miR-452-5p 靶向SOX5 調控信號通路對乳腺癌細胞增殖與侵襲的影響

魏 濤，馮連杰，付小娜，趙世杰，劉偉鵬，梁 豪

乳腺癌患者的死亡多由局部腫瘤轉移引起［1］，在腫瘤轉移過程中，侵襲性癌細胞的增殖程序受基因的調控［2］。miRNA 是一類內源性非編碼小RNA，可通過與靶基因結合，調控蛋白的表達和細胞功能。已有研究發現，miR-452-5p 可抑制乳腺癌細胞轉移［3］，miR-485-5p 通過靶向survivin 抑制乳腺癌的進展和化學敏感性［4］。在細胞中，小RNA 通過與靶基因的3'-未翻譯區互補結合抑制基因表達，研究顯示，miR-146a-5p 通過調控SOX5 的表達影響三陰性乳腺癌細胞的增殖和轉移［5］。SOX5 作為癌基因發揮作用，抑制SOX5 的表達可抑制非小細胞肺癌和前列腺癌的發展［6，7］。SOX5 被證明是由多個小RNA 調控的，但在乳腺癌中，miR-452-5p 是否調控SOX5 還沒有研究。筆者通過檢測miR-452-5p、SOX5 的表達，探討miR-452-5p 對乳腺癌細胞增殖、侵襲、遷移的影響。

1 材料與方法

1.1 材料人乳腺上皮細胞株HBL-100、人乳腺癌MCF-7、SKBR-3、BT549 細胞株（上海細胞庫）；胎牛血清、RPMI 1640 培養基（美國Gibco 公司）；Tranwell 小室（美國Millipore 公司）；Matrigel 膠（美國BD 公司）；MTT、DMSO（美國Sigma 公司）；miRcon、miR-con mimic 的構建（上海吉凱基因公司）；SOX5、Cyclin D1、CDK4、MMP-2、MMP-9 一抗（美國Abcam 公 司）；Twist、N-cadherin、Vimentin、βactin 抗體（美國CST 公司）；lipofectamine TM2000轉染試劑（美國invitrogen 公司）；SOX5 過表達載體及空載體、SOX5 野生型（WT）或突變型（MUT）熒光素酶報告載體（廣州復能基因有限公司）；miR-452-5p、SOX5 引物（上海生工公司）；IgG 二抗（北京博奧森生物科技有限公司）；RIPA 裂解液、BCA 蛋白檢測試劑盒（美國Thermo scientificals 公司）；酶標儀購自Bio-Red 公司；電子熒光顯微鏡購自日本Olympus 公司；Western blot 發光成像系統（美國UVP公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞的培養與分組 HBL-100、MCF-7、SKBR-3、BT549 細胞置于含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養基中，置于37 ℃、5%CO2培養箱中培養。實驗首先分為空白對照組（NC），陰性對照組（miRcon），miR-452-5p 過表達組（miR-452-5p mimic）；miR-con 組：將miR-con 轉染至SKBR-3 細胞中；……