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miR-452-5p 靶向SOX5 調控信號通路對乳腺癌細胞增殖與侵襲的影響

2021-12-13 12:29:34馮連杰付小娜趙世杰劉偉鵬
實用醫藥雜志 2021年8期
關鍵詞:乳腺癌水平檢測

魏 濤,馮連杰,付小娜,趙世杰,劉偉鵬,梁 豪

乳腺癌患者的死亡多由局部腫瘤轉移引起[1],在腫瘤轉移過程中,侵襲性癌細胞的增殖程序受基因的調控[2]。miRNA 是一類內源性非編碼小RNA,可通過與靶基因結合,調控蛋白的表達和細胞功能。已有研究發現,miR-452-5p 可抑制乳腺癌細胞轉移[3],miR-485-5p 通過靶向survivin 抑制乳腺癌的進展和化學敏感性[4]。在細胞中,小RNA 通過與靶基因的3'-未翻譯區互補結合抑制基因表達,研究顯示,miR-146a-5p 通過調控SOX5 的表達影響三陰性乳腺癌細胞的增殖和轉移[5]。SOX5 作為癌基因發揮作用,抑制SOX5 的表達可抑制非小細胞肺癌和前列腺癌的發展[6,7]。SOX5 被證明是由多個小RNA 調控的,但在乳腺癌中,miR-452-5p 是否調控SOX5 還沒有研究。筆者通過檢測miR-452-5p、SOX5 的表達,探討miR-452-5p 對乳腺癌細胞增殖、侵襲、遷移的影響。

1 材料與方法

1.1 材料人乳腺上皮細胞株HBL-100、人乳腺癌MCF-7、SKBR-3、BT549 細胞株(上海細胞庫);胎牛血清、RPMI 1640 培養基(美國Gibco 公司);Tranwell 小室(美國Millipore 公司);Matrigel 膠(美國BD 公司);MTT、DMSO(美國Sigma 公司);miRcon、miR-con mimic 的構建(上海吉凱基因公司);SOX5、Cyclin D1、CDK4、MMP-2、MMP-9 一抗(美國Abcam 公 司);Twist、N-cadherin、Vimentin、βactin 抗體(美國CST 公司);lipofectamine TM2000轉染試劑(美國invitrogen 公司);SOX5 過表達載體及空載體、SOX5 野生型(WT)或突變型(MUT)熒光素酶報告載體(廣州復能基因有限公司);miR-452-5p、SOX5 引物(上海生工公司);IgG 二抗(北京博奧森生物科技有限公司);RIPA 裂解液、BCA 蛋白檢測試劑盒(美國Thermo scientificals 公司);酶標儀購自Bio-Red 公司;電子熒光顯微鏡購自日本Olympus 公司;Western blot 發光成像系統(美國UVP公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞的培養與分組 HBL-100、MCF-7、SKBR-3、BT549 細胞置于含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養基中,置于37 ℃、5%CO2培養箱中培養。實驗首先分為空白對照組(NC),陰性對照組(miRcon),miR-452-5p 過表達組(miR-452-5p mimic);miR-con 組:將miR-con 轉染至SKBR-3 細胞中;……

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