C-Jun在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義的Meta分析*

宗 雪，居紅格，2

(1.內蒙古科技大學包頭醫學院，內蒙古 包頭 014060；2.內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院)

據世界衛生組織發布的關于癌癥研究的數據顯示[1]:在全球范圍內僅2020年新增乳腺癌患者已經230萬例，在全部新確診癌癥中占11.7 %。死亡病例69萬例，是惡性腫瘤導致女性死亡的主要原因之一。乳腺癌已經對全球女性的生命健康造成嚴重威脅，也加重了社會負擔。因此，降低乳腺癌死亡率，應采取乳腺癌篩查、早預防、早治療等有效措施。當前，尋找特異靶點進行有效預防和治療是研究的熱點。轉錄因子c-Jun是核內原癌基因，屬于AP-1家族成員，由單個外顯子構成，由334個氨基酸構成的蛋白JUN，編碼定位于細胞核，其分子量為39 kDa[2]。在AP-1的構成和細胞增殖，分化，凋亡和腫瘤轉化過程中c-Jun都參與其中,并起到促進作用[3]。據研究[4-6]，c-Jun在結直腸癌、宮頸癌和胃癌中表達水平較高，且與癌細胞的分化程度相關，分化程度越差，蛋白表達水平越高。現有研究[1-12]，c-Jun在乳腺癌中的表達水平具有一定差異性。本研究采用薈萃分析方法探討c-Jun乳腺癌與其臨床特征的關系。

1 對象與方法

1.1選擇研究文獻標準 (1)納入研究的文獻是關于c-Jun與乳腺癌及其臨床病理特征相關文獻，并且已經在國內外公開發表；(2)文獻中以病例對照的研究為主；(3)研究對象均為被確診的乳腺癌患者；(4)患者術前未接受其他相關特殊治療(放療、化療、靶向治療等)；(5)c-Jun檢測方法為免疫組化(IHC)，根據細胞數量或嚴重程度判斷表達結果；(6)文獻未提供研究結果的效應量，但可根據原始數據計算得出；(7)語言限于中、英文。

1.2文獻排除標準 (1)文獻中研究結果無法得出效應量；(2)文獻屬重復發表、記錄的原始數據完整、樣本量偏少、文獻質量差；(3)摘要、論述、綜述、等全文不夠完整的文獻；(4)樣本量研究對象為非人類的文獻。

1.3檢索策略 利用計算機，通過中國知網、萬方、維普等數據庫、中國生物醫學服務系統、PubMed網站、全球最權威的EMBASE數據庫、科克倫圖書館、Web of Science以及中國臨床試驗注冊中心進行檢索。檢索的文獻截止時間到 2021-01，中文關鍵詞包括乳腺癌、乳癌、c-Jun原癌基因、c-Jun蛋白；English keywords include breast cancer, breast cancer, c-Jun proto-oncogene, and c-Jun protein;檢索采用主題詞和自由詞相結合的方式進行，文獻語言僅限于中文和英文。

1.4文獻篩選和資料提取 2名研究人員根據納入和排除標準檢索搜到的文獻，并從最終納入的文獻中提取數據，包括文題、第一作者姓名、發表年份、總例數、c-Jun在乳腺癌組及對照組例數和表達水平等的情況，在不同時間提取2次文獻資料，分別計算組合效應量，比較前后兩次的結果有無差異，有差異時由第3名研究者再次校對。

1.5文獻質量評價 根據紐塞爾渥太華量表(Newsell-Ottawa Scale，NOS)，研究者從人群選擇研究、群體可比性和暴露因子測量三個方面對納入的文獻進行了8個項目的獨立評分。0-5星代表低質量研究，6-9星代表高質量研究。

1.6統計學分析 使用RevMan5.3軟件對納入研究的結果進行統計分析。χ2檢驗用于檢驗納入文獻的異質性。如果研究結果之間不存在異質性或異質性較小(I2≤ 50 %或P>0.1)，使用固定效應模型進行分析；如果研究間存在顯著異質性(I2> 50 %或P≤0.1)，則采用隨機效應模型進行分析。Meta分析的檢驗水平α = 0.05，結果以森林圖表示，RD值、OR值和相應的95 % CI用于評估c-Jun乳腺癌與其臨床病理特征之間的關系。

2 結果

2.1文獻檢索結果 從各個數據庫共檢索3 311篇文獻，經篩選，最終收錄5篇。文獻篩選過程及結果見圖1所示。

圖1 文獻篩選流程圖

2.2納入文獻的關鍵特征和質量評估 共收錄5篇文章，其中英文2篇，中文3篇。納入文獻主要特征見表1，納入NOS文獻質量等級見表2。

表1 納入研究基本特征

表2 NOS量表質量評價

2.3Meta 分析結果

2.3.1乳腺癌中c-Jun陽性率 5篇[8-12]文獻報道了乳腺癌中c-Jun的表達情況，經過對337例異質性檢驗后，研究間異質性較小(I2=30 %，P=0.22)，因此固定效應模型的結果表明：c-Jun在乳腺癌的陽性率為82 %[RD=0.82，95 % CI(0.71，0.93)，P<0.00](圖2)。

圖2 單臂研究c-Jun在乳腺癌中的表達情況

2.3.2乳癌組和對照組中c-Jun表達情況 3篇文獻[8-10]報道了乳腺癌組與對照組c-Jun表達情況，其中乳腺癌組222例，對照組97例。經異質性檢驗，研究間異質性較小(I2=41 %，P=0.19)，因此固定效應模型結果顯示乳腺癌組c-Jun水平高于對照組，且差異具有統計學意義[OR=10.79, 95 % CI(5.85, 19.89),P<0.00](圖3)。

圖3 乳腺癌組和對照組中c-Jun表達情況

2.3.3c-Jun在無淋巴結轉移的表達情況 有兩篇文獻[9,12]討論了乳腺癌淋巴結轉移情況，以及c-Jun表達，將已經發生淋巴結轉移的78例患者分在一組，27例無淋巴結轉移者為一組。由于研究中發現各組間異質性較小(I2=0 %，P=0.98)，因此，顯示其結果采用固定效應模型。組間c-Jun的表達水平存在差異，淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，具有統計學意義[OR=9.61，95 % CI(2.27，40.69)，P=0.002](圖4)。

圖4 c-Jun有無淋巴結轉移的表達

2.3.4不同分化程度c-Jun表達情況 2篇[9-10]文獻報道了乳腺癌不同分化程度c-Jun表達情況，其中Ⅰ和Ⅱ級72例，Ⅲ級67例。各研究間異質性較小(I2=0%，P=0.60)，故采用固定效應模型結果顯示，兩組間c-Jun表達差異無統計學意義[OR=0.99，95 % CI(0.36，2.77)，P=0.99](圖5)。

圖5 乳腺癌不同分級中c-Jun表達情況

2.4敏感性分析 采用隨機和固定模型，OR值、95% CI和I2一致，敏感性分析采用Stata 14.0，結果見圖4。分析納入文獻及其數據后，刪除任何一篇文章對結果影響不大，說明meta分析的結果是穩定的(圖6)。

圖6 敏感性分析

3 討論

乳腺癌[12]是一種高度異質性疾病，具有不同的組織學類型和不同的生物學臨床特征。Biro等人[13]根據腫瘤表面分子的表達將乳腺癌分為四種不同的分子亞型：luminal A、luminal B、HER2和base-like型。其中，三陰型惡性程度最高，侵襲性強，預后差。目前治療以手術以及放化療為主，沒有特異性治療。已有研究證明，乳腺癌致癌驅動分子可以作為乳腺癌治療靶點。翟婧彤等[14]發現，多腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制劑被證實對PALB2胚系突變的三陰性乳腺癌患者有一定的療效。Luo等[15]發現，CDK6可以作為腫瘤抗微環境的靶標，其表達與三陰性乳腺癌患者組織中的血管生成和纖維化腫瘤微環境呈正相關。乳腺癌的發生和發展是一個復雜的過程，涉及許多解釋乳腺癌發生機制的分子，尋找更好特異性靶點仍是研究者關注的熱點。

c-Jun[16-17]最早在家禽中發現，與禽肉瘤逆轉錄病毒 ASV17 基因同源，是第一個發現的致癌轉錄因子。有研究發現[18]，生理功能的c-Jun可以促進胚胎肝臟發育以及肝臟和皮膚再生。病理功能的c-Jun參與致癌基因誘導的肝臟和皮膚腫瘤的形成。突變的致癌基因激活下游的絲裂原激活蛋白激酶(MAPKs)信號，然后MAPK促進c-Jun絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化和活化，形成同源二聚體c-Jun-c-Jun或異源c-Jun-c-fos和c-Jun-ATF[17-21]。這些二聚體與cAMP反應元件(CRE)DNA序列TGACGTCA結合，直接驅動轉錄激活細胞周期蛋白D1和表皮生長因子，在細胞外參與細胞周期進程和細胞增殖，進行信號的轉錄應答[19-20]。

現有研究發現，c-Jun在某些腫瘤內呈高表達水平。Oya等[21]發現，c-Jun高表達與獲得性囊性腎臟疾病和腎細胞癌非典型細胞異常增殖有關，強調了c-Jun活化在腎細胞癌早期癌變中的作用。Liu[22]等發現，c-Jun在卵巢癌的表達水平明顯高于癌旁，強調了其過表達抑制了miR-6089的抑癌作用并增強了腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲和增殖。

在目前關于乳腺癌組織中c-Jun表達與臨床病理特征關系的研究，結果存在分歧。朱鳳雪[23]通過印跡蛋白研究發現，c-Jun蛋白在乳腺癌患者中的表達水平低于正常乳腺組織，在晚期TNM III期乳腺癌中其表達水平低于TNM I期。而在程瑞雪、劉曉麗、Tiniakos等[8-10]研究發現，在乳腺癌中c-Jun的蛋白表達水平，遠遠高于腫瘤旁組織。本研究結果提示c-Jun在乳腺癌組中表達率高于對照組，差異有統計學意義(P<0.00)。劉曉麗、Langer等[9,12]經過對淋巴結轉移的研究，認為c-Jun在淋巴結轉移乳腺癌中表達有一定差異性。本次研究結果，c-Jun在淋巴結轉移組中，呈高表達，與淋巴結未轉移組的表達存在差異，有統計學意義(P=0.002)。在研究分化程度時，Langer等[10]認為c-Jun在低分化組中高表達。而劉曉麗等[9]認為，它在高分化組中高表達，本研究結果認為，c-Jun在這兩組的表達分化差異無統計學意義(P=0.99)。

萬芳[24]通過印跡蛋白發現，在乳腺癌細胞中，c-Jun呈高表達，且c-Jun表達水平在雌激素受體陰性與陽性的乳腺癌細胞中有所不同，陰性高于陽性。趙煥[25]研究發現，c-Jun的表達情況隨乳腺導管內增生性病變加重而增加，在浸潤性導管癌中顯著增加。進一步證實高水平表達的c-Jun促進乳腺癌的發生，且與病變程度相關。

目前c-Jun在乳腺癌中治療的研究表明[26-28]，作為立早癌基因，c-Jun 與乳腺癌增殖和血管生成存在一定關系，c-Jun 的過表達導致ER +乳腺癌細胞對他莫昔芬的敏感性降低。因此，阻止腫瘤血管生成，c-Jun靶向治療是一種有效的新方法。有關乳腺癌肺轉移的研究發現[29]，帕那替尼(一種酪氨酸激酶抑制劑)可通過ERK/c-Jun信號通路抑乳腺癌肺轉移(BCLM)相關基因的表達。c-Jun也是BCLM的關鍵因素和潛在藥物靶標。

綜上所述，本組meta分析結果表明c-Jun高表達與乳腺癌轉移相關，c-Jun在乳腺癌進展中起重要作用，提示c-Jun有可能作為乳腺癌潛在治療靶標。

這項研究在某些方面仍然存在缺陷：(1)通過廣泛的數據庫搜索檢索到了5篇文獻，病例總數少，研究樣本少，結果可能受到一定影響；(2)部分文獻不能完全檢索數據，因此無法進行完整全面分析；(3)c-Jun的判讀標準不同，結果的統計會有一定差異，還需要更大的樣本和更好的實驗研究來驗證結果。