藥物中阿莫西林含量的高效液相色譜法測定

王淑靜（河南省平頂山市食品藥品檢驗所,河南 平頂山 467021）

阿莫西林是一種青霉素藥品，抗菌性強，在臨床中應用廣泛，也是藥品研制和管理部門的重要研究對象。阿莫西林為β內酰胺類抗菌藥物，是常見的抗生素，對革蘭陽性菌和陰性菌的殺菌作用都比較高效[1]。檢測阿莫西林制劑、血樣等中含量的方法研究受到重視。根據阿莫西林具有酸堿兩性的特點，阿莫西林的含量測定大部分采用高效液相色譜法。檢測阿莫西林含量常用高效液相色譜法。高效液相色譜法以高壓下液體為流動相，使用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術，適用性廣泛，不會受到樣品熱穩定性及揮發性的影響，比氣相色譜法更有優勢[2]。高效液相色譜法靈敏度高，分離效能高，高速快捷，在醫學、化學、工業等方面發揮重要的作用。本文主要探討藥物中阿莫西林含量的高效液相色譜法測定。

1 資料和方法

1.1 一般資料 ①使用儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀、UV-2550型紫外-可見分光光度儀（日本島津）、METTLER TOLEDO XPE 205DR 型電子分析天平、自動進樣器、柱溫箱、四元泵、檢測器、脫氣機、色譜工作站。②使用藥劑：阿莫西林咀嚼片、色譜純乙腈、阿莫西林對照品、超純水等藥劑。

1.2 方法 ①參數設置：采取高效液相色譜法檢測，設置固定相的參數，預柱為（20×3.9mm），AgillentSB-C18色譜柱（4.6×150mm，3.5μm）。流動相為0.05mol·L－1磷酸鹽緩沖液，制備方法，使用13.6g磷酸二氫鉀，稀釋，通過加水溶解至2000mL，然后調節pH值，使用8mol·L－1氫氧化鉀溶液，直到pH值為（5.0±0.1）。柱溫設置為30℃。流速設置為1.0mL/min。乙腈（97.5∶2.5，v／v）。進樣量20μL。檢測波長為254nm。

②流動相配置：使用6.8g磷酸二氫鉀固體粉末，加純水1000mL溶解。取試劑瓶，采取量筒精密量取975mL磷酸二氫鉀溶液，放入其中。精密量取25mL乙腈溶液。與磷酸二氫鉀溶液混合。超聲處理10min，以備使用。

③對照品溶液制備：使用稀釋溶液、標準溶液等。取50mL量瓶，精密稱取阿莫西林對照品適量，放入其中。使用上述配置的流動相溶解。充分搖勻。對照溶液制成備用，規格為0.5mg/mL。

本次研究分析阿莫西林對照品溶液稀釋方法，稀釋與制備7種不同濃度標準的溶液以備實驗檢測。選擇應用7種實驗測定藥物。進行樣品檢測和分析。混合實驗檢測溶液與藥物，應用高效液相色譜法對樣品進行檢測分析，測定不同藥物中的阿莫西林含量。制備實驗檢測藥物樣品，混合檢測藥物及阿莫西林對照溶液。保證達到實驗相應的精確的濃度值。不同的濃度水平下，測定藥物樣品中阿莫西林的含量。嚴格按照有關規范操作，制備整個實驗檢測藥物樣品，并進行樣品檢測。根據要求嚴格控制操作，避免影響檢驗分析的精確性。

2 結果

2.1 線性及線性范圍 精密稱取適量阿莫西林對照品，將磷酸鹽緩沖液加入其中，制定濃度不同的混合溶液。濃度分別為：1.44mg/mL，1.20mg/mL，0.96mg/mL，0.71mg/mL，0.48mg/mL。混合不同藥物，測定分析進樣20μL。根據Y=15.89×106X＋11.61×105（R2=0.9998）回歸方程進行計算。結果顯示，阿莫西林濃度與其峰面積在0.48-1.44mg/mL質量濃度范圍內，具有良好的線性關系。

2.2 精密度試驗 取對照品溶液進行檢測，在標準曲線項下，平行檢測6次，結果如表1所示，應用高效液相色譜法顯示具有良好的精密度。

表1 精密度試驗結果

2.3 重現性試驗 精密稱取6份樣品，計算標示量，分別為100.5%，101.3%，102.1%，100.2%，101.5%，101.2%，RSD為0.75%，應用高效液相色譜法檢測顯示良好的重現性。

2.4 模擬回收率試驗 精密取適量阿莫西林對照品。將空白敷料及藥物加入，與處方量相符。進行均勻混合，計算回收率和測得量，結果如表2所示。藥物阿莫西林在不同的濃度下，檢測顯示阿莫西林成分，提取回收率大約88.3%-98.6%。檢測藥物阿莫西林中，應用高效液相色譜檢驗法，具有較好的提取回收率。并且適用于其他有關藥品制備及成分檢測。

3 討論

阿莫西林是新一代半合成廣譜抗生素，屬抗生素中的青霉素類藥物，帶有氨基側鏈，為世界衛生組織認定的口服β內酰胺類抗生素的首選[3]。對于許多革蘭氏陰性菌，阿莫西林的作用較強，比如嗜血桿菌、沙門菌、變形桿菌、大腸桿菌、巴氏桿菌、布魯菌等。對大多數革蘭氏陽性菌，阿莫西林的效力不及青霉素。對沙門菌、腸球菌屬，阿莫西林的效力比氨芐西林更強。對于耐青霉素的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌，阿莫西林不能發揮作用。細菌對氨芐西林、阿莫西林有完全的交叉耐藥性。阿莫西林制劑用藥方便，副反應少，殺菌力強，吸收迅速，性質穩定，并且價格便宜，應用比較廣泛[4]。阿莫西林的作用機制，主要是對細菌細胞壁合成的抑制。結合細菌胞質膜上的青霉素結合蛋白，使其喪失活性，阻礙敏感菌內黏肽的交叉連接，也激發細胞自溶酶的活性，同時提升菌體內滲透壓，胞內不斷進入胞外水分，最終導致菌體過度膨脹裂解死亡。阿莫西林一般稱為繁殖期殺菌劑，用于正在繁殖的細菌。阿莫西林結構中有氨基和羧基，具有兩性化合物的性質。早期檢測阿莫西林的方法眾多，比如流動注射化學發光法、分光光度法、旋光法、微生物效價測定法、電位滴定法、碘量法等。阿莫西林具有紫外吸收的特征，因為其結構中含有氨羥芐基[5]。阿莫西林是一種常見的抗生素類藥品，應用普遍且廣泛。

阿莫西林的化學特性，不溶于乙醇，可溶解于水。檢測研究阿莫西林藥物特性及作用，常用高效液相色譜法。采用高效液相色譜法，阿莫西林溶于水，流動性較好。為保證檢測中的色譜柱的穩定性，在檢測阿莫西林作用特性時，通常添加一定的乙腈，保障檢測結果的精確性[6]。但應用高效液相色譜法檢測與分析阿莫西林含量時，需要合理控制乙腈的添加量。如果乙腈不足，或者過多，就會對檢測結果產生影響。比如影響峰形、分離度、峰面積、保留時間等。在檢測操作中，雜質比較多。容易影響檢測阿莫西林含量的結果。藥物中阿莫西林含量應用高效液相色譜法進行檢測時，合理設置色譜條件，控制好色譜柱流動相。根據實驗條件的情況，控制流動相pH值，保證其在相應的標準范圍[7]。由此在分離操作中，能夠使峰值變化的主峰區分更加準確，保證阿莫西林含量檢測的可靠性。

高效液相色譜法檢測藥物中的阿莫西林含量，在阿莫西林標準品溶液中，加入空白藥物進行檢驗。濃度不同的情況下，藥物樣品的色譜圖變化也具有差異性。阿莫西林成分含量的峰面積存在差異。根據檢驗情況進行分析，及時記錄及調整。比較不同濃度下，藥物阿莫西林的色譜圖峰面積變化。分析藥物中阿莫西林含量提取回收情況。最大限度保證檢測藥物中阿莫西林含量的準確性。基于高效液相色譜檢測原理，還有反相色譜檢測、柱切法等，均可以準確檢測藥物中阿莫西林的含量[8]。但由于操作復雜性較高，或者儀器設備需求多，在實際檢測中很少應用。色譜法的分離原理是，各組分溶于流動相，經過固定相時發生作用，在固定相中滯留不同的時間，流出固定相。色譜法也稱為層析法、色層法。早在1906年，俄國植物學家茨維特發現色譜法。主要是用碳酸鈣分離植物色素時研究發現。隨后出現液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法等。液相色譜分析是色譜法中最古老的一種。也就是液體作為流動相的色譜技術。隨著技術的改進，引入氣相色譜的塔板理論，使用高靈敏度的檢測器，高效固定相，高壓輸液泵，從而實現自動化操作，具有更高的分離效率及分析速度，也就是高效液相色譜法。高效液相色譜法具有高速的特點，流速0.1-10mL／min[9]。高效液相色譜法具有高壓的特點，達到150-300kg/cm2。高效液相色譜法具有高靈敏度的特點，消耗樣品少，靈敏度可達0.01ng。高效液相色譜法具有高效的特點，能夠分離測定百余種物質。相比經典液相色譜法，高效液相色譜法的熒光和電化學檢測器可達0.1pg，紫外檢測器可達0.01ng，靈敏度高。對差異性很小的物質，高效液相色譜法也可以分離分析，分辨率高。高效液相色譜法的速度快，分析檢測一個樣品，通常15-30min，甚至有的樣品只需要5min內。應用高效液相色譜法，樣品量少，容易回收。不同的化合物，采用一根色譜柱即可，柱子可以反復使用。經過色譜柱后的樣品，可以收集，不會被破壞。

二十世紀六十年代，高效液相色譜法出現以來，在實際檢測分析中發揮重要的作用。高效液相色譜法實現了高靈敏度、高效、高速的分離檢測。其使用高靈敏度檢測器，全多孔微粒填充柱，以及高壓輸液泵。引入微處理機技術，吸收經典液相色譜的研制經驗，使高效液相色譜法的分析精度、儀器的自動化水平不斷提升。高效液相色譜儀應用微處理機控制，具有很高的自動化水平。不僅能夠對儀器的參數進行控制，并且可以根據需要設置色譜圖。控制儀器的檢測器功能，包括洗脫液收集，自動進樣，柱溫，流動相流量，溶劑梯度洗脫等。能收縮、放大色譜圖。并且能夠處理峰高、峰面積，對相關數據保留記錄[10]。成為功能齊全、高效的檢測分析工具。高效液相色譜法的應用范圍廣泛，尤其是分離分析熱穩定性差、強極性、大分子、高沸點等化合物。在醫學、化學、環保、農業、工業、法檢、商檢等方面，高效液相色譜法都是重要的檢測技術。高效液相色譜法是解決分離分析難題的重要工具，測定藥物的含量其品種已經達到上千種，對于質量控制、組成分析、測定含量等都具有重要的意義。由于高效液相色譜法的獨特優點，對于藥物阿莫西林含量的分析，高效液相色譜法具有良好的效果。

綜上所述，應用高效液相色譜法檢測阿莫西林含量，包括針對不同藥物濃度、稀釋溶液、阿莫西林標準品溶液，其便捷性、可行性和適用性較高。