血清維生素D檢測方法研究進展研究

吳亮 邵振寶

浙江花園生物高科股份有限公司 浙江東陽 322121

維生素D屬于脂溶性維生素，在人體健康維持中發揮著至關重要的作用。維生素D缺乏易患佝僂病、軟骨病，出現關節疼痛、多汗、失眠等癥狀，嚴重降低患者生活質量；維生素過量容易出現心律不齊、頭痛、痢疾、心律不齊、軟組織石灰化等中毒癥狀[1]。既有研究證實，維生素D在心臟病、糖尿病、高血壓、精神分裂癥、骨質疏松、女性老年癡呆癥、肥胖癥等防治中發揮著至關重要的作用[2]。人體代謝循環中的維生素D主要以25（OH）D形式存在。同時臨床研究發現25（OH）D在血清的穩定性較強，不容易受機體調節影響，故臨床上多用25（OH）D作為衡量維生素D的重要指標，通過測定血清或血漿25（OH）D水平進行機體內維生素D狀況的評價[3]。鑒于此，本研究主要對血清25（OH）D檢驗方法研究進展進行綜述，具體如下。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法又被稱為“高速液相色譜法”、“近代柱色譜法，是檢驗領域應用較為廣泛的一種檢測技術。具有分析速度快、靈敏度高、分離效能高、應用范圍廣等優質。在維生素D檢測中，既能夠測定出血清25（OH）D2含量，也能夠測定出血清25（OH）D3含量。王劍以甲醇沉淀蛋白作為樣品，以二氯甲烷-正己烷混合溶劑為樣品提取溶劑，以甲醇—水（88:12）為流動相進行小兒血清25（OH）D3測定，結果顯示線性范圍10-200μg/L，回收率93-106%，日內變異系數＜4.5%。也有學者以類似方法進行成人血清25（OH）D3測定，指出線性范圍8-160μg/L，回收率92-109%，日內變異系數＜4.6%。可見用高效液相色譜法檢驗血清維生素D具有較好靈敏度、準確性。但也有研究指出高效液相色譜法操作難度較高，且對于血清25（OH）D2含量測定無法達到檢驗要求，不適于臨床普及應用。

2 液相色譜-串聯質譜法

液相色譜-串聯質譜法在國際上被認為是維生素D檢驗金標準，對血清25（OH）D具有較高靈敏度、準確性、特異度。且相對于高效液相色譜法而言，對25（OH）D2含量的測定效果更好。張敏,解曉露[7]等研究者以7歲以下兒童為研究對象，根據液相色譜-串聯質譜檢測原理，構建了用于檢驗末梢全血干血點25-OH-VitD3與25-OH-VitD2的定量檢驗方法，結果顯示25-OH-VitD3在0.5-100ng/mL范圍內具有良好線性關系，相關系數超過0.99；25-OH-VitD2在0.5-50ng/ml范圍內具有良好線性關系，相關系數超過0.99，定量限的最小值為0.5ng/ml。提示該方法在兒童維生素D水平檢驗中具有較好應用效果，且適用于采血條件有限群體。韓吉春,王小臣等學者在研究中心證實了液相色譜-串聯質譜法在血清25（OH）D水平檢驗中具有較高的準確度、精密度。但值得注意的是，液相色譜-串聯質譜法對樣品具有較高要求，樣品處理相對復雜，且前期投入成本較高，使其應用和推廣受到一定限制。

3 化學發光免疫檢測法

化學發光免疫檢測技術是基于免疫技術、化學發光技術結合發展下形成的一種檢測技術。具有檢測速度快、操作簡單、可自動化、可控制等優質。于偉越、趙瑞、劉洪川等學者對比分析化學發光免疫檢測法與液相色譜-串聯質譜法在血清維生素D水平檢驗中的應用效果，結果顯示化學發光免疫檢測法與液相色譜-串聯質譜法的檢測結果具有相關性，對血清25（OH）D含量測定具有較高準確性、特異度，能夠取代液相色譜-串聯質譜法應用于臨床實踐進行大規模血清25（OH）D水平測定，掌握受檢者維生素D情況。

4 電化學發光免疫測定法

電化學發光免疫測定是基于電化學發光技術、免疫技術、鏈霉親和素包被技術等有機結合下形成的一種檢驗方法，主要用于血清25（OH）D總含量測定，靈敏度、精準度較高。邢晏,馮長煥研究表示電化學發光免疫測定法在血清25（OH）D檢驗中具有較好應用性能，符合臨床檢測標準。黃少珍,薛雄燕等學者運用電化學發光免疫測定法檢驗青少年血清25（OH）D水平獲得較好結果，并有效驗證了25（OH）D水平與研究對象自身免疫性甲狀腺疾病存在的相關性。

5 其他檢測方法

除上述檢測方法外，酶聯免疫吸附法與全自動生化分析法也是檢測血清25（OH）D水平進行維生素D應用狀況評估較為常用方法。酶聯免疫吸附法與全自動生化分析法能夠對25（OH）D總量進行測定，操作方法相對簡單，適用于大規模維生素D營養狀況評估，進行維生素D缺乏者篩查。目前關于該方法的研究相對較少，其檢驗價值需要進一步研究驗證。

6 結語

總而言之，血清25（OH）D水平測定是檢驗人體維生素D狀況的主要途徑。在科學技術創新發展驅動下，血清25（OH）D水平測定方法呈現出多樣化發展態勢。且測定方法不同檢驗原理、檢驗步驟、檢驗結果也存在一定差異性。這就需要根據檢驗條件、檢驗環境、工作人員能力，結合對血清25（OH）D水平檢測要求進行分析，保證所選用方法應用的合理性、科學性、可行性。