苦豆子總堿對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用*

鄔國棟，董佳妮，謝華祎，康松松，馮智翱，高 冰，張 東

(1.內蒙古科技大學包頭醫學院藥學院，內蒙古包頭 014040；2.基礎醫學與法醫學院；3.公共衛生學院)

隨著人民生活水平的不斷提高，飲酒人群和酒的消費量逐漸增加，相應酒精性肝病也逐漸增多。內蒙古作為高飲酒量地區，酒精性肝病的預防及治療是迫切需要解決的問題。苦豆子(Sophora alopecuroides L.)系豆科(Leguminosae)槐屬植物，藥用部位可以是全草，也可以是根及種子，是一種常用的中蒙藥材，主要成分有生物堿、黃酮和揮發油等，其中生物堿[苦豆子總堿(total alkaloids of sophora alopecuroides，TASA)]是其重要活性成分[1]。TASA具有抗炎、抗癌、抗菌和免疫調節等作用[2-4]。黃華等[5]研究發現，TASA對化學性肝損傷模型(如四氯化碳和D半乳糖胺所引起)和免疫性肝損傷模型(卡介苗加脂多糖引起)具有保護作用，可使谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)水平下降。本實驗擬應用50 %乙醇制備急性肝損傷模型，通過測定血清中各項指標及肝組織HE染色研究TASA對小鼠急性肝損傷是否具有保護作用及其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1主要材料與試劑 昆明種小鼠48只，雌雄各半，體重(22±2)g，購于斯貝福(北京)生物技術有限公司，合格證號：SCXK(京)2016-0002。苦豆子總堿(西安立森生物科技有限公司，含量為80 %)；無水乙醇(天津市凱通化學試劑有限公司)；聯苯雙酯(萬邦德制藥集團股份有限公司，生產批號：A02J181109)；ALT(生產批號：20191106)試劑盒、AST(生產批號：20191105)試劑盒、丙二醛(MDA，生產批號：20191108)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD，生產批號：20191108)試劑盒，均購自南京建成生物生物工程研究所。

1.2主要儀器與設備 AU640全自動生化分析儀(日本奧林巴斯公司)，酶標儀(賽默飛世爾科技有限責任公司)，Sartorius BSA224S-CW電子天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司)，TDZ5-WS多管架自動平衡離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)。

1.3方法

1.3.1給藥方案與模型制備 將小鼠隨機分為空白對照組、模型組、聯苯雙酯陽性對照組、TASA低、中、高劑量組，8只/組，根據查閱文獻與人鼠用藥比例折算[6-7]，TASA低、中、高劑量組分別按20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg灌胃，陽性對照組按3.4 mg/kg灌胃，模型與空白對照組給予相同體積生理鹽水，連續灌胃7 d，1次/d，末次給藥30 min后，除空白對照組外，各組按10 mL/kg給予50 % 乙醇[8]制備酒精性急性肝損傷模型，術前12 h禁食、不禁水。

1.3.2樣品采集與處理 小鼠摘除眼球取血，3 500 r/min離心，取上層血清于1.5 mL離心管中，-80 ℃保存，用于生化測定。分離肝臟組織，稱重，保存于10 %甲醛固定液中用于形態學檢查。

1.3.3肝臟系數測定 于規定時間頸椎脫臼處死小鼠并稱重，取肝臟稱重，計算肝臟指數[9]。肝臟指數(%)=[肝臟質量(g)/體重(g)]×100 %。

1.3.4血清生化指標測定 根據試劑盒說明書測定ALT、AST和SOD活性及MDA含量。

1.3.5組織病理學檢查 將肝臟浸泡于10 %甲醛固定液中，常規石蠟包埋，HE染色，于光學顯微鏡下觀察肝臟組織的病理學改變。

2 結果

2.1TASA對酒精所致肝損傷模型小鼠肝臟指數和血清ALT、AST含量的影響 與空白對照組相比，模型組肝臟指數升高(P<0.05)，ALT和AST含量也增加(P<0.05)。與模型組相比，TASA高劑量組肝臟指數降低(P<0.05)，TASA高、中劑量組ALT和AST含量降低(P<0.05)。見表1。

表1 TASA對小鼠肝臟指數和血清ALT、AST含量的影響

2.2TASA對酒精所致肝損傷模型小鼠血清MDA水平和SOD活性的影響 與空白對照組相比，模型組小鼠血清中MDA含量升高(P<0.05)，SOD活性降低(P<0.05)。與模型組相比，TASA高劑量組MDA含量降低(P<0.05)，中、低劑量組有降低趨勢，但無統計學差異(P>0.05)；TASA高、中、低劑量組SOD活性升高(P<0.05)。見表2。

表2 TASA對小鼠血清MDA水平和SOD活性的影響

2.3TASA對酒精性肝損傷模型小鼠肝組織病理學形態的影響 空白對照組小鼠肝組織結構正常，肝細胞排列整齊、有序，無細胞腫脹、脂肪變性、炎癥細胞浸潤等現象。酒精模型組肝細胞索排列紊亂，肝細胞腫脹、炎癥細胞浸潤且呈現大小不一的空泡，且細胞中著色深淺不一。與酒精模型組相比，TASA高、中、低劑量組肝組織病理學形態有較大改善，肝細胞排列較為整齊，細胞腫脹、壞死、炎癥細胞浸潤等現象減輕，脂質空泡減少。見圖1。

3 討論

臨床上判斷肝功能是否受損及受損的程度通常以ALT及AST水平的變化作為主要指標，而酒精性肝損傷患者的肝功能水平也會發生變化，ALT及AST水平會升高[10]。ALT和AST在正常血清中含量非常少，AST主要存在于肝細胞胞漿和線粒體內，ALT主要存在于肝細胞胞漿。當肝細胞受到損傷后，ALT與AST被釋放出來，所以可檢測到血清中ALT和AST含量，而血清中ALT和AST含量增加表明肝臟受到損傷[11]。本研究結果顯示，應用TASA組的小鼠肝臟指數減小，ALT和AST含量低于模型組，說明TASA對小鼠酒精性肝損傷具有一定的保護作用。

已有研究表明，酒精性肝損傷病理學改變主要為肝組織脂肪變性，顯微鏡下可觀察到脂滴，肝細胞索排列紊亂且肝細胞腫脹、增生、壞死、炎性細胞浸潤等現象，所以可通過HE染色分析肝臟的病變及病變的程度[12]。本實驗中TASA各劑量組肝組織病理學形態有較大改善，肝細胞排列較為整齊，細胞腫脹、壞死、炎癥細胞浸潤等現象減輕，脂質空泡減少。HE染色結果也說明TASA對酒精性肝損傷具有保護作用。

關于酒精性肝損傷的發病機制較多，其中氧化應激是導致酒精性肝損傷非常重要的發病機制之一，體內的氧化應激反應可通過酒精激活，從而使肝組織遭到破壞[13]。氧化應激導致的肝損傷最終會產生大量的脂質過氧化產物MDA，可用MDA反映組織過氧化損傷的程度，同時MDA還可造成細胞代謝和功能障礙；酒精及其代謝產物乙醛都可以引起肝細胞膜脂質過氧化，進而產生MDA[14]。SOD是體內的抗氧化酶，可以清除細胞內自由基，保護細胞免受氧化損傷，SOD水平的高低是衡量機體抗氧化能力大小非常重要的指標[15]。由本實驗研究結果可知，TASA可降低酒精性肝損傷小鼠血清MDA含量，升高SOD活性，說明TASA可以降低酒精性肝損傷的氧化應激作用，降低酒精對肝細胞的損傷，這可能是TASA發揮肝臟保護作用的原因之一。

綜上所述，TASA對急性酒精性肝損傷具有一定的保護作用，其機制可能與減輕氧化應激作用有關。