miR-98在妊娠期糖尿病患者中的表達及臨床意義

寇相歡，郭改利，吳蕓

漢中市人民醫院婦產科，陜西 漢中 723000

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期特有的疾病類型，主要發生于妊娠20周以后，具有蛋白尿、高血壓及水腫等主要臨床表現，部分嚴重患者還存在抽搐、昏迷等，可對母嬰結局產生嚴重影響[1]。截至目前，妊娠期糖尿病的發病機制還有待進一步明確，但多認為與血管內皮損傷、遺傳及免疫因素有關，探索其相關機制以預防和改善妊娠期高血壓、改善母嬰結局已成為現階段婦科領域的重要課題。

miRNA 是非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中，在與靶基因mRNA 序列特異性結合后可抑制靶基因的降解和翻譯RNA，進而介導相關細胞的增殖、凋亡及分化過程。相關研究已證實miR-197、149 等與妊娠期糖尿病的發生、發展具有密切相關性，但關于miR-98的研究資料較少[2-3]。本研究探討了miR-98在妊娠期糖尿病患者中的表達及其臨床意義，旨在為臨床妊娠期糖尿病的治療和預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月至2021 年1 月在漢中市人民醫院婦產科產檢并分娩的GDM 患者108 例(GDM 組)納入研究。納入標準：(1)GDM 診斷符合2010 年國際糖尿病與妊娠研究組制定的診斷標準[4]；(2)單胎初產婦；(3)孕周＞36 周；(4)患者及家屬知情同意。排除標準：(1)合并有惡性腫瘤、急慢性嚴重肝、腎功能障礙等其他疾病；(2)多胎妊娠；(3)合并有其他妊娠期并發癥者。同時選取在我院婦產科產檢的健康孕產婦100 例作為對照組，兩組孕產婦的臨床一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1。本研究獲得醫院倫理委員會批準。

表1 兩組孕產婦的一般資料比較()

表1 兩組孕產婦的一般資料比較()

1.2 觀察指標與檢查方法 GDM組產婦分娩新生兒后，留取產婦5 mL 臍血，并且抽取空腹肘靜脈血5 mL，4℃條件下3 000 r/min離心10 min，取血清1 mL進行檢測。對照組產婦臍血及靜脈取血方法同妊娠期糖尿病產婦。(1)miR-98 檢測：Trizol 法提取RNA，按照One Step RT-qPCR Kit檢測miR-98表達水平，U6基因為內參。miR-98 正向引物：上游5'-AGGGCCTGGTGTGAACTACT-3'，下 游5'-TTCTTTGCTGCTCGCTGA-3'；Mx3005p 儀器計算Real-time PCR，采用Real-time PCR 相對定量法，以2-△△Ct表示miRNA-98水平[5]。(2)實驗室指標檢測：葡萄糖氧化酶法檢測空腹葡萄糖(FPG)，放射免疫法檢測空腹胰島素(FINS)，胰島素抵抗指數(HOMA-IR)=(FPG×FINS)/22.5，全自動生化分析儀(美國BD 公司生產，型號AH-800)檢測臍血甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。

1.3 統計學方法 應用SPSS22.0 軟件分析數據，計量資料經Bartlett 方差齊性檢驗與Kolmogorov-Smirnov正態性檢驗，均確認具備方差齊性且近似服從正態分布，以均數±標準差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗；相關性采用Pearson相關分析；采用多元線性回歸分析影響血液miR-98表達的因素。檢驗水準為α=0.05。以P＜0.05差異均有統計學意義。

2 結果

2.1 GDM 組和對照組孕產婦的血液指標比較 GDM 組孕產婦的血液miR-98、HDL-C 明顯低于對照組，而FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 GDM組和對照組孕產婦的血液指標比較()

表2 GDM組和對照組孕產婦的血液指標比較()

2.2 GDM組和對照組孕產婦的臍血miR-98及新生兒出生體質量比較 GDM組孕產婦的臍血miR-98相對表達量明顯低于對照組，而新生兒出生體質量明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 GDM 組和對照組孕產婦的臍血miR-98 及新生兒出生體質量比較()

表3 GDM 組和對照組孕產婦的臍血miR-98 及新生兒出生體質量比較()

2.3 血清miR-98相對表達量與血清指標的相關性 經Pearson相關性分析結果顯示，血液miR-98相對表達量與HDL-C 呈正相關(P＜0.05)，而與FPG、FINS、HOMA-IR、TG和LDL-C呈負相關(P＜0.05)，見表4。

表4 血清miR-98相對表達量與血清指標的相關性

2.4 影響血液miR-98 表達的因素 將HDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 作為自變量，miR-98作為因變量進行多元線性回歸分析，結果顯示FINS、TG是影響miR-98表達的因素(P＜0.05)，見表5。

2.5 產婦臍血miR-98與新生兒出生體質量的相關性 經Pearson相關分析，GDM組產婦臍血miR-98相對表達量與新生兒出生體質量呈負相關(r=-0.527，P＜0.05)，見圖1。

圖1 產婦臍血miR-98與新生兒出生體質量的相關性分析圖

3 討論

妊娠期糖尿病發病率為孕婦總數的5%左右，是孕產婦和胎兒死亡的重要原因[6]。最新的臨床研究提示部分妊娠糖尿病患者若能夠有效控制血壓，可以改善妊娠結局，不必終止妊娠，但現階段關于妊娠期糖尿病的相關機制尚未完全明晰，母嬰結局與血糖控制的關系尚存在分歧[7-9]。

miRNA 長19～22 nt，屬于非編碼RNA，可通過與靶基因3'端的完全或不完全互補結合而抑制目的基因的翻譯及表達，并參與個體發育、細胞分化、增殖、代謝、凋亡、遷移和轉移等細胞生物學過程[10-11]。大量研究發現miRNA在不同的疾病中呈均現不同的表達譜，并有文獻提示著miRNA 與妊娠期糖尿病具有密切關系，但具體機制還有待進一步明確[12-14]。本研究發現GDM 組孕產婦的血液miR-98、HDL-C 明顯低于對照組，而FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 明顯高于對照組，該結果提示GDM 孕婦存在顯著的糖脂代謝異常和miR-98異常表達。相關機制研究提示miR-98可通過抑制妊娠糖尿病小鼠的脂肪特征蛋白基因從而調控磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B 通路減輕胰島素抵抗和肝糖異生，還可介導炎癥反應，致使血管內皮功能障礙，誘發動脈粥樣硬化和糖尿病等[15]，為探討妊娠期糖尿病疾病發展奠定了理論基礎，這也與本研究結果具有一致性。

進一步研究發現GDM 組孕產婦的臍血miR-98相對表達量明顯低于對照組，新生兒出生體質量明顯高于對照組，這可能是因為miR-98 能通過相關通路影響胰島β細胞功能，降低胰島素轉錄因子水平，調節胰島素合成和分泌，進而影響糖脂代謝和新生兒體質量；此外，骨骼肌是代謝和利用的主要組織之一，其能夠通過胰島素介導葡萄糖攝取，而骨骼肌葡萄糖攝取能力下降是骨骼肌胰島素抵抗的表現形式，進而影響新生兒體質量[16]。

血液指標相關性分析結果顯示孕產婦的血液miR-98 相對表達量與HDL-C 呈正相關，而與FPG、FINS、HOMA-IR、TG和LDL-C呈負相關；多元線性回歸分析結果顯示：FINS、TG 是miR-98 的影響因素。該結果提示GDM患者血液miR-98與糖脂代謝有關，miR-98 可能參與了妊娠期高血壓患者的糖脂代謝異常的進程，同時胰島素抵抗及血脂異常狀態可能影響了miR-98的表達。miR-98表達下降抑制p65蛋白巰基亞硝基化作用及內皮型一氧化氮合酶而降低一氧化氮生物活性，也可能激活核因子κB表達介導血管內皮損傷，影響血管內皮功能，誘發妊娠期高血壓[17]。此外，相關研究提示miRNAs 主要通過抑制靶基因的特殊位點降解靶mRNA和抑制靶mRNA的翻譯，進而對靶基因負性調控，發揮腫瘤轉移和生長的作用，還可介導血管炎癥反應，引起血管內皮功能障礙，進而引發糖脂代謝紊亂[18]。

孕產婦的臍血miR-98 與新生兒體質量的相關性結果顯示GDM 組臍血miR-98 相對表達量與新生兒出生體質量呈負相關。妊娠期糖尿病孕婦脂肪組織中miR-98 異常表達，可能與miR-98 降低胰島素敏感性的作用相關。妊娠期糖尿病孕婦血糖高水平使葡萄糖通過胎盤轉運進入胎兒體內，刺激胎兒β胰島細胞肥大、增生，刺激胰島素分泌增加，抑制脂解作用并促進糖原、蛋白質、脂肪合成和，繼而發生高胰島素血癥，使胎兒體質量升高。但也有研究提示妊娠期糖尿病孕婦胎兒娩出后卻容易發生新生兒低血糖，這可能與妊娠期糖尿病孕婦臍血中miR-98 低表達密切相關，而miR-98 在外周血及臍血中具有不同的表達模式，可能與孕婦及新生兒不同的血糖改變相關，這也說明了miR-98 參與了妊娠期糖尿病的發生、發展過程[19-20]。

本研究針對GDM 患者血液及臍血miR-98 表達對機體影響的相關機制進行了分析，嘗試對糖脂代謝的介導途徑進行了探索，具有一定的創新性和臨床參考價值，但具體的相關信號通路還有待明確和研究。綜上所述，GDM 患者血液及產婦臍血miR-98 表達下調，血液miR-98 與糖脂代謝有關，同時產婦臍血miR-98與新生兒出生體質量有關。