昭通黃花酢漿草化學(xué)成分及不同采收期總黃酮含量的分析*

楊加瓊，姜潔欣，宗大慶，彭 野，成 嬌，趙靜峰

(1 昭通衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，云南 昭通 657000； 2教育部自然資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南省天然產(chǎn)物轉(zhuǎn)化與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南大學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650091)

酢漿草科酢漿草屬黃花酢漿草，在我國主要分布于云南、華北、華中、華南和四川等地。其全草均可入藥，性寒味酸，歸肝、肺、小腸經(jīng) ，民間調(diào)查及研究表明，酢漿草具有清熱解毒、抗炎殺菌、抗腫瘤、抗氧化、保肝等活性，還可用于治療跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)、痢疾、咽喉腫痛等癥，對心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等也有一定的影響[1]。現(xiàn)代研究表明，酢漿草中含有揮發(fā)油、萜類、酚酸、黃酮等多種化學(xué)成分[2]。為探討昭通黃花酢漿草藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對其全草進(jìn)行化學(xué)成分分析，以期尋找有效的活性成分，對其70% 乙醇提取物進(jìn)行分離提純得到6個(gè)化合物，鑒定了其中4個(gè)化合物，分別鑒定為：異牡荊素(1)、6-C-β-glucopyanosyl-7-O-methylluteolinidin(2)、原兒茶醛(3)、對羥基苯甲醛(4)。

酢漿草化學(xué)成分中黃酮含量較高，黃酮類化合物是一類重要的天然有機(jī)化合物，廣泛存在于自然界植物中，其生理活性主要有抗炎、抗毒素、抗菌等作用[3]，因此酢漿草藥理活性與總黃酮含量息息相關(guān)。一些藥材中黃酮類化合物在不同采收期的含量會有一定差異[4]，目前，酢漿草的黃酮類化合物研究多局限在總黃酮含量測定及提取工藝方面，關(guān)于酢漿草在不同的采收期總黃酮?jiǎng)討B(tài)積累是否有差異尚未見報(bào)道。為探討昭通黃花酢漿草總黃酮含量，課題組前期已采集昭通 6個(gè)地區(qū)黃花酢漿草測定其總黃酮含量[5]，本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，以2020年5月中旬至12月中旬采收的黃花酢漿草為研究對象，測定不同采收期黃花酢漿草總黃酮含量變化情況，以期為黃花酢漿草的合理采收提供相應(yīng)科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，UV-1900紫外可見分光光度儀，成都安恒達(dá)科技有限公司；Bruker DRX 400光譜儀，T-214電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；AB QSTAR脈沖星質(zhì)譜儀，JHBE-50S型閃式提取器，鄭州賽克斯玻璃儀器有限公司；Hei-VAP型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，鄭州予華。

柱層析硅膠(200～300目)，青島海洋公司；薄層層析硅膠板，德國Merck公司；所使用的乙醇、二氯甲烷等試劑， Aldrich、Acros、TCI、百靈威或韶遠(yuǎn)等化學(xué)試劑公司；樣品均采自昭通昭陽區(qū)北部新洲小區(qū)，采收時(shí)間分別為2020年5-12月共8批樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 化學(xué)成分

2.1.1 提取與分離

取干燥的酢漿草全草粉末5 kg，用70% 乙醇料液比1: 70，閃式提取法提取，每次提取3 min，提取三次，合并提取液過濾減壓濃縮得浸膏551 g。浸膏加水分散，分別用乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，減壓濃縮得正丁醇層浸膏123 g，乙酸乙酯層浸膏98 g ，正丁醇層先經(jīng)正相硅膠柱層析，以氯仿-甲醇(40 :1→0:1)梯度反復(fù)洗脫，得到3個(gè)組分，分別經(jīng)Agilent 1260高效液相色譜儀經(jīng)水-甲醇(20%:80%→50%:50%)反相反復(fù)洗脫，分離得到化合物1(15.1 mg)、化合物2(7.3 mg)，乙酸乙酯層以石油醚-乙酸乙酯(50:1→1:1)、氯仿-甲醇(60:1→1:1)進(jìn)行反復(fù)柱層析，分離得到化合物3(11.3 mg)、化合物4(10.5 mg)。

2.1.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末。 分子式為C21H20O10。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:7.88(2H，d，J=9.2 Hz，H-2′，6′)，6.90(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′) ，6.76(1H， s，H-3)，6.51(1H，s，H-8)，4.56(1H，d，J=9.6 Hz， H-1″)；13 C-NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ:162.5(C- 2)，102.7(C-3)，181.9(C-4)，161.1(C-5)，108.8(C-6)，162.2(C-7)，93.5(C-8) ，156.1(C-9)，103.3(C-10)，120.8(C-1′)，128.4(C-2′，6′)，116.1(C- 3′，5′)，160.6(C-4′)，73.1(C-1″)，70.5(C-2″)，78.7(C-3″)，69.8(C-4″)，80.9(C-5″)，61.3(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的異牡荊素基本一致。

化合物2：黃色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)(由于旋阻異構(gòu)引起信號分裂) δ:7.46(2H，overlap，H-2′，6′)，6.95 /6.93(1H，d，J=8.8 Hz，H- 5′)，6.88/6.86(1H，s，H-8)，6.84 /6.83(1H，s，H- 3)，4.61 /4.59(1H，d，J=9.2 Hz，H-1″)，4.57 /4.19(1H，t，J=9.2 Hz，H-2″)，3.90 /3.87(3H，s，7- OCH3)，3.71 /3.68(1H，d，J=10.8 Hz，H-6″a)，3.20 /3.18(1H，d，J=6.0 Hz，H-6″b)，3.14(3H，m， H-3″～5″)；13C-NMR(400 MHz，DMSO-d6)(由于旋阻 異構(gòu)引起信號分裂) δ:164.3 /164.2(C-2)，105.0 / 104.5(C-3)，182.7 /182.3(C-4)，160.7 /160.0(C-5)，110.1 /110.1(C-6)，164.1 /163.8(C-7)，91.4 / 90.6(C-8)，157.1 /156.7(C-9)，105.0 /104.5(C-10)，121.4 /121.2(C-1′)，110.1 /110.0(C-2′)，145.8 /145.5(C-3′)，150.7 /150.3(C-4′)，116.4 / 116.4(C-5′)，121.1 /121.1 (C-6′)，73.2 /72.8 (C- 1″)，70.7 /70.0(C-2″)，79.5 /79.5(C-3″)，70.7 / 70.1(C-4″)，82.0 /82.1(C-5″)，62.2 /61.9(C-6″)，56.9 /56.7(7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的6-C-β-glucopyrano-syl-7-O-methylluteolinidin基本一致。

化合物3：灰白色粉末。分子式為 C7H6O3。1H-NMR(400 MHz，Pyr-d5) δ:9.87(1H，s，-CHO)，7.80(1H，d，J=1. 6 Hz，H-2)，7.44(1H，dd， J=8.0，1.6 Hz，H-6)，7.27(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)；13C-NMR(400 MHz，Pyr-d5) δ:129.8 (C-1)，115.0(C-2)，146.0(C-3)，152.7(C- 4)，114.8 (C-5)，123.9(C-6)，190.7(-CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的原兒茶醛基本一致。

化合物4：白色固體。ESI-MS m/z:123[M+H]+；分子式為 C7H6O2。1H-NMR(400 MHz，CD3OD) δ:9.88(1H，s， -CHO)，7.77(2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6)，6.90(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)；13C-NMR(400 MHz，CD3OD) δ:133.4(C-1) ，136.7(C-2，6)，118.3(C-3，5)，166.5(C-4)，192.9(-CHO) 。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的對羥基苯甲醛基本一致。

2.2 不同采收期總黃酮含量測定

采用課題組前期文獻(xiàn)[5]相同方法，測定其吸光度，計(jì)算酢漿草總黃酮含量，測定結(jié)果見表 1。

表1 不同采收期酢漿草中總黃酮的含量Table 1 The content of total flavonoids in Oxalis corniculata L in different harvesting periods

3 討論與結(jié)果

由于試驗(yàn)時(shí)間比較短，因此分離得到的化合物較少，但所得到的化合物有其主要代表性黃酮類化合物異牡荊素。在不同采收期的酢漿草總黃酮含量分析中，結(jié)果表明，一年中不同月份采收的酢漿草總黃酮含量存在差異，6月總黃酮含量最高，12月總黃酮含量最低。大多藥材中總黃酮含量的變化波動(dòng)主要與其生長環(huán)境，生長周期，初采時(shí)間，采收次數(shù)等有關(guān)[8]。為了避免產(chǎn)地帶來的影響，我們選擇同一產(chǎn)地的酢漿草進(jìn)行研究，但在采收的過程中不能確定所采集樣品的具體初采時(shí)間、生長周期等因素，因此，有待于進(jìn)一步確保這些因素來研究酢漿草不同采收期總黃酮含量，以得到更準(zhǔn)確的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。但本試驗(yàn)所得結(jié)果還是能為昭通黃花酢漿草進(jìn)一步開發(fā)及確定黃花酢漿草采收期提供了相應(yīng)科學(xué)依據(jù)，避免了不適時(shí)宜的采集黃花酢漿草，造成資源浪費(fèi)，使黃花酢漿草藥材得到更有效的利用。