血清抗血管內(nèi)皮細胞抗體、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在類風濕關(guān)節(jié)炎患者中的變化與病情活動、預后的關(guān)系

楊茂益，李 敏，劉尚麗，梁 翼

(四川省骨科醫(yī)院風濕骨關(guān)節(jié)病科，四川 成都 610000)

類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthrids，RA)系自身免疫性疾病的一種，主要以累及周圍關(guān)節(jié)為主。以對稱、持續(xù)性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)，致殘率高，嚴重威脅患者的身體健康[1]。相關(guān)研究表示，早期RA患者經(jīng)治療后預后較好，但該癥早期病情隱匿，故如何早期檢測RA對保障患者預后具有重要作用[2]。血清抗血管內(nèi)皮細胞抗體(Anti endothelial cell anti-bodies，AECA)是血管內(nèi)皮細胞受損的分子標志物；其通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞功能或激活補體及抗體，使細胞介導發(fā)揮細胞毒作用于血管內(nèi)皮損傷，是觸發(fā)血管病變的重要因素[3]。而大量研究發(fā)現(xiàn)，多種自身免疫性疾病有大量免疫細胞參與，調(diào)節(jié)性T細胞在其發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[4]。另研究顯示血小板參數(shù)在RA患者呈高濃度狀態(tài)，然而其表達與RA患者各項臨床指標及預后的關(guān)系尚不明確。本研究就 AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在RA患者中的變化及與病情活動、預后的關(guān)系進行研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年6月至2018年6月在我院接受診治的120例RA患者為研究組，納入標準：①研究組患者臨床表現(xiàn)及實驗室相關(guān)檢查符合2010年歐洲風濕病聯(lián)盟和美國風濕病學會類風濕關(guān)節(jié)炎分類標準[5]；②研究對象資料真實完整；③RA患者均未接受相關(guān)治療；④患者及家屬對本研究知情同意并且簽署知情同意書。排除標準：①影響血小板數(shù)量疾病者；②嚴重精神疾患或癡呆等無法配合本研究者；③存在重要臟器或內(nèi)分泌、血液系統(tǒng)病變者；④存在精神疾病無法配合本研究或依從性差者。120例RA患者中男76例，女44例，年齡21～72歲[(53.21±6.37)歲]，病程(4.71±5.08)年；另根據(jù)患者類風濕關(guān)節(jié)炎患者的疾病情況分為活動期及緩解期各60例。并選取同期進行健康檢查的正常人群96例作為對照組，男61例，女35例，年齡20～71歲[(53.72±6.51)歲]，各組基線資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 方法對研究者資料進行收集，比較AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在RA患者的變化及在病情活動的變化情況；并對RA患者預后進行記錄，分析影響RA患者預后不良的危險因素。

1.3 觀察指標①樣本收集：取受檢者清晨空腹靜脈全血5 ml，采用未加抗凝劑的標準采樣管進行采集，離心(3000 r/min，10 min)取血清后分別存放在聚丙烯EP管中，在-80 ℃冰柜中待檢。②AECA檢測：以免疫熒光法進行，試劑盒選取德國歐蒙實驗診斷公司，操作者需謹慎按照說明書進開展檢驗。③調(diào)節(jié)性T細胞檢測：予以美國Beckm an Coulter公司的流式細胞儀，測定CD4+CD25+highT細胞占CD4+T細胞的百分率。④血小板參數(shù)檢測：采用Beckman Coulter公司DxH800血細胞分析儀對研究對象的血小板相關(guān)參數(shù)進行測定，包括：血小板計數(shù)、血小板比容、平均血小板體積、血小板分布寬度。⑤生化指標檢測：應用日立7600型生化儀，采用上海北加生物公司試劑，測定甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平。

1.4 隨訪本研究隨訪從患者治療開始，直至患者本研究的隨訪結(jié)束，為期2年，截止于2020年6月。患者的隨訪時間2～24個月[(15.71±5.93)個月]。隨訪方式主要采用電話隨訪、微信隨訪及患者來院復查為主。其中根據(jù)RA患者預后評分標準[6]：分為近期控制、顯效、有效、無效。

1.5 統(tǒng)計學方法應用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以n(%)表示，比較采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標準差描述，比較采用t檢驗和F檢驗；采用多元Logistic回歸分析影響類風濕關(guān)節(jié)炎患者預后不良的危險因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對照組AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)比較研究組AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板各參數(shù)水平明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 研究組與對照組AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)比較

2.2 活動期與緩解期RA患者與對照組AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)比較活動期與緩解期患者AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板各參數(shù)水平明顯高于對照組，且活動期AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板各參數(shù)水平高于緩解期患者(P<0.05)。見表2。

表2 活動期與緩解期患者與對照組AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)比較

2.3 RA患者預后情況120例患者經(jīng)兩年隨訪后顯示，近期控制41例(34.16%)，顯效25例(20.83%)，有效16例(13.33%)，預后良好率為82例(68.33%)，38例患者治療無效，預后不良率為31.66%。

2.4 RA不同預后患者相關(guān)資料比較預后良好和預后不良患者的年齡、BMI、性別、合并糖尿病、合并高血壓、吸煙、寒冷潮濕環(huán)境暴露、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇等占比比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；AECA、調(diào)節(jié)性T細胞、血小板計數(shù)、血小板比容、平均血小板體積、類風濕因子、血小板分布寬度等占比比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 RA不同預后患者相關(guān)資料比較

2.5 RA患者預后不良的影響因素分析患者AECA陽性數(shù)、血小板計數(shù)、血小板比容、調(diào)節(jié)性T細胞、血小板分布寬度、平均血小板體積異常為RA患者預后不良的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 RA患者預后不良的影響因素分析

3 討論

RA早期癥狀不明顯且進展迅速，單純的依靠臨床表現(xiàn)和進展情況對患者預后進行評估缺乏準確性和特異性。因此尋求與RA生長及發(fā)展有關(guān)的分子標志物，對于RA的初步篩查、診斷、治療和預后判斷尤為重要[7]。

3.1 AECA在RA患者中表達水平及其與患者病情預后的關(guān)系研究證明，AECA可與血管內(nèi)皮細胞中多種蛋白結(jié)合，影響細胞功能，影響風濕性疾病的發(fā)病[8]。血管內(nèi)皮損傷時基底膜抗原暴露，抗體間結(jié)合可形成免疫復合物，AECA是引發(fā)血管病原必要因素[9]。Yuanyuan等[10]對相關(guān)性血管炎ACEA靶抗原進行分離發(fā)現(xiàn)，血管炎中AECA抗原分子量高，異質(zhì)性大。Inamura等[11]對RA患者進行研究顯示，RA患者中AECA陽性率顯著高于骨關(guān)節(jié)炎及健康人群，且RA活動期患者AECA陽性率高。本研究對RA患者與正常人群AECA及活動期和緩解期患者進行檢測發(fā)現(xiàn)與上述研究一致，提示AECA與RA患者的疾病進展具有密切關(guān)系。同時，對患者進行隨訪預后調(diào)查情況顯示，AECA陽性數(shù)是影響RA患者預后的危險因素，表明AECA可能作用于RA的進展與患者的不良預后相關(guān)，提示其可作為RA患者一個潛在的預后分子生物學標志物。

3.2 調(diào)節(jié)性T細胞在RA患者中表達水平及其與患者病情預后的關(guān)系目前臨床上所知，RA主要為細胞紊亂引發(fā)自身免疫疾病[12]。而細胞免疫中最重要的免疫調(diào)控因子就是T細胞，該細胞的表達可有效反映機體的免疫調(diào)節(jié)功能[13]。其中，CD4+占T淋巴細胞的2/3，且超過50%的細胞表面活性抗原呈高表達狀態(tài)；而CD25+是反映細胞活化的標志[14]。相關(guān)研究對系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫性疾病研究發(fā)現(xiàn)，活化的CD4+引發(fā)細胞因子產(chǎn)生級聯(lián)放大反應，激活多種細胞產(chǎn)生黏附因子，使局部炎癥細胞增生[15]。Hu等[16]通過研究發(fā)現(xiàn)RA患者調(diào)節(jié)性T細胞的水平升高與機體存在炎癥反應或自我保護機制有關(guān)。本研究結(jié)果亦顯示調(diào)節(jié)性T細胞在RA患者中顯著上升，且為影響RA患者預后不良的危險因素，提示調(diào)節(jié)性T細胞在RA的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著免疫評估的作用。這與Wang[17]等研究結(jié)果相似，提示調(diào)節(jié)性T細胞可作為評價RA患者預后的潛在分子標志物之一。

3.3 血小板參數(shù)在RA患者中表達水平及其與患者病情預后的關(guān)系近年來臨床實驗發(fā)現(xiàn)，70%活動期RA患者存在血小板計數(shù)增高的情況；血小板參數(shù)與RA患者炎癥、免疫及疾病進展密切相關(guān)[18]。Redfors等[19]研究顯示，血小板可定位于RA活動期滑膜炎病灶中，靜止期關(guān)節(jié)則內(nèi)不出現(xiàn)，在RA患者關(guān)節(jié)滑膜及血液中可檢測到血小板特異性蛋白，考慮血小板在RA發(fā)病中發(fā)揮作用。進一步分析相關(guān)機制在于：活化的血小板可表達P選擇素，P選擇素又可以與白細胞的P選擇素糖蛋白配體-1結(jié)合形成復合物，滑膜血管內(nèi)皮細胞可吞噬其復合物，并在趨化因子、補體及其他黏附分子的協(xié)同作用下，遷移滲出至滑膜組織間隙，引起滑膜的免疫反應及炎性損傷，并加重患者病情[20]。本研究通過對RA患者活動期及緩解期血小板參數(shù)水平比較發(fā)現(xiàn)，活動期患者血小板各參數(shù)明顯高于緩解期，說明血小板活化可加重RA患者疾病進展，參與RA病理發(fā)生發(fā)展過程。同時本文結(jié)果顯示，血小板各項參數(shù)為影響RA患者預后不良的危險因素，說明血小板參數(shù)與RA的發(fā)展關(guān)系密切，可將其作為預測RA患者病情活動及預后的有效指標。

綜上，AECA、調(diào)節(jié)性T細胞及血小板參數(shù)在RA患者中明顯升高，且與患者預后關(guān)系密切，可作為預測RA患者預后的分子標志物和治療的潛在的靶點。此外，由于本研究納入樣本量較少，實驗結(jié)果難免存在偏倚，后續(xù)將擴大樣本量進一步研究，以獲得更為準確的實驗結(jié)果。