基于HPLC法的生姜酚類成分分析及含量檢測

萬長江，魏光強(qiáng)，萬長春

(1.大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 大理 671003；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，昆明 650201；3.大理技師學(xué)院，云南 大理 671003)

生姜是一種多年生宿根草本植物，具有較高的食用和藥用價值，同時也是傳統(tǒng)香料的原材料[1-2]。生姜味辛、微熱，當(dāng)作為藥用材料食用時，具有驅(qū)寒止血的功效，常用于治療中氣虛寒、腹痛，同時具有化痰止咳、助消化、利分泌、解毒的功效[3]。生姜中含有豐富的功能性物質(zhì)，主要包含6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚等酚類物質(zhì)[4-6]。酚類物質(zhì)成分種類及含量是生姜品質(zhì)的關(guān)鍵衡量指標(biāo)。

本文采用高效液相色譜法(HPLC)對不同種類的生姜中酚類物質(zhì)成分和含量進(jìn)行檢測分析，為生姜品質(zhì)的鑒別提供了理論基礎(chǔ)。

1 試驗條件及樣品制備

試驗過程所用儀器主要包含電子分析天平、高效液相色譜儀以及其他輔助儀器，其中電子分析天平的精度要求達(dá)到十萬分之一[7]。

所用對照品試劑為批號為23513-146的6-姜酚，批號為23513-088的8-姜酚，批號為23513-157的10-姜酚以及批號為12121803的6-姜烯酚，要求選用含量均大于98%的對照品試劑[8]。分別取1 mL的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚對照品試劑放置于10 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，搖勻后分別取2 mL的4種對照品溶液放置于同一個20 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，制備成6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的混合對照品試劑溶液[9]。

生姜選取市場所售來自不同產(chǎn)地的多個品種，經(jīng)篩選后確定14種測定樣品。將待測定樣品切成2 mm小塊，分別精準(zhǔn)稱取1 g樣品，放置于容量為100 mL的燒瓶中，加入甲醇50 mL后稱取重量，加熱30 min放冷后再次稱取重量，利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量，搖勻后進(jìn)行過濾，濾液即為待測定樣品溶液[10]。

測定過程中選定HPLC色譜柱為250 mm×4.6 mm×5 μm，梯度洗脫過程中流速為1 mL/min，柱溫保持在35 ℃，樣品流入速度為1 mL/min，檢測波長為282 nm。在0 min時，保持55%的流動相A，45%的流動相B；在10 min時，與0 min保持相同的洗脫參數(shù)；在15 min時，保持52%的流動相A，48%的流動相B；在17 min時，保持40%的流動相A，60%的流動相B；在38 min時，保持40%的流動相A，60%的流動相B。

2 試驗分析方法

量取5 mL待測定樣品溶液，放置于10 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作為1號線性溶液；量取5 mL待測定樣品溶液，放置于20 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作為2號線性溶液；量取1 mL待測定樣品溶液，放置于10 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作為3號線性溶液；量取1 mL待測定樣品溶液，放置于100 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作為4號線性溶液；將待測定樣品溶液作為5號線性溶液[11-12]。量取1號線性溶液5 mL、2號線性溶液1 mL、3號線性溶液2 mL、4號線性溶液4 mL、5號線性溶液6 mL，按照色譜條件進(jìn)行測定。測定結(jié)果表明，生姜中6-姜酚含量為1.005～100.5 mg/mL，8-姜酚含量為1.001～100.1 mg/mL，10-姜酚含量為0.996～99.6 mg/mL，6-姜烯酚含量為1.28～128 mg/mL。設(shè)定色譜峰面積值為Y，溶液濃度為X，建立濃度與色譜峰面積之間的線性回歸方程：

量取4號線性溶液5 mL，按照色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)測定6次，記錄6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD，色譜峰面積RSD測定數(shù)據(jù)見表1。

表1 精密度試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 1 The detection data of precision test (chromatographic peak area RSD) %

由表1可知，6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD均值分別為0.26%、0.14%、0.45%、0.41%，表明選用的高效液相色譜儀具有良好的精密度，測定方法滿足相關(guān)檢測需求。

取同一品種的待測定樣品6份，分別切成2 mm小塊，每一份精準(zhǔn)稱取1 g樣品，分別放置于容量為100 mL的燒瓶中，加入甲醇50 mL后稱取重量，加熱30 min放冷后再次稱取重量，利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量，搖勻后進(jìn)行過濾，分別量取濾液5 mL，按照色譜條件進(jìn)行測定，記錄6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD，并計算色譜峰面積RSD方差值與均方差值[13]。色譜峰面積RSD測定數(shù)據(jù)見表2。

表2 重復(fù)性試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 2 The detection data of repeatability test (chromatographic peak area RSD) %

由表2可知，同一種類的生姜6種測試樣品中6-姜酚的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差趨于0；8-姜酚的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差趨于0；10-姜酚的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差為0.0121%，同樣趨于0；6-姜烯酚的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差為0.0138%，同樣趨于0。表明本文選用的高效液相色譜儀在進(jìn)行測定過程中具有較好的數(shù)據(jù)重復(fù)性。

隨機(jī)取6份生姜待測定樣品，分別切成2 mm的小塊，每一份精準(zhǔn)稱取0.5 g樣品，分別放置于容量為100 mL的燒瓶中，分別加入0.5 g的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚對照品試劑，加入甲醇50 mL后稱取重量，加熱30 min放冷后再次稱取重量，利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量，搖勻后進(jìn)行過濾，分別量取濾液5 mL，按照色譜條件進(jìn)行測定，記錄6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD，并分別計算6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的平均回收率[14-15]。6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的回收率測定數(shù)據(jù)見表3～表6。

表3 6-姜酚加樣回收率試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 3 The detection data of 6-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

表4 8-姜酚加樣回收率試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 4 The detection data of 8-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

表5 10-姜酚加樣回收率試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 5 The detection data of 10-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

表6 6-姜烯酚加樣回收率試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 6 The detection data of 6-shogaol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

由表3～表6可知，6-姜酚的平均回收率為99.85%，8-姜酚的平均回收率為98.40%，10-姜酚的平均回收率為99.219%，6-姜烯酚的平均回收率為98.22%，因此本文選擇的測定試驗方法滿足加樣回收測定需求。

量取5 mL待測定樣品溶液，置于容量為100 mL的燒瓶中，加入甲醇50 mL后稱取重量，加熱30 min放冷后再次稱取重量，利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量，搖勻后進(jìn)行過濾，量取5 mL 濾液7份，分別在0，1，2，4，8，12，24 h按照色譜條件進(jìn)行測定，并計算色譜峰面積RSD方差值與均方差值[16-17]。色譜峰面積RSD測定數(shù)據(jù)見表7。

表7 穩(wěn)定性試驗檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 7 The detection data of stability test (chromatographic peak area RSD) %

由表7可知，測試樣品中6-姜酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差為0.01%，趨于0；8-姜酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差為0.018%，趨于0；10-姜酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差為0.017%，趨于0；6-姜烯酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0，均方差為0.024%，趨于0。數(shù)據(jù)表明，待測定樣品溶液放置24 h時仍具有良好的穩(wěn)定性。

3 樣品測定與分析

本文在進(jìn)行生姜樣品中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚含量測定時，進(jìn)樣流速設(shè)定為1 mL/min，使用校正因子對待測定樣品檢測數(shù)據(jù)和對照樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行定量計算，同時采用回歸方程計算待檢測樣品中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚含量，測定結(jié)果見表8。

表8 生姜樣品分類含量測定試驗結(jié)果Table 8 The test results of classification and content determination of ginger samples %

由表8可知，不同種類的生姜樣品中，酚類物質(zhì)含量存在不同程度的差異，主要與生姜的品種、種植地氣候條件以及生長時間有關(guān)。

4 結(jié)論

高效液相色譜法(HPLC)能夠準(zhǔn)確進(jìn)行生姜樣品中酚類物質(zhì)種類及含量的測定，測定過程穩(wěn)定可靠，且具有較好的數(shù)據(jù)重復(fù)性，為生姜品質(zhì)的快速鑒別提供了參考依據(jù)。