全血標本孵育時間及溫度對糖化血紅蛋白檢測結果的影響

牛雅琪

摘要：目的：分析全血標本孵育時間及溫度對糖化血紅蛋白檢測結果的影響。方法：采集2017年12月1月～5日，體檢中心檢進行血糖檢測的50例對象，采集肘部靜脈血15ml全血，均分為250份樣本，分別孵育3、4、5、7、8min，孵育后放置室溫0、2、4、8、16℃，每個時間點以及溫度點各10份樣本。結果：不同全血樣本的孵育溫度、時間存在顯著差異（P<0.05），孵育5min、7min，2℃～8℃下處理糖化血紅蛋白水平差異無統計學意義（P>0.05）。在5min以下，隨著溫度的上升、時間的延長，糖化血紅蛋白水平呈上升趨勢，在5min以上，隨著溫度上升、時間延長，糖化血紅蛋白水平呈下降趨勢。結論：嚴格按照說明書操作，孵育時間過長、溫度過高都可能導致檢驗結果假陽性，溫度過低、時間過短或導致假陰性，孵育5min、2～8℃條件最為理想。

關鍵詞：糖化血紅蛋白;孵育;溫度;質量控制

【中圖分類號】R457???????????? 【文獻標識碼】A???????????? 【文章編號】2107-2306（2021）11--01

糖化血紅蛋白是糖尿病診斷、管理質量評價的重要指標，但仍然一項檢驗結果發揮其臨床價值的基礎是檢驗結果準確，能夠真實的反映患者指標水平]。 目前糖化血紅蛋白的檢測方法以儀器檢測為主，以羅氏全自動生化分析儀為典型達代表，在上樣前需要對全血標本進行孵育處理，孵育時間、溫度對檢測結果存在顯著的影響。本文嘗試采用對比分析，分析不同孵育時間、溫度對糖化血紅蛋白指標的因。

1資料及方法

1.1 一般資料

采集2017年12月1月～5日，體檢中心檢進行血糖檢測的對象，采集肘部靜脈血15ml全血，合計50例，其中男25例、女25例，年齡（34.1±6.2）歲。納入標準：①年齡18～55歲;②采樣前嚴格的質控，無溶血。

1.2? 方法

實驗室滿足美國國家糖化血紅蛋白標準化計劃認定的Ⅱ級定植實驗室要求：測定結果與定值偏倚95%的可信區間誤差在（-0.75%，0.75）區間內。樣本均嚴格按照標準處理，4℃保存，1周內使用，避免置于高溫環境下。嚴格的樣本采集管理，采血前不受飲食、采血間期的影響，采用乙二胺四乙酸抗凝劑采血管采集。將采集到無脂血、EDTA-2K抗凝、無黃疸與溶血的新鮮全血樣本15ml，每個患者的全血都平均分裝到250份樣本，每個樣本加入500μl密封小管中，樣本方法時裝入到冰袋中，維持樣本冷藏狀態。進行分組：分別孵育3、4、5、7、8min，孵育后放置室溫0、2、4、8、16℃，每個時間點以及溫度點各10份樣本，合計250份樣本。

1.3? 觀察指標

各個時間段、溫度段的樣本的檢驗結果。

1.4? 統計學處理

采用SPSS20.0軟件進行數學分析，糖化血紅蛋白水平服從正態分布采用（Mean±D）（）表示，比較采用t檢驗，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2? 結果

不同全血樣本的孵育溫度、時間存在顯著差異（P<0.05），孵育5min、7min，2℃～8℃下處理糖化血紅蛋白水平差異無統計學意義（P>0.05）。在5min以下，隨著溫度的上升、時間的延長，糖化血紅蛋白水平呈上升趨勢，在5min以上，隨著溫度上升、時間延長，糖化血紅蛋白水平呈下降趨勢。見表1。

3? 討論

本次研究顯示，不同全血樣本的孵育溫度、時間存在顯著差異（P<0.05），在5min以下，隨著溫度的上升、時間的延長，糖化血紅蛋白水平呈上升趨勢，在5min以上，隨著溫度上升、時間延長，糖化血紅蛋白水平呈下降趨勢。這可能與溫度上升以及時間的延長患者的紅細胞存活時間縮短有關。在8℃以上，患者全血生物活動明顯增強，在脫離人體后，更容易出現紅細胞死亡，隨著時間的延長，患者紅細胞的壽命明顯縮短，從而導致糖化血紅蛋白水平明顯下降。而孵育時間過短，則泡沫過多，則也容易導致假陰性。在0℃，溫度過低，達到接近冰點，則也干擾的孵育的效果，導致孵育不充分，從而導致上機后反應不充分，導致檢驗不充分。

最佳的孵育條件是5min、2～8℃最為理想，需要注意的是，不同儀器設備所使用的檢驗技術存在明顯的差異，孵育的最佳設計條件也存在差異。在實踐過程中，常出現放置時間過長、溫度過高情況，則實際檢驗過程中，常出現檢驗結果低于實際結果情況。這不利于2型糖尿病的及早診斷，也可能導致2型糖尿病假性控制。除孵育外，糖化血紅蛋白檢測質量還受到其他許多影響因素影響，如樣本質量、血液的質量、儀器設備的精密度等，有報道顯示失血性貧血會導致假性上升，缺鐵性貧血會導致糖化血紅蛋白水平假性下降。而糖化血紅蛋白的檢測質控并不僅僅是針對一個環節，需要加強全環節的質控。針對實驗室的質量，需要加強環境溫度的管理，必要時設計合適的孵育設備，實現孵育的時間、溫度的自動化控制。

我國糖化血紅蛋白測定標準化工作仍然處于起步階段，儀器缺乏標準化，不同機構的檢驗質控水平參差不齊，今后各級衛生機構需要加強自我的質量控制。國家衛生職能機構需要努力制定糖化血紅蛋白質控標準，針對不同的儀器設備、衛生機構的質控能力，制定不同級別機構的糖化血紅蛋白的質控技術規范。

小結：嚴格按照說明書操作，孵育時間過長、溫度過高都可能導致檢驗結果假陽性，溫度過低、時間過短或導致假陰性，孵育5min、2～8℃條件最為理想。

參考文獻：

[1]郭喜，廖遠泉，沈繼龍.糖化血紅蛋白實驗室檢測技術及方法學進展[J].臨床輸血與檢驗，2017，19（06）：646-650.

[2]王冬環.糖化血紅蛋白檢測標準化與中國現狀[J].中國實用內科雜志，2016，36（10）：841-844.