連花清瘟制劑化學成分、藥理作用、臨床應用的研究進展

成 蕾，劉 洪，王婷婷，吳新玉，鄧 艷，李 煉，徐永壽，葉林虎,3*

(1.畢節市第一人民醫院，貴州 畢節 551700；2.貴陽市第四人民醫院，貴州 貴陽 550000；3.遵義醫科大學，貴州 遵義 563000)

連花清瘟制劑是以中醫理論為基礎，并結合臨床經驗研制的現代中藥復方制劑，由魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、連翹、石膏、板藍根、甘草、綿馬貫眾、炙麻黃、炒苦杏仁、薄荷腦、金銀花提取加工而成，功能主治清瘟解毒、宣肺泄熱，用于治療流行性感冒屬熱毒襲肺證，證見發熱或高熱，惡寒，肌肉酸痛，鼻塞流涕，咳嗽，頭痛，咽干咽痛，舌偏紅，苔黃或黃膩[1]，目前相關臨床劑型有片劑、膠囊、顆粒，主要用于治療流行性感冒、新型冠狀病毒肺炎、手足口病等[2-5]。近年來，國內學者陸續開展了連花清瘟制劑化學成分、藥理作用、臨床應用的研究，尤其是在新型冠狀病毒肺炎發生后，其抗病毒作用更是受到廣泛關注，但至今鮮有全面綜述報道[6-7]。因此，本文對連花清瘟制劑化學成分、藥理作用、臨床應用的研究進展進行梳理，以期為其深入研究開發和臨床合理應用提供依據。

1 化學成分

1.1 環烯醚萜 連花清瘟制劑中環烯醚萜的結構主要分為環烯醚萜苷、裂環環烯醚萜[8-11]，包括五福花苷酸 (adoxosidic acid,1)、馬錢酸 (loganic acid,2)、馬錢苷 (loganin,3)、開聯番木鱉苷二甲基乙縮醛 (secologain dimethyl acetal,4)、連花萜苷A (lianhua iridoid A,5)、莫諾苷 (morroniside,6)、當藥苷 (sweroside,7)、斷氧化馬錢子苷 (secoxyloganin,8)、vogeloside (9)、epi-vogeloside (10)等，見圖1。

圖1 連花清瘟制劑中環烯醚萜結構

1.2 木脂素 從連花清瘟制劑中鑒定出8個木脂素[9-12]，結構包括雙環氧木脂素、雙四氫呋喃，其中前者主要包括連翹苷(phillyrin,11)，后者主要包括為松脂醇 (pinoresinol,12)、松脂素單甲醚 (pinoresinol monomethyl ether,13)、(+)-松脂素[(+)-pinoresinol,14]、表松脂醇 (epi-pinoresinol,15)、表松脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷 (epipinoresinol-4′-O-β-D-glucoside,16)、鵝掌楸苷 (liriodendrin,17)、羅漢松脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷 (matairesinol-4′-O-β-D-glucoside,18)等，見圖2。

圖2 連花清瘟制劑中木脂素結構

1.3 黃酮 黃酮連花清瘟制劑中一類重要的化合物[8,10-11]，主要包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷 (kaempferol-3-O-α-L-rhamnoside,19)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷 (quercetin-3-O-α-L-rhamnoside,20)、山柰酚 (kaempferol,21)、槲皮苷 (quercitrin,22)、刺芒柄花素 (formononetin,23)、柚皮素 (naringenin,24)、芹糖甘草苷 (liquiritin apioside,25)[6]、異甘草素 (isoliquiritigenin,26)[8]，見圖3。

圖3 連花清瘟制劑中黃酮結構

1.4 蒽醌 連花清瘟制劑中含有多種蒽醌[9-11,13]，分別為大黃酸 (rhein,27)、ω-羥基大黃素 (citreorosein,28)[8]、蘆薈大黃素 (aloe-emodin,29)、大黃素甲醚 (physcion,30)、大黃素 (emodin,31)、大黃酚 (chrysophanol,32)、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (emodin-8-O-β-D-glucopyranoside,33)、大黃酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside,34)、大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (chrysophanol-1-O-β-D-glucopyranoside,35)、蘆薈大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(aloe emodin-8-O-β-D-glucoside,36)、大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (physcion-8-O-β-D-glucopyranoside,37)等，見圖4。

圖4 連花清瘟制劑中蒽醌結構

1.5 苯乙醇苷 苯乙醇苷是連花清瘟制劑中一類重要的化合物[12]，主要包括calceolarioside C (38)、lianqiaoxinoside C (39)、1ugrandoside (40)、連翹酯苷A (forsythoside A,41)、連翹酯苷I (forsythoside I,42)、連翹酯苷H (forsythoside H,43)、連翹酯苷E (forsythoside E,44)、ferruginoside B (45)、isolugrandoside (46)、ferruginoside A (47)、cornoside (48)，見圖5。

圖5 連花清瘟制劑中苯乙醇苷結構

1.6 氰苷 目前，從連花清瘟制劑中鑒定出3種氰苷[12]，分別為D-苦杏仁苷 (D-amygdaloside,49)、L-苦杏仁苷 (L-amygdaloside,50)、sambunigrin (51)，見圖6。

圖6 連花清瘟制劑中氰苷結構

1.7 酚酸 目前，從連花清瘟制劑中只鑒定出4種酚酸[10,12]，分別為沒食子酸 (gallic acid,52)、苯甲酸 (benzoic acid,53)、3,4-二羥基苯甲醛 (3,4-dihydroxy benzaldehyde,54)，反式對羥基肉桂酸乙酯[(E)-ethyl 3-(4-hydroxyphenyl)acrylate,55]，見圖7。

圖7 連花清瘟制劑中酚酸結構

1.8 生物堿 目前，從連花清瘟制劑中只鑒定出2種生物堿[11]，分別為cepharanone B (56)、胡椒內酰胺A (piperolactam A,57)，見圖8。

圖8 連花清瘟制劑中生物堿結構

1.9 其他成分 此外，還在連花清瘟制劑中鑒定出咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester,58)[8]、4-hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone (59)[12]、β-谷甾醇 (β-sitosterol,60)[10]等，見圖9。

圖9 連花清瘟制劑中其他化合物結構

2 藥理作用

2.1 抗病毒 連花清瘟膠囊對流感病毒、呼吸道合胞病毒、SARS-CoV病毒都有一定抑制作用，連花清瘟顆粒對體外嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)、中東呼吸綜合征冠狀病毒 (MERS-CoV)也呈現出抑制活性，并被《中東呼吸綜合征病例診療方案 (2015年版)》納為治療藥物[14]。

2.1.1 流感病毒 研究表明，連花清瘟在體外能抑制流感病毒的增殖及病毒誘導的NF-κB活化，下調病毒誘導的IL-6、IL-8、TNF-α、IP-10、MCP-1表達，臨床上可用于對抗常規季節性流感病毒[15]。文獻[16]報道，連花清瘟的抗流感病毒作用與其活性成分抑制流感病毒的蛋白酶有關。

2.1.2 呼吸道合胞病毒 丁月文等[17]建立BALB/c小鼠呼吸道合胞病毒 (RSV)感染模型，觀察小鼠肺內病毒滴度、肺內炎癥因子mRNA表達、肺組織病理變化，發現連花清瘟顆粒可有效抑制小鼠肺內RSV感染，改善小鼠病毒性肺炎，其作用機制與降低肺內炎癥因子白細胞介素IL-6、IL-1β mRNA表達有關。

2.1.3 SARS-CoV病毒 朱舜亞等[18]通過體外病毒株培養實驗研究發現，連花清瘟膠囊對SARS-CoV病毒有一定的抑制作用。Li等[19]發現，連花清瘟可通過抑制病毒復制，引起病毒顆粒形體改變，抑制宿主細胞炎癥因子表達，從而發揮抗SARS-CoV-2病毒的作用。陳爽等[20]通過網絡藥理學研究發現，連花清瘟制劑中的連翹和金銀花是治療COVID-19的關鍵藥物，可通過調節關鍵靶點、調控炎癥反應、調控細胞凋亡、介導免疫反應等過程抑制病毒復制，引起病毒顆粒形體改變及抑制宿主細胞炎癥因子表達，從而發揮抗SARS-CoV-2病毒的作用，最終減輕肺損傷來緩解COVID-19。Chen等[21]采用ACE2生物色譜法，對連花清瘟中具有潛在ACE2靶向能力的成分進行藥效學評估，發現方中大黃酸、連翹酯苷A、連翹酯苷I、新綠原酸及其異構體對ACE2具有較高的抑制作用，并可通過影響ACE2與S蛋白之間的結合來對SARS-CoV-2起到抑制作用，從而緩解COVID-19癥狀。馬穎等[22]報道，連花清瘟膠囊可影響ACE2表達來阻斷SARS-CoV-2入侵，并通過抑制炎癥、減輕肺損傷來治療COVID-19。Zhang等[23]采用網絡藥理學對連花清瘟制劑中活性成分、宿主靶標、SARS-CoV-2靶標進行研究，發現方中槲皮素、漢黃芩素、山奈酚等黃酮與SARS-CoV-2 3-CL pro結合后可抑制SARS-CoV-2，進而緩解COVID-19癥狀。王旭杰等[24]通過網絡藥理學與分子對接的方法對連花清瘟膠囊中各成分及其入血物質所對應靶點進行研究，發現大黃素、蘆薈大黃素、山奈酚、蘆丁等可能通過調節IL-6、IL1-0、TNF、CCL2、MAPK14等來改善COVID-19患者的相關免疫學指標。研究表明，連花清瘟制劑能減少SARS-CoV-2宿主細胞胞膜和胞漿中病毒含量及宿主細胞炎癥因子的過度激活，從而發揮抗SARS-CoV病毒的作用[25]。Liu等[26]通過Meta分析發現，連花清瘟制劑能通過抑制SARS-CoV-2病毒繁殖和調節免疫功能來減輕COVID-19癥狀。

2.2 抗炎作用 崔雯雯等[27-28]采用脂多糖(LPS)誘發小鼠急性肺損傷(ALI)模型，發現連花清瘟膠囊可減輕肺超微結構損傷，發揮對肺組織的保護作用，其機制與該制劑增加肺內連接蛋白表達、抑制炎癥細胞聚集、降低多種炎癥因子水平、抑制NF-κB信號通路激活有關。許寧等[29]采用細顆粒物(PM2.5)致大鼠肺部炎性損傷模型，發現連花清瘟制劑可通過降低支氣管肺泡灌洗液及血清中TNF-α、IL-6、IL-1、TNF-α水平來發揮保護作用，并呈劑量依賴性。夏敬文等[30]利用香煙熏吸法建立大鼠慢性阻塞性肺病(COPD)模型，發現連花清瘟膠囊能通過顯著降低血清、肺組織及支氣管肺泡灌洗液中IL-8、TNF-α水平來發揮抗COPD氣道炎癥的作用。唐思文等[31]報道，連花清瘟膠囊能改善汽車尾氣造成的肺組織病理損傷，其作用機制可能與降低血液里炎性因子水平，降低肺部炎性因子的蛋白和mRNA表達有關。陳之力等[32]將自體血凝塊反復注入主肺動脈建立急性肺栓塞(APE)家兔模型，發現連花清瘟膠囊能通過顯著降低肌鈣蛋白(cTnI)、NT-N端前腦鈉肽(NT-proBNP)、TNF-α、IL-6、IL-1β水平來減少機體炎癥水平。

2.3 抗菌作用 雷洪濤等[33-34]采用微量稀釋法發現，連花清瘟膠囊可抑制金黃色葡萄球菌生物膜的形成。史利克等[35]報道，連花清瘟制劑能降低美羅培南的最小抑菌濃度(MIC)，提高耐碳青霉烯類鮑氏不動桿菌 (CR-AB)對美羅培南的敏感性，兩者聯用具有協同作用，其作用機制可能破壞鮑氏不動桿菌細胞膜后，美羅培南再進入其細胞內發揮作用。王藝竹等[36]研究表明，連花清瘟膠囊水提物不但可抑制耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成，破壞成熟膜，還能顯著減少生物膜中活菌和死菌數量。

2.4 抗腫瘤作用 文翔昊等[37]通過體外細胞實驗發現，連花清瘟膠囊具有抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖并誘導其凋亡的作用。

3 臨床應用

3.1 肺部疾病

3.1.1 COVID-19 余平等[38]報道，連花清瘟顆粒聯合阿比多爾能下調COVID-19患者的C反應蛋白和降鈣素原表達，有效緩解臨床癥狀，降低臨床轉重癥率，提高療效。Liu等[39]發現，連花清瘟膠囊聯合阿比多爾可以更有效地改善COVID-19患者癥狀，加速SARS-CoV-2清除。姚開濤等[40]通過回顧性研究表明，連花清瘟顆粒能明顯改善COVID-19患者發熱、咳嗽、咳痰、氣促癥狀。柳麗麗等[41]研究連花清瘟膠囊治療COVID-19的療效及安全性的過程中，發現連花清瘟膠囊聯合阿比多爾治療COVID-19時患者耐受性良好，能縮短患者住院時間及治療時間。Hu等[42]采用多中心、前瞻性、隨機對照試驗，發現連花清瘟膠囊可顯著改善COVID-19患者的臨床癥狀，而且未報告嚴重不良事件。此外，多項臨床療效、網絡藥理學與系統評價研究也表明，連花清瘟治療COVID-19具有較好的臨床療效[43-46]。

3.1.2 社區獲得性肺炎 胡小清等[47]報道，連花清瘟膠囊聯合注射用頭孢呋辛鈉時可顯著降低社區獲得性肺炎患者TNF-α、超敏C反應蛋白、降鈣素原等血清標志物水平，有效緩解臨床癥狀，不良反應少。周珍等[48]通過Meta分析發現，連花清瘟膠囊輔助治療社區獲得性肺炎效果良好，可縮短癥狀緩解時間、影像轉歸時間，不良反應少。

3.1.3 上呼吸道感染伴肺炎 趙明敬等[49]觀察連花清瘟膠囊在1 000例外感風熱急性上呼吸道感染患者中的療效及不良反應，發現該制劑療效顯著，安全性較好。王衛紅[50]報道，連花清瘟膠囊對上呼吸道感染所致肺炎療效顯著，在改善發熱、咳嗽等癥狀和控制肺部感染方面具有良好的效果。張捷等[51]通過Meta分析也表明,連花清瘟膠囊治療上呼吸道感染的臨床效果顯著，安全性較好。

3.1.4 小兒肺炎支原體肺炎 陳列強等[52]報道，連花清瘟顆粒可快速緩解小兒肺炎支原體肺炎患兒臨床癥狀，降低血清炎癥因子水平，而且較為安全。吳麗引等[53]通過Meta分析發現，連花清瘟制劑聯合西藥治療小兒肺炎支原體肺炎較用西藥有一定的優勢。

3.2 急性化膿性扁桃體炎 陳雷[54]發現，連花清瘟膠囊可改善急性化膿性扁桃體炎患者病情，促進體溫恢復。

3.3 小兒皰疹性咽峽炎 張凌云[55]報道，連花清瘟顆粒聯合抗病毒西藥治療小兒皰疹性咽峽炎療效顯著，安全性較好。原全利[56]通過臨床觀察研究也表明，連花清瘟顆粒在治療皰疹性咽峽炎方面療效確切。

3.4 手足口病 盛雄等[57]通過臨床隨機分組觀察連花清瘟顆粒治療369例手足口病的臨床療效，發現該制劑可緩解癥狀，縮短病程，療效確切。何煒等[58]通過臨床隨機分組觀察蓮花清瘟顆粒治療EV71手足口病療效，發現該制劑在體溫持續時間、進食改善時間、皮疹結痂時間方面均明顯優于對照，療效顯著。莫慶儀等[59]報道，連花清瘟顆粒聯合單磷酸阿糖腺苷后兒童手足口病患兒血清TNF-α、IL-6、C反應蛋白水平顯著降低，表明該制劑可減輕機體炎癥反應，迅速緩解相關癥狀體征，療效確切。

4 不良反應

4.1 胃腸道 施麗霞等[60]報道，連花清瘟制劑主要不良反應表現為腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐、上腹部不適、腹脹等，與方中連翹、金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、魚腥草、大黃等寒涼藥材有關[61]，它們容易損傷脾胃，如果空腹服用則對胃腸道刺激更明顯，嚴重時會引起胃痛、胃寒、食欲不振等，幼兒脾胃功能尚未健全，更容易發生上述不良反應[62]。因此，為了降低胃腸道反應，建議臨床使用連花清瘟制劑時最好在餐后服用。

4.2 其他 除了胃腸道不良反應外，還有少量關于連花清瘟膠囊致皮疹和過敏性蕁麻疹、瘙癢、神經系統損害等報道[60-61,63]，但其過敏原因尚不明確。

5 質量控制

目前，《中國藥典》僅以連翹苷為連花清瘟制劑質量控制指標，尚未涉及其他成分的定量測定和限量標準。李洪斌等[64]采用RP-HPLC法測定連花清瘟膠囊中鹽酸麻黃堿含量，發現該方法準確穩定，重復性好，可用于該制劑質量控制。許紅輝等[65]通過TLC法對連花清瘟制劑中大黃、金銀花、薄荷腦、甘草、麻黃進行定性鑒別，并采用HPLC法測定連翹苷含量。陳蕾等[66]通過HPLC法測定連花清瘟膠囊中苦杏仁苷含量，為該制劑質量控制提供科學依據。陳靜嫻等[13]通過分散固相萃取-HPLC法聯用技術，建立測定金銀花及連花清瘟膠囊中環烯醚萜苷類成分的提取和分析方法，可為中藥及其復方制劑復雜基質中成分的提取、純化、分析和質量控制研究提供新思路。蘇愛國等[67]通過HPLC法建立連花清瘟膠囊多成分含量測定和指紋圖譜分析方法,可為該制劑質量控制提供更可靠的評價依據。

6 展望

近年來，國內外學者對連花清瘟制劑化學成分、藥理作用、臨床應用進行了大量研究，雖然目前從中鑒定了60種成分，但仍有許多種類不明確，并且在藥理作用及機制、臨床聯合用藥(尤其是藥物相互作用)方面有待于進一步考察。此外，還應開展連花清瘟制劑中多種藥材和成分分析方法的研究，對建立、完善、提高其質量控制水平具有重要意義。