妊娠期高血壓患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平變化及其與病情嚴重程度之間的關系*

韓 琪

(鄭州大學附屬洛陽中心醫院 產科，河南洛陽 471000)

妊娠期高血壓(hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP)是一種臨床常見的妊娠并發癥，主要表現為血壓升高、水腫等，可以導致早產、低出生體重等母嬰不良結局的產生[1]。目前，妊娠期高血壓的發病機制尚不清楚，臨床主要采用預防抽搐、有指征地降壓等方法治療，但其治療效果并不理想[2]。分析HDCP發生發展的機制，尋找關鍵的分子標志物，評估病情進展，指導臨床治療具有重要意義。miRNA是一類具有調控作用的單鏈非編碼RNA，可以與靶RNA結合，在轉錄或翻譯水平上調節靶基因表達，在多種疾病的進展中發揮重要作用[3]。miR-218屬于miRNA家族，在HDCP患者血清中水平顯著下降，可以靶向抑制性別決定區域轉錄因子4(sex determining region Y-box 4，SOX4)表達，抑制滋養層細胞的遷移和侵襲，在HDCP患者中表達明顯下降[4]。miR-155是近年來發現的與免疫系統、心血管系統、婦科生殖系統等多種疾病有關的miRNA，可以靶向調節叉頭蛋白O3A(fork head protein O3A，FOXO3a)蛋白表達，調節HDCP大鼠的血壓變化[5]。內皮素(endothelin-1，ET-1)是一種存在于各組織細胞的血管活性物質，可以收縮血管，調節血壓和血流變化，參與HDCP的發生發展[6]。但HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平變化研究報道較少，且其水平變化與患者病情嚴重程度之間的關系尚不清楚。因此，本研究分析了HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平變化，并進一步分析了其水平變化與患者病情嚴重程度之間的相關性，旨在為臨床HDCP的治療提供一定的理論基礎。

1 對象與方法

1.1對象 選擇2018年6月～2020年6月本院收治的148例HDCP患者，年齡21～35歲，平均(28.51±3.24)歲，孕周35～39周，平均(37.61±2.56)周。根據病情嚴重程度分為單純性妊娠期高血壓(gestational hypertension，GHP)63例、輕度子癇前期(Mild preeclampsia，MPE)51例和重度子癇前期(severe preeclampsia，SPE)34例。另選擇100例同期于本院體檢的健康孕婦為對照組，年齡21～35歲，平均(27.96±3.36)歲，孕周35～40周，平均(37.26±2.85)周。兩組患者的年齡和孕周無明顯差異(P>0.05)。

1.2納入與排除標準 納入標準：符合《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》中HDCP的診斷標準[7]，均為單胎，均獲得患者及其家屬知情同意，經醫院倫理委員會通過。排除標準：妊娠前存在高血壓、糖尿病疾病等疾病患者；合并心、肝、腎等臟器疾病者；合并自身免疫性疾病者；合并惡性腫瘤、結核者；合并妊娠期糖尿病患者。

1.3觀測指標 記錄所有研究對象入組時的體重指數(body mass index，BMI)，采用無創血壓監測儀檢測各組患者的收縮壓(systolic blood pressure，SBP)和舒張壓(diastolic blood pressure，DBP)。清晨采集孕婦空腹靜脈血，離心(3500 rpm，10 min)，分離血清，采用雙抗體一步夾心法ELISA檢測血清ET-1蛋白水平，嚴格按照試劑盒說明操作(上海江萊生物科技有限公司)，全自動酶標儀(iMark680，購自美國Bio-rad公司)檢測450 nm下各孔的吸光度值，根據標準曲線，計算血清中ET-1水平。采用熒光定量PCR檢測血清miR-218、miR-155水平，先經miRNeasy Mini Kit 試劑盒提取血清總RNA，經反轉錄試劑盒反轉錄為cDNA，進行定量PCR反應，miR-218(上游引物：5’-ACATGGTTAGATCAAGCACAA-3’，下游引物：5’-TTGTGCTTGATCTAACCATGT-3’)，miR-155(上游引物：5’-CGCGCTTAATGCTAATCGTGA-3’，下游引物：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’)，以U6為內參，采用2-△△CT計算相對表達量。

2 結果

2.1HDCP患者的血壓 一般資料統計顯示，HDCP組患者的BMI與對照組無明顯差異(P>0.05)；無創血壓監測儀檢測結果顯示，HDCP組患者的SBP和DBP水平明顯高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 HDCP患者的血壓

2.2HDCP患者的血清miR-218、miR-155和ET-1水平 RT-PCR檢測結果顯示，HDCP組患者的血清miR-155相對表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，血清miR-218相對表達水平明顯低于對照組(P<0.05)，ELISA檢測結果顯示，HDCP組患者的血清ET-1蛋白表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，見圖1。

圖1 HDCP患者的血清miR-218、miR-155和ET-1水平

2.3不同嚴重程度HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平 RT-PCR檢測結果顯示，GHP組患者血清miR-218相對表達水平明顯高于MPE組和SPE組(P<0.05)，血清miR-155相對表達水平明顯低于MPE組和SPE組(P<0.05)；MPE組患者血清miR-218相對表達水平水平明顯高于SPE組(P<0.05)，血清miR-155相對表達水平明顯低于SPE組(P<0.05)。ELISA檢測結果顯示，GHP組患者血清ET-1蛋白表達水平明顯低于MPE組和SPE組(P<0.05)，MPE組患者血清ET-1蛋白表達水平明顯低于SPE組(P<0.05)。見圖2。

圖2 不同嚴重程度HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平

2.4血清miR-218、miR-155和ET-1與HDCP患者疾病嚴重程度之間的關系 采用變量賦值，GHP組=1，MPE組=2，SPE組=3，采用Pearson相關性分析顯示，HDCP患者血清miR-218水平與患者病情嚴重程度呈顯著負相關(P<0.05)，miR-155和ET-1水平與患者病情嚴重程度呈顯著正相關(P<0.05)。HDCP患者血清miR-218與miR-155、ET-1呈負相關關系(r=-0.412，r=-0.341，P<0.05)，血清miR-155與ET-1呈正相關關系(r=-0.328，P<0.05)。見表2。

表2 血清miR-218、miR-155和ET-1與HDCP患者疾病嚴重程度之間的關系

3 討論

HDCP是婦產科常見病，根據病情進展可分為GHP、MPE和SPE等，是導致母嬰不良結局的主要原因之一[8-9]。分析HDCP發生發展的機制，指導臨床防治工作的進行具有重要意義。本研究中，HDCP患者的SBP和DBP明顯高于健康人群，提示臨床需密切關注妊娠期的血壓變化，及時做好相關的預防治療措施。本研究中，HDCP患者血清ET-1明顯高于健康人群，且隨病情進展ET-1的水平明顯升高，提示血清ET-1水平變化與HDCP的病情發展有關。ET-1是一種強效的血管收縮因子，可以促進血管收縮，增加血管外周阻力，引起血壓升高[10]，提示HDCP患者的血清ET-1水平變化，可評估病情進展，指導臨床治療。

本研究中，HDCP患者血清miR-218明顯低于健康人群，miR-155明顯高于健康人群，且隨著病情進展，血清miR-218水平明顯下降，miR-155水平明顯升高。miR-218和miR-155均屬于miRNA，可以調節靶基因SOX4、FOXO3a等表達，參與調節機體的重要信號通路，參與HDCP的進展[11-12]。Kim等[13]研究顯示，miR-155還可以調節內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的表達，誘導內皮細胞功能紊亂，參與子癇前期的發生發展[13]，提示miR-218的水平變化與HDCP的發生和進展有關，但其具體機制尚需進一步深入研究探索。盧健翔等[14]研究顯示，miR-155可以調節滋養層細胞中炎癥因子的表達，影響妊娠期胎盤血流供應，促進HDCP的進展。研究結果表明，miR-218和miR-155均可以調節多種基因的表達，參與HDCP的發生的進展。本研究中，HDCP患者血清miR-218、miR-155和ET-1水平均與患者病情嚴重程度具有顯著的相關性，其血清miR-218、miR-155、ET-1之間亦有顯著的相關性。楊麗等[15]研究顯示，miR-155與血清ET-1水平呈顯著的正相關，具有潛在調控內皮功能作用，提示血清miR-218、miR-155和ET-1可以相互作用，共同調節HDCP的發生發展，但其具體的機制尚不清楚，需進一步探索。

綜上所述，HDCP患者血清miR-218水平明顯下降，miR-155和ET-1水平明顯升高，且其水平變化與患者病情嚴重程度具有顯著的相關性。