三陰性乳腺癌組織p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表達及其意義

杜文英，賈 維

(陜西省銅川礦務局中心醫院腫瘤科，陜西 銅川 727000)

三陰性乳腺癌是乳腺癌的一種亞型，是指患者雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體2均為陰性的乳腺癌，與其他亞型的乳腺癌相比，三陰性乳腺癌有著生存率差，腋窩淋巴結轉移率低，內臟淋巴結轉移率高度特點，臨床發病率占總乳腺癌發病率的10%～17%[1，2]。近年來，乳腺癌的臨床預后以及乳腺癌相關基因表達的變化研究受到了廣泛關注。BRCA1/2 基因是一類腫瘤抑制基因，參與細胞同源重組修復(HRR)過程。通過BRCA 突變檢測，能更好的評估卵巢癌患者的預后、優化治療方案。針對不同人群的 BRCA 突變情況，已有較多報道，但研究數據的人群都是以高加索人種為主，更是缺少體細胞與胚系基因突變的比較。因此，針對中國人群的 BRCA 胚系和體細胞突變情況的研究顯得尤為迫切。本次研究通過對比分析三陰性乳腺癌患者與其他類型乳腺癌患者p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表達，進而探討分析p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表達對TNBC患者臨床預后的影響，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料選取于2017年12月至2018年12月來我院接受治療的三陰性乳腺癌患者72例為觀察組，納入標準：均經病理學和免疫組化診斷確診為三陰性乳腺癌患者，所有患者雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體2均為陰性。排除既往合并有癌癥病史，或雙側乳腺癌的患者。觀察組年齡32～70歲[(52.14±9.83)歲]，其中，導管內癌2例，浸潤性導管癌70例；TNM分期，Ⅰ期14例，Ⅱ46例，Ⅲ12例。同期非三陰性乳腺癌患者72例為對照組，其雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體2中任意一項為陽性，年齡33～68歲[(54.31±10.25)歲]，其中，導管內癌1例，黏液癌1例，浸潤性小葉癌3例，浸潤性導管癌67例；TNM分期，Ⅰ期15例，Ⅱ45例，Ⅲ14例。所有患者均有完整的臨床資料和隨訪資料，包括臨床一般情況、病理情況、分期、治療方式等。兩組患者的臨床一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。所有家屬均知情同意，均簽署知情同意書。本次研究經醫院醫學倫理學委員會批準。

1.2 方法所有患者均接受相應的手術、放化療治療。手術治療主要為保留乳房手術、改良根治術。放射治療根據患者的臨床不同情況，采用直線加速器照射胸壁和鎖骨上區，輔助化療方案主要采用蒽環類、紫杉類藥物的聯合化療。采用免疫組化SP法檢測所有患者的p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表達。一抗、二抗均為福州邁新生物有限公司產品，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。按照試劑盒說明書進行染色，以PBS代替第一抗體作陰性對照，以已知陽性片為陽性對照。顯微鏡下觀察染色情況，Twist染色結果根據染色強度及陽性細胞占腫瘤細胞總數比例進行評分，在腫瘤細胞表達>5%為陽性。

1.2.1保留乳房手術 麻醉與消毒同常規乳腺癌乳房全切除術。切口兼顧腫瘤安全性、術野顯露和美容效果。推薦選擇腫物表面切口(上象限選擇弧形、下象限選擇放射狀)、環乳暈切口和符合皮膚自然紋理切口。兼顧中轉乳房全切除術的可能性。選擇縫線和(或)墨汁染色準確標記切除標本各切緣。快速冰凍病理學檢查于術中評價切緣狀態。切緣陽性患者需要繼續手術切除至切緣陰性或行全乳房切除。

1.2.2改良根治術 切口依腫瘤所在部位及乳房的大小、形態設計。游離皮瓣切開皮膚后，游離皮瓣最好采用電刀，不僅使術野干凈，也利于無瘤操作。切除乳腺自下內開始向上外將乳腺連同其深面的胸大肌筋膜一并分離，直至胸大肌外緣下。清掃胸大肌間淋巴結(Rotter淋巴結) 將翻起的乳腺向外拉緊，將胸大、小肌向內牽拉，沿胸大肌外緣與乳腺組織分界處縱向切開，顯露胸大、小肌間的脂肪及淋巴組織(Rotter淋巴結)，將其全部清除。清掃腋淋巴結將胸小肌向內向上提起，鎖骨下血管、腋血管全程暴露，從鎖骨下靜脈入胸處開始，沿鎖骨下靜脈下緣解剖，結扎切斷所有向下分支。引流 沖洗手術創面，接負壓吸引。

1.3 統計學方法數據采用SPSS 20.0進行統計分析。計數資料用n(%)表示，組間比較行χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床病理學特征比較兩組患者年齡、乳腺癌家族史、TNM分期、患者是否絕經、淋巴結轉移數以及腫瘤病理分期等方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者臨床病理學特征比較 [n(%)]

2.2 Ki-67、p53、E-cadherin及Twist在乳腺癌細胞中的表達情況免疫組化SP法下，E-cadherin陽性表達定位于癌細胞膜和細胞質，染成棕黃色為陽性，p53陽性表達主要定位于細胞核，癌細胞核中出現棕黃色顆粒著色表明為p53陽性細胞。Ki-67陽性表達定位于腫瘤細胞核，呈細小棕黃色顆粒彌漫分布，根據視野中陽性細胞比例進行染色結果分級。Twist陽性表達主要定位于癌細胞核與細胞質，呈棕褐色。見圖1。

圖1 Ki-67、p53、E-cadherin及Twist在乳腺癌細胞中的表達情況(SP，×400) a：乳腺癌腺上皮細胞膜及細胞質中E-Cadherin染色陽性(呈現棕黃色顆粒)；b:乳腺癌腺上皮細胞細胞核中p53陽性表達(呈現棕黃色顆粒)；c:乳腺癌腺上皮細胞細胞核Ki-67陽性表達 (呈現棕黃色顆粒)；d:乳腺癌腺上皮細胞細胞核Twist陽性表達(呈現棕褐色)

2.3 兩組患者Ki-67、p53、E-cadherin及Twist的表達情況比較觀察組患者的Ki-67、p53及Twist陽性表達率明顯高于對照組，E-cadherin陽性表達率明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組 Ki-67、p53、E-cadherin及Twist的表達情況比較 [n(%)]

3 討論

乳腺癌是一類存在明顯異質性的惡性腫瘤，其發生是一個多基因、多步驟且多階段的過程，臨床癥狀、組織學形態、免疫表型和臨床預后等存在很大差異。臨床上常見的判斷乳腺癌臨床預后主要是通過臨床分期、組織學分類分級、年齡、是否絕經和淋巴結轉移情況等。臨床常見的治療方法主要為手術治療、放化療治療等[3]。三陰性乳腺癌是乳腺癌的一種亞型，有著生存率差，腋窩淋巴結轉移率低，內臟淋巴結轉移率高的特點，近年來逐漸成為研究的熱點。

Ki-67蛋白是一種半衰期短的非組蛋白核蛋白，是臨床上檢測腫瘤細胞增殖活性的常見指標。Ki-67蛋白與多種惡性腫瘤的發展、淋巴結轉移及臨床預后密切相關。邢芳林等[4]研究認為，Ki-67蛋白的表達能夠反映患者惡性腫瘤增殖率，其高表達與患者的不良預后密切相關。本次研究結果表明，三陰性乳腺癌患者的Ki-67陽性表達率為90.28%，這一研究結果與鄭會爽等[5]的研究結果89.7%接近。且研究結果表明，Ki-67在觀察組患者及三陰性乳腺癌患者中的陽性表達率明顯高于對照組(非三陰性乳腺癌患者)，提示Ki-67在三陰性乳腺癌患者中的高表達可能導致患者腫瘤的惡性程度和較差的預后。本次研究結果表明，Ki-67的表達與患者年齡、有無乳腺癌家族史及是否絕經無明顯關系，與患者TNM分期、淋巴結轉移數和病理分期呈明顯相關。這與沈恩超等[6]的研究結果一致。李德鋒等[7]研究認為Ki-67的表達與患者淋巴結轉移密切相關。提示Ki-67的陽性表達與三陰性乳腺癌的發生發展有關，是一種不良預后因子。

p53基因位于17號染色體上，對細胞基因的完整性起一定的監督作用，與腫瘤的發生、發展密切相關。p53基因突變后，將會失去調控細胞增殖、細胞凋亡以及修復DNA的作用，轉變為癌基因，能夠導致細胞異常增生，引起細胞的轉化和癌變，最終導致惡性腫瘤的形成[8，9]。本次研究結果表明，p53的陽性表達率為69.44%，與馬少君等[10]研究中的三陰性乳腺癌患者陽性表達率76.19%接近。本次研究結果表明，p53的表達與患者TNM分期、淋巴結轉移數和病理分期呈明顯相關。這一研究結果與于強等[11]的研究結果一致。但同時也有賴靜等[12]報道認為，p53的臨床表達與患者的病理分級、淋巴結轉移無明顯相關性。熊輝等[13]研究認為，p53陽性患者的臨床預后較差，且5年生存率明顯低于陰性患者。

E-cadherin蛋白分布于所有的上皮組織中，是一種跨膜糖蛋白，起著膜固定作用，同時，在細胞外鈣離子的參與下，能夠介導同種細胞之間及細胞與細胞外基質粘附，能夠維持上皮完整性，同時能夠保持腫瘤細胞間密切接觸等。E-cadherin表達正常時，腫瘤細胞不易從原發灶脫落，下調甚至缺失時，則容易導致腫瘤細胞連接松散，易脫落，同時腫瘤細胞接觸抑制喪失，導致腫瘤細胞無限制增長，同時獲得了較強的侵襲能力[14]。本次研究中，觀察組患者E-cadherin的陽性表達率59.72%明顯低于對照組76.39%，差異有統計學意義(P<0.05)。同時，E-cadherin的表達與患者TNM分期、淋巴結轉移數和病理分期呈明顯相關[15]。E-cadherin的表達在乳腺導管癌和乳腺小葉癌中存在明顯差異，通過免疫組化法標記E-cadherin能夠進行鑒別診斷。

Twist蛋白是一種癌基因蛋白，與惡性腫瘤的形成、淋巴結轉移和侵襲之間密切相關，是臨床評價腫瘤藥物臨床療效的標志物之一。目前認為，Twist在胚胎的發育過程中，起到組織重組及引發細胞移動的作用，通過與靶基因結合，能夠起到調節下游基因表達的作用。本次研究結果表明，Twist陽性表達率為76.39%，明顯高于對照組患者52.78%，提示Twist能夠抑制E-cadherin的轉錄表達，使腫瘤細胞侵襲性增強，同時，Twist能夠通過阻斷p53腫瘤抑制通路，促進腫瘤的發生和發展[16]。

綜上所述，檢測Ki-67、p53、E-cadherin和Twist的表達情況對于判斷三陰性乳腺癌惡性程度、增殖能力及侵襲性有著重要意義，能夠幫助判斷三陰性乳腺癌患者的臨床療效和預后。