MiR-155調控Wnt/β-catenin信號通路影響非小細胞肺癌細胞增殖、凋亡和DDP耐藥性的研究

龔春梅 徐敬根 彭玲 鄧春燕

成都市雙流區第一人民醫院，四川 成都 610200

非小細胞肺癌(NSCLC)是由上皮引起的惡性腫瘤，最常見于肺實質，并可侵襲轉移周圍鄰近組織，在實體瘤惡性腫瘤發病率中居于首位[1]。DDP是治療非小細胞肺癌的重要化療藥物，被用于非小細胞肺癌的輔助治療，可促進腫瘤細胞死亡[2]。然而，在非小細胞肺癌治療中存在 DDP耐藥的發生，導致治療效果差。

在腫瘤調節過程中，microRNAs(miRNAs)作為癌基因或腫瘤抑制因子發揮作用，microRNAs有助于探索非小細胞肺癌進展的發病機制[3]。既往研究顯示，miR-155在多種腫瘤中均發揮重要功能，可以被作為腫瘤預后相關的標記物[4]。我們的研究探討miR-155在非小細胞肺癌發生、發展以及DDP耐藥性機制。

1 材料與方法

1.1Real-time PCR檢測各組A549細胞和A549/DDP細胞中miR-155和Bax和Bcl-2的表達

采用Trizol試劑提取各組A549細胞和A549/DDP細胞，進行DNA反轉錄合成。引物依據各基因序列(見表1)。對目的基因進行Real-time PCR檢測。根據2-△Ct法進行半定量分析。

表1 引物序列

1.2Western blot檢測Wnt/β-catenin信號通路蛋白表達變化 BCA法蛋白定量后于-20℃保存。分離蛋白利用10%SDS-PAGE電泳，并將膠用半干轉膜法轉移至PVDF膜，100mA,1.5h去除非特異性背景利用室溫，5%脫脂奶粉作用，2 h。分別加入一抗1:1000，1:1500稀釋的Wnt1，β-catenin單抗，搖床，4℃，過夜，避光條件下加入1:2000羊抗兔二抗，孵育30 min，PBST洗滌，化學發光劑顯色1 min，X片曝光成像，觀察結果。

2 結 果

2.1調控MiR-155對非小細胞肺癌細胞A549和耐藥細胞株A549/DDP中MiR-155表達影響 轉染miR-155 mimics于非小細胞肺癌細胞A549中，可促進MiR-155表達增加；而轉染miR-155 inhibitor于耐藥細胞株A549/DDP，可顯著下調MiR-155表達。

2.2調控MiR-155對非小細胞肺癌細胞A549和耐藥細胞株A549/DDP中Bax和Bcl-2表達影響 上調非小細胞肺癌細胞A549中MiR-155表達后，可減少Bax表達，增加Bcl-2表達；而轉染miR-155 inhibitor于耐藥細胞株A549/DDP下調其在耐藥細胞中的表達，增加Bax表達，減少Bcl-2表達。

2.3調控MiR-155對非小細胞肺癌細胞A549和耐藥細胞株A549/DDP中Wnt1/β-catenin信號通路的影響 上調非小細胞肺癌細胞A549中MiR-155表達后，可導致Wnt1、β-catenin表達增加；而轉染miR-155 inhibitor于耐藥細胞株A549/DDP下調其在耐藥細胞中的表達，可導致Wnt1、β-catenin表達減少。

3 討 論

目前對非小細胞肺癌采用放療和化療結合的多模式治療成為控制其局部發展的重要方式，取得了重大進展，但非小細胞肺癌的化療耐藥問題導致治療容易失敗。MiRNA具有廣泛的調控功能，在生理病理環境中都有重要的作用，可參與細胞增殖、分化和凋亡等生物學過程。

Wnt/β-catenin信號通路在腫瘤增殖、EMT以及侵襲過程發揮重要作用[5-6]。本研究證實上調MiR-155可通過激活Wnt/β-catenin通路，減少Bax表達，增加Bcl-2表達，進而導致凋亡受到抑制，腫瘤細胞進一步增殖。結論：MiR-155可調控Wnt/β-catenin信號通路，促進非小細胞肺癌細胞的增殖，抑制其凋亡。MiR-155在非小細胞肺癌耐藥細胞中表達顯著增高，抑制MiR-155表達可抑制Wnt/β-catenin通路，促進耐藥細胞凋亡，抑制耐藥細胞增殖。