非小細胞肺癌手術前后長鏈非編碼RNA水平變化及其與預后的關系

楊 冉，韓金利，侯建彬，耿明飛

(河南省安陽市腫瘤醫院，河南 安陽 455000)

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)約為肺癌總數量的80%[1]，而長鏈非編碼RNAs(long noncoding RNAs，LncRNAs)是轉錄本長度>200 nt的ncRNA，為新發現的一類調控型ncRNA[2]，近期研究[3]發現中國肺癌患者LncRNA多態性與鉑類化療毒性之間有密切關聯，因而LncRNAs也成為NSCLC中的研究熱點話題。母系表達基因3(maternally expressed gene 3，MEG3)屬于LncRNAs，有抑癌作用，是首個發現具備抑癌功能的LncRNA，可抑制腫瘤血管生成，阻滯細胞周期[4]，LncRNA RAB11B-AS1屬于反義LncRNA，能經各種不同的機制對基因表達發揮調控作用，而LncRNA H19則位于人染色體11p5.5，在胚胎時期高表達而在出生后下降，可于表觀遺傳、轉錄水平調控細胞分化、增殖、凋亡，介導惡性腫瘤進展[5]，然而目前關于這三項LncRNA與NSCLC的關系報道較少。本文分析NSCLC患者手術前后LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化及其與預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2017年4月至2018年5月我院收治的NSCLC患者90例(惡性組)，納入標準：①經病理組織學確診；②對本次研究方案知情同意；③均為初診，術前未行治療，術后完成規律隨訪。排除標準：①同時患有其他類型的惡性腫瘤；②資料不全/既往接受過抗腫瘤治療者；③入組前5個月內接受過手術治療。其中男53例，女37例，年齡36～71歲[(54.14±5.57)歲]；腫瘤直徑<3 cm 32例、≥3 cm 58例；病理類型：腺癌50例，鱗癌31例，其他9例；分化程度：低、中、高分別為53、20、17例；有淋巴結轉移53例；有遠處轉移21例；TNM分期：Ⅰ期13例、Ⅱ期36例、Ⅲ期33例、Ⅳ期8例。另選擇同期肺良性腫瘤者54例(良性組)、健康體檢人群30例(對照組)。良性組男32例、女22例，年齡36～73歲[(54.15±5.42)歲]；腫瘤類型：肺炎性假瘤24例，結核瘤16例，錯構瘤8例，硬化性血管瘤4例，其他2例。對照組男18例、女12例，年齡39～70歲[(54.09±5.51)歲]。三組基線資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。本研究獲得我院倫理委員會批準(AYSZLYY20170207)。

1.2 方法

1.2.1血清LncRNAs水平測定 取入組對象3 ml晨空腹靜脈血，離心分離血清。應用Total RNA Kit(上海索寶生物科技有限公司)提取出總RNA，后予以瓊脂糖凝膠電泳。逆轉錄試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司)合成cDNA，加正反引物各0.8 μl。實時熒光定量PCR系統下，經qRT-PCR測定各LncRNAs水平。

1.2.2資料收集與隨訪 收集所有NSCLC患者基線資料。均接受手術治療，在術后3天繼續采用上述方法測定血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平。同時接受隨訪，截止時間為2021年5月，統計總生存時間(OS)。

1.3 觀察指標①比較三組血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平；②分析患者手術前后血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化；③以LncRNA平均值為分界線，分成高表達組、低表達組，對比其預后情況，分析血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平與預后的關系。

1.4 統計學方法采用SPSS 23.0軟件處理數據。計量資料比較采用單因素方差分析及LSD-t檢驗、配對樣本t檢驗；計數資料比較采取χ2檢驗；繪制Kaplan-Meier曲線分析NSCLC患者術后3年內生存情況；采用Cox多因素回歸法分析影響NSCLC預后的危險因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平比較惡性組中，LncRNA MEG3高表達35例、低表達55例，LncRNA RAB11B-AS1高表達49例、低表達41例，LncRNA H19高表達46例、低表達44例。惡性組血清LncRNA MEG3水平低于良性組及對照組，LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平均高于良性組及對照組(P<0.05)。見表1。

表1 三組血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平比較

2.2 手術前后血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化NSCLC患者手術后血清LncRNA MEG3水平高于手術前，血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平均低于手術前(P<0.05)。見表2。

表2 手術前后血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化

2.3 血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平與預后的關系LncRNA MEG3高表達組OS(32.60個月)較LncRNA MEG3低表達組(28.03個月)明顯延長(Log Ran=6.536，P=0.010)，LncRNA RAB11B-AS1高表達組OS(28.20個月)較LncRNA RAB11B-AS1低表達組(32.66個月)縮短(Log Rank=5.789，P=0.016)，LncRNA H19高表達組OS(28.05個月)較LncRNA H19低表達組(33.00個月)縮短(Log Rank =6.416，P=0.011)。見圖1～圖3。

圖1 LncRNA MEG3水平與預后的關系

圖2 LncRNA RAB11B-AS1水平與預后的關系

圖3 LncRNA H19水平與預后的關系

2.4 NSCLC患者預后的影響因素分析COX回歸分析發現，腫瘤大小(≥3 cm)及遠處轉移、TNM分期(Ⅲ～Ⅳ期)、LncRNA MEG3低表達、LncRNA RAB11B-AS1高表達、LncRNA H19高表達均是NSCLC預后獨立性危險因素(P<0.05)。見表3、表4。

表3 影響NSCLC患者預后的單因素分析

表4 影響NSCLC患者預后的多因素分析

3 討論

LncRNAs可通過多途徑調控細胞增殖、分化，在惡性腫瘤中起著重要作用[6，7]，近年來LncRNAs也被作為NSCLC的潛在靶點[8]。LncRNA MEG3有抑癌作用，研究[9]發現，LncRNA MEG3表達下調后會激活WNT/β-catenin信號通路兒增強肺癌細胞順鉑耐藥性，LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19也是目前參與NSCLC病變的LncRNAs，均可調控多種基因表達，從而參與腫瘤微血管、侵襲與轉移[10]。Li等[11]發現，MEG3的甲基化及低表達可預測乳腺癌患者預后不良，但目前關于LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19與NSCLC的預后關系研究甚少。

本次發現惡性組血清LncRNA MEG3呈低表達，而LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19呈較高表達水平，同時NSCLC患者的術后血清LncRNA MEG3高于手術前，而血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19低于手術前，表明NSCLC患者在手術前后血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19可得到明顯改善。LncRNA MEG3位于染色體14q32上，全長1.6 kb，為一種不包含閱讀框的LncRNA，以RNA形式發揮功能，在正常情況下人類垂體組織中LncRNA MEG3高表達，但垂體出現腫瘤后會降低或缺失，其表達濃度降低與腫瘤浸潤有關，Lv等[12]發現LncRNA MEG3可對miR-21-5p/PTEN軸進行調控而抑制NSCLC的遷移、侵襲；LncRNA RAB11B-AS1則也參與腫瘤增殖、遷移及侵襲，早期Li等[13]的研究表明，上調 LncRNA RAB11B-AS1可促進肺癌腫瘤轉移，并預測其不良預后；LncRNA H19為最早被發現的LncRNAs，Zhang等[14]發現，LncRNA H19可靶向調控miR-484以促進肺癌細胞的上皮間質轉化。

Zhang等[15]來自GEO 數據庫證據發現，LncRNA-MEG3在NSCLC患者中表達水平抑制或缺失，其OS或無進展生存期和LncRNA-MEG3低表達有密切關系(尤其是≤60歲者)；Li等[16]發現，LncRNA RAB11B-AS1上調可促進腫瘤轉移并預測肺癌不良預后；Zhou等[17]發現，LncRNA H19與NSCLC生物學特征、預后有密切聯系。本次研究發現，不同LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19表達水平的患者預后差異均有顯著性，多因素分析也表明LncRNA MEG3低表達、LncRNA RAB11B-AS1高表達、LncRNA H19高表達均為NSCLC預后獨立危險因素，提示LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19參與NSCLC發生發展，可作為其預后的潛在分子標志物，但關于此三類LncRNA在NSCLC預后中的具體作用機制及相關信號通路需進一步開展研究進行探討。

綜上所述，NSCLC手術前后LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19發生明顯變化，且與患者的預后有密切關系，可作為預后分子標志物。