西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測血漿超敏肌鈣蛋白I 的性能驗證

韓莉莉，余鴻，陳點，賴力，王堯城，劉尚龍，林賽梅，黃毅，沈曉麗

福建醫(yī)科大學省立臨床醫(yī)學院·福建省立醫(yī)院 1 福建省立醫(yī)院中心實驗室，2 福建省心血管病重點實驗室 （福建福州 350001）

肌鈣蛋白已成為檢測急性心肌梗死的首選心肌損傷標志物[1-2]，超敏肌鈣蛋白I（high-sensitivity cardiac troponin I，hs-cTnI）以其靈敏度高和陰性預測值高的優(yōu)勢被廣泛應用于臨床。為保證檢測結果可靠準確，實驗室應對檢測方法進行確認，并通過客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實滿足檢測預期用途的特定要求[3-4]。本研究使用西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測hs-cTnI，所用試劑及校準品均為該儀器配套產(chǎn)品，并依據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）指南和國家認可委相關文件要求，對精密度、正確度、線性范圍、可報告范圍、攜帶污染率、功能靈敏度和參考區(qū)間等主要性能指標進行驗證，只有驗證通過后方可進行臨床檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建省立醫(yī)院心血管內科2021年1—4月住院患者8例、健康體檢者20名的經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標本。

1.2 儀器和試劑

西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀，原裝配套hs-cTnI 試劑（批號03513183），伯樂心肌質控品（批號67641、67643），試劑均在有效期內。

1.3 方法

采用西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標本中的hs-cTnI，并進行精密度驗證、正確度驗證、線性范圍驗證、可報告范圍驗證、攜帶污染率驗證、功能靈敏度驗證、參考區(qū)間驗證，具體如下。

1.3.1 精密度驗證

依據(jù)CNAS-GL037：2019[5]，選取低、高濃度的2個伯樂心肌質控品（批號67641、67643），各重復測定3次，連續(xù)測定5 d，計算標準差（standard deviation，SD）與變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）用于計算重復性精密度（批內精密度）和中間精密度（批間精密度），若重復性精密度（批內精密度）＜1/4 TEa（7.5%），中間精密度（批間精密度）＜1/3 TEa（10.0%），則驗證通過。

1.3.2 正確度驗證

依據(jù)EP15-A2文件[6]，以2020年發(fā)放的心肌標志物5個室間質評物作為參考物質，每個質評物分別測定2次，取平均值，比較平均值與回報靶值，計算相對偏倚，相對偏倚=[（平均值-回報靶值）/回報靶值］×100%，相對偏倚＜1/2 TEa（15%），且有≥80%的相對偏倚符合要求，則驗證通過。

1.3.3 線性范圍驗證

依據(jù)EP6-A2文件[7]，選擇接近廠家提供線性范圍上限的hs-cTnI 濃度作為高值（H），接近廠家提供線性范圍下限的hs-cTnI 濃度作為低值（L），按照L、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H 和H 比例配置6個濃度水平標本，每個濃度水平的標本重復測定3 次，以預測值為X，測定均值為Y，計算回歸方程Y=bX+a，若b 在0.97～1.03范圍內、相關系數(shù)（r）≥0.975，則驗證通過。

1.3.4 可報告范圍驗證

用接近線性范圍上限的高值標本原倍測2次，手工稀釋復測2次，稀釋回收率=（實測值/預期值）×100%,若稀釋回收率在90%～110%范圍內，則為可接受。根據(jù)高值標本對應的可接受稀釋回收率確定最大稀釋倍數(shù)，最大稀釋倍數(shù)×線性范圍上限值=可報告范圍上限值，可報告范圍下限值可直接取線性范圍下限值。

1.3.5 攜帶污染率驗證

依據(jù)EP10-A 文件[8]，分別選取低、高濃度的標本各1份連續(xù)上機檢測，得到高值（H1、H2、H3）和低值（L1、L2、L3），攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%，若攜帶污染率＜1%，則驗證通過。

1.3.6 功能靈敏度驗證選擇1份略低于廠家給定的功能靈敏度（0.017 μg/L）的標本，檢測20次，若CV≤20%，則驗證通過。

1.3.7 參考區(qū)間驗證依據(jù)C28-A2文件[9]，選擇20名健康體檢者（男10名，女10名；年齡20～75歲）的經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標本，心電圖、血常規(guī)、生化、B 超檢查結果均正常，進行hs-cTnI檢測，若≥90%的健康體檢者血漿hs-cTnI 水平在廠家參考區(qū)間（0.04 μg/L）內，則驗證通過。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用Excel 2007軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析。

2 結果

2.1 精密度驗證結果

低、高濃度的2個伯樂心肌質控品的重復性精密度（批內精密度）分別為2.70%、2.05%，＜1/4 TEa（7.5%）；中間精密度（批間精密度）分別為2.51%、1.18%，＜1/3 TEa（10.0%），驗證通過，見表1。

表1 精密度驗證結果（μg/L）

2.2 正確度驗證結果

5個室間質評物的相對偏倚均＜1/2 TEa（15%），驗證通過，見表2。

表2 正確度驗證結果

2.3 線性范圍驗證結果

以預期值為橫坐標，均值為縱坐標，進行直線回歸分析，觀察線性范圍，結果顯示，hs-cTnI濃度在0.007～48.076 μg/L線性范圍良好，r2=0.9986，相關方程為Y=0.9956X-0.7022，故驗證的線性范圍為0.007～48.076 μg/L，見圖1。

圖1 線性回歸曲線

2.4 可報告范圍

經(jīng)分析，hs-cTnI 的最大稀釋倍數(shù)為50倍，若稀釋倍數(shù)＞50倍，則稀釋回收率均＜90%。因此，可報告范圍的上限值=50×線性范圍上限值，最終確定可報告范圍為0.007～2403.8 μg/L。

2.5 攜帶污染率

H1、H2、H3分 別 為21.448、21.487、21.049 μg/L，L1、L2、L3分別為0.061、0.059、0.061 μg/L，攜帶污染率為0，驗證通過。

2.6 功能靈敏度驗證

選擇1份略低于廠家給定的功能靈敏度（0.017 μg/L）的標本，經(jīng)檢測20次后的CV為9.88%，驗證通過。

2.7 參考區(qū)間驗證

20名健康體檢者的經(jīng)肝素鋰抗凝的靜脈血漿標本hscTnI 結果均＜0.01 μg/L，驗證通過。

3 討論

西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀采用直接化學發(fā)光技術的3位點夾心免疫測試原理，對于檢測項目具有高靈敏度，且配套試劑穩(wěn)定、無毒無害，同時具有準確性高、操作簡便快速、標本用量少等優(yōu)點，可用于心臟標志物、甲狀腺激素、腫瘤標志物等多種微量物質的定量檢測中。

儀器性能驗證是保證檢測結果準確可靠的重要基礎，性能驗證和實驗室認可成為目前關注的熱點[10]。由于西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀說明書中提供的參數(shù)都是廠家在國外的實驗室最佳條件下完成的，而本研究實驗室的環(huán)境溫濕度、水電、操作人員水平等外部條件與其存在差異，因此，本研究依據(jù)指南和國家認可委相關文件要求，檢測血漿hs-cTnI 的性能，以保證為臨床提供準確、可靠、科學的實驗數(shù)據(jù)。本研究結果顯示，精密度驗證、正確度驗證、線性范圍驗證、可報告范圍驗證、攜帶污染率驗證、功能靈敏度驗證、參考區(qū)間驗證均通過。綜上所述，西門子ADVIA Centaur CP 全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測血漿hs-cTnI 的性能可以達到實驗室質量要求，滿足臨床需求。