、楤木皂苷D及竹節參皂苷Ib，通過細胞實驗驗證了去葡萄糖竹節參皂苷Ⅳa促進血管新生，發揮腦保護作用的可能機制為上調HUVECs VEGF蛋白表達，促進VEGF釋放，提高細胞活性，與分子對接預測結果一致，提示網絡藥理學結合分子對接技術可用于中藥治療疾病的藥效物質及作用機制研究。