苯磺酸左旋氨氯地平對腎大部切除自發性高血壓模型大鼠腎臟的保護作用*

侯 靜，藺 艷，劉 勇，王玉潔

（1.西南醫科大學附屬醫院，四川 瀘州 646000； 2.西南醫科大學腫瘤研究所，四川 瀘州 646000）

自發性高血壓（SH）是以體循環動脈壓升高為特征的綜合征［1］，若不及時干預，會影響心、腦、腎等重要臟器的功能，甚至引發器官功能衰竭，需盡早治療，以減少終末事件的發生，保護靶器官，促使血壓長期達標［2］。目前常用藥物為鈣離子拮抗劑，苯磺酸左旋氨氯地平屬長效二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，鈣拮抗活性是消旋體的2倍、右旋體的1000倍，能通過改變細胞膜電位，減少鈣離子內流，擴張外周小動脈，舒張血管平滑肌，降低外周血管阻力，促使血壓下降［3］。有學者發現，鈣拮抗劑在降低血壓的同時，還可減輕對腎小球的損害，在一定程度上降低缺血帶來的危險和減少局部自由基形成，緩解軟組織鈣化［4］，但有待進一步證實。本研究中對比了常規劑量、大劑量用藥對腎大部（5／6）切除SH模型大鼠腎臟功能的影響，為后期臨床保護殘余腎功能提供參考。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：FinePointe NAM型無創實驗動物測試儀（美國Buxco公司）；7170A型全自動生化分析儀（日本Hitachi公司）；Olympus CX33型顯微鏡（南京貝登醫療股份有限公司）；TG18KR型離心機（上海舜制儀器制造公司）；DN20－600型三通管－電極－生命信息處理系統（河北鼎航管道制造有限公司）。

試藥：苯磺酸左旋氨氯地平片（施慧達藥業集團，批號為180131，規格為每片2.5 mg）、10%水合氯醛（上海山浦化工有限公司，批號121004）；腫瘤壞死因子－α（TNF－α）試劑盒（解放軍總醫院放免研究所，批號20080820），白 細 胞 介 素6（IL－6）試 劑 盒（批 號 為170894）、超敏C反應蛋白（hs－CRP）試劑盒（批號為171094），均購自北京晶美公司；丙二醛（MDA）試劑盒（中山生物工程公司，批號為2000427），超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（英科新創科技有限公司，批號為2010015113），血清肌酐（SCr）試劑盒（上海華科生物工程股份有限公司，批號為20100112），血尿素氮（BUN）試劑盒（珠海珠廈藥集團股份有限公司，批號為20100205）。PAS，蘇木素－伊紅（HE）染色試劑盒。

動物：選取2018年2月至2019年5月福州醫科大學實驗動物中心生產的雄性SH大鼠40只，均為16周齡，平均體質量（204.56±15.45）g。實驗動物使用許可證號SYXK（閩）2016－0006；適應性喂養7 d，飼養籠相對濕度（65.2±8.1）%、溫度（22.5±2.13）℃，保持良好通風和12 h黑暗／光照周期交替。每周更換1次高壓消毒墊料，自由飲水（飲用水需高溫高壓消毒）、攝食。嚴格按國家科學技術委員會《實驗動物管理條例》進行實驗。

1.2 建模、分組與給藥

將40只大鼠隨機分為手術組（30只）和假手術組（A組，等體積蒸餾水，10只）。A組剝離腎包膜，暴露腎臟，關腹。手術組大鼠予10%水合氯醛麻醉后行背左側切口，充分暴露左腎，將腎周圍脂肪囊分離，結扎、離斷上下極腎組織（如出血明顯，用明膠海綿壓迫片刻），最后復位腎臟后縫合切口，使結扎的腎臟因缺血而梗死；14 d后，采取同樣麻醉方式，切開右側背部，結扎腎蒂，切除右腎，2次手術需保證切除5／6腎臟。術后2周將手術組大鼠按體質量分層隨機分為模型組（B組，等體積蒸餾水，10只），低劑量組［C1組，2.5 mg／（kg·d）苯磺酸左旋氨氯地平，10只］，高劑量組［C2組，5.0 mg／（kg·d）苯磺酸左旋氨氯地平，10只］。各組大鼠均于每日上午9：00灌胃給藥1次，持續6周。

1.3 觀察指標

尾動脈收縮壓：分別在干預前（0周）及干預后1，2，4，6周上午8：00－10：30監測。將大鼠固定于儀器配套的鼠籠內，提前預熱15 min，待大鼠安靜后，將其尾巴根部放于套袖中，按壓，以每次20～30 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa）的速率自動加壓至脈搏波消失，維持5 s松氣，收縮壓為第1次波型，連續監測5次，每次間隔3 min，取平均值。

頸動脈壓：術前禁飲8 h。測定前腹腔注射10%水合氯醛（0.35%／100 g），大鼠麻醉后固定于解剖臺上，保持平臥位，剪去頸部正中范圍毛發，逐層鈍性分離組織直至頸總動脈，用手術縫線結扎遠端血管，夾住近端血管，挑起血管，在血管上剪一斜口，肝素沖管，再連接三通管－電極－生命信息處理系統，縫線固定，松開動脈夾，待血壓穩定后記錄頸動脈壓。

24 h尿蛋白定量：干預前后分別收集代謝籠中大鼠24 h尿量，采用雙縮脲法檢測尿蛋白定量。

血生化指標和殘余腎功能：測定頸動脈壓后，打開腹腔，行腹主動脈采血，將收集的血清靜置30 min后3000r／min離心15min，收集上清液，置－80℃冰箱保存。檢測IL－6，hs－CRP，TNF－α，MDA，SOD，SCr，BUN水平。

腎組織形態學變化：迅速摘取各組大鼠腎臟，剝離筋膜，肉眼觀察大體腎臟形態。并處理好腎臟組織后，縱向切開，取1／2組織放入甲醛內固定，用于病理切片PAS染色及HE染色。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 尾動脈收縮壓

與A組干預后比較，B組大鼠同時段的尾動脈收縮壓明顯升高（P＜0.05）；與B組同時段比較，C1組和C2組大鼠尾動脈收縮壓明顯降低（P＜0.05）。詳見表1。

表1 各組大鼠尾動脈收縮壓比較（±s，mmHg，n＝10）Tab.1 Comparison of SBP of rat′s caudal artery in each group（±s，mmHg，n＝10）

表1 各組大鼠尾動脈收縮壓比較（±s，mmHg，n＝10）Tab.1 Comparison of SBP of rat′s caudal artery in each group（±s，mmHg，n＝10）

注：與A組比較，*P＜0.05；與B組比較，＃P＜0.05。下表同。Note:Compared with those in group A，*P＜0.05；Compared with those in group B，＃P＜0.05；as well as the following tables.

組別劑量（mg／kg）給藥前給藥后1周給藥后2周給藥后4周給藥后6周A組B組C1組C2組2.55.0151.22±7.16162.58±8.46162.29±8.31162.37±8.32151.23±6.65157.63±7.49*130.65±5.46＃126.39±6.35＃150.45±6.35157.23±6.65*127.65±6.65＃121.41±6.32＃150.36±5.42157.46±7.65*124.46±5.36＃120.49±6.32＃150.62±5.68157.63±8.46*120.13±5.14＃117.45±5.26＃

2.2 頸動脈壓

與A組干預后比較，B組大鼠頸動脈壓明顯升高（P＜0.05）；與B組干預后比較，C1組和C2組大鼠頸動脈壓明顯降低（P＜0.05）。詳見表2。

表2 各組大鼠頸動脈壓比較（±s，mmHg，n＝10）Tab.2 Comparison of rat′s carotid pressure in each group（±s，mmHg，n＝10）

表2 各組大鼠頸動脈壓比較（±s，mmHg，n＝10）Tab.2 Comparison of rat′s carotid pressure in each group（±s，mmHg，n＝10）

組別A組B組C1組C2組劑量（mg／kg）2.55.0給藥前142.96±5.32153.36±10.23153.39±10.41153.87±10.56給藥后6周142.23±6.65155.13±11.65*110.13±10.14＃99.45±5.26＃

2.3 血生化指標

與A組干預后比較，B組大鼠血清hs－CRP，IL－6，TNF－α，MDA水平均明顯升高，SOD水平明顯降低（P＜0.05）；與B組干預后比較，C1組、C2組大鼠血清hs－CRP，IL－6，TNF－α，MDA水平均明顯降低，SOD明顯升高（P＜0.05）。詳見表3。

表3 各組大鼠血生化指標比較（±s，n＝10）Tab.3 Comparison of blood biochemical indexes of rats in each group（±s，n＝10）

表3 各組大鼠血生化指標比較（±s，n＝10）Tab.3 Comparison of blood biochemical indexes of rats in each group（±s，n＝10）

hs－CRP（ng／mL） IL－6（pg／mL） TNF－α（pg／mL） MDA（nmol／mL） SOD（U／mL）組別A組B組C1組C2組給藥前189.95±19.89212.77±20.41212.78±20.32212.51±20.19給藥后6周190.59±20.31211.64±18.55*191.65±18.46＃190.25±17.19＃給藥前19.88±6.8731.33±2.4531.25±2.3331.44±2.57給藥后6周21.86±6.6532.65±4.15*21.15±5.26＃21.23±4.29＃給藥前17.88±4.2534.65±1.4834.12±1.2334.36±1.51給藥后6周18.68±6.7935.71±3.37*18.45±3.62＃18.25±5.31＃給藥前6.35±1.2510.73±1.4910.15±1.2210.79±1.31給藥后6周7.16±2.3511.46±2.16*7.45±1.33＃7.61±1.29＃給藥前181.32±18.88204.80±20.41204.36±20.32204.45±20.75給藥后6周183.26±19.65162.82±10.19*184.56±15.46＃184.13±13.62＃

2.4 殘余腎功能

與A組干預后比較，B組大鼠SCr，BUN，24 h蛋白定量均明顯升高（P＜0.05）；與B組干預后比較，C1組、C2組大鼠SCr，BUN，24 h蛋白定量均明顯降低（P＜0.05）。詳見表4。

表4 各組大鼠殘余腎功能比較（n＝10）Tab.4 Comparison of residual renal function of rats in each group（±s，n＝10）

表4 各組大鼠殘余腎功能比較（n＝10）Tab.4 Comparison of residual renal function of rats in each group（±s，n＝10）

SCr（μmol／L） BUN（mg／dl） 24 h蛋白定量（mg）組別劑量（mg／kg）A組B組C1組C2組2.55.0給藥前120.95±10.52133.13±7.29133.52±7.86133.73±7.66給藥后6周120.01±8.15155.51±7.49*121.25±7.86＃121.68±9.74＃給藥前25.53±5.4532.35±6.5532.69±6.5332.27±6.41給藥后6周25.46±6.5437.55±3.35*26.69±6.53＃25.45±7.19＃給藥前25.58±7.2435.49±5.1935.63±5.1935.32±5.22給藥后6周25.58±7.2438.14±5.56*26.63±4.19＃26.26±8.44＃

2.5 腎組織形態學觀察

由圖1可見，HE染色下，A組、C1組、C2組的殘腎病理切片鏡下可見腎小球節段性硬化，且增生程度不一，屬基質增生。PAS染色下，A組殘腎病理切片鏡下可見腎小球內微小血栓形成，全球硬化，周圍炎性細胞浸潤，偶見球囊粘連；C1組可見腎小管－間質呈慢性病理改變，腎小管上皮細胞空泡變性及蛋白管型，腎間質纖維化及炎性細胞浸潤，多灶狀的腎小管萎縮；C2組可見腎小球硬化呈局灶節段性，囊腔變大或消失。

圖1 大鼠腎臟組織病理圖（×400）a.group A b.group B c.group C1 d.group C2 A.HE staining B.PAS stainingFig.1 Histopathology of rat′s kidney（×400）

3 討論

SH危害性較大，若血壓長期不達標，可造成靶器官損害，甚至致殘、致死［5］。SH已成為終末期腎功能衰竭的主要病因之一，且我國高血壓患者常合并腎功能損害，血壓控制不佳將加劇腎功能損害，需合理用藥以減少靶器官損害［6－7］。本研究中腎大部切除SH模型大鼠為實驗對象，建模過程與人類慢性腎臟疾病的進展過程類似，操作相對簡單、經濟［8］。

腎間質纖維化與腎臟細胞凋亡增多相關，而鈣離子拮抗劑能抑制腎臟細胞凋亡［9］。苯磺酸左旋氨氯地平作用于腎出球小動脈和入球小動脈，能改善殘余腎單位高代謝狀態時，但不會改變腎小球膜通透性，還可阻止鈣離子進入腎細胞內引起腎功能損害，有效降低去甲腎上腺素和血管緊張素Ⅱ對腎內的損害，有保護腎功能的作用［10－11］。本研究結果顯示，C1組、C2組大鼠的SCr，BUN，24 h蛋白定量高于A組、B組，且C2組明顯高于C1組，說明用藥干預后模型大鼠腎功能明顯改善。主要因為苯磺酸左旋氨氯地平在降壓期間并不會減少腎臟血流量，即便在達到降壓目標值時，也不會影響血流動力學，可減輕對腎功能的影響［12－13］；其大劑量使用可更好地消除氧自由基，在一定程度上減少腎實質缺血危險，阻止局部自由基形成，緩解軟組織鈣化，有效保護腎臟功能［14－15］。

高血壓腎損傷表現為系膜基質增生、腎小球硬化，血管活性物質平衡失調，炎性因子水平增加，血壓升高［16］。本研究結果顯示，C1組、C2組大鼠尾動脈收縮壓、頸動脈壓，以及hs－CRP，IL－6，TNF－α，MDA的降低幅度均明顯大于A組和B組，說明苯磺酸左旋氨氯地平在抑制血管平滑肌細胞遷移、穩定血壓、改善炎性因子水平中有一定作用。推測可能是該藥中左旋體成分能在蛋白及轉錄水平中降低炎性反應，有效保護靶器官［17］。C1組、C2組血壓、血生化指標比較無顯著差異，表明苯磺酸左旋氨氯地平降壓效果不受劑量影響。

綜上所述，苯磺酸左旋氨氯地平可保護5／6腎切除SH模型大鼠的殘余腎功能。但由于本研究樣本量少，無法反映總體趨勢，故需后期擴大樣本進一步研究。