雞傳染性法氏囊病對雞法氏囊和腺胃組織結構的影響

礎魯，烏仁套迪

（1.內蒙古自治區阿拉善左旗農牧業綜合行政執法大隊，內蒙古 巴彥浩特 750300；2.內蒙古自治區阿拉善盟畜牧研究所，內蒙古 巴彥浩特 750300）

雞傳染性法氏囊病 （Infectious bursal disease，IBD）是由雞傳染性法氏囊病病毒 （Infectious bursal disease virus，IBDV）所引起的中雛雞的一種急性、熱性、高度接觸性、殺傷淋巴細胞性的傳染病。近年來，本病被認為是與雞新城疫、雞馬立克氏病相并列的危害養雞業的三大傳染病之一。本病于1957年在美國Delaware州Gumboro鎮的肉雞群中被首次發現[1]。我國于1978年由周蛟等發現并于1982年分離到病毒[2]。不同品種的雞均易感，但土種散養雞較少發生[3]。病雞和帶毒雞是本病的主要傳染源，它們可通過糞便持續排毒1～2周。感染途徑包括消化道、呼吸道和眼結膜等，但尚無垂直傳播的證據[4]。在某些感染條件下，免疫抑制被認為是本病的重要后果[5]。IBDV的靶細胞是未成熟的B淋巴細胞或B前淋巴細胞，其在感染后很快發生變性和壞死。法氏囊是關乎B淋巴細胞成熟的重要器官,雞在感染IBDV后,淋巴濾泡內的B淋巴細胞大量裂解死亡,網狀細胞呈凋亡過程,最終導致法氏囊等器官萎縮而引起免疫抑制[5-7]。以上結果可導致雞群對其它疾病的易感性增強，疫苗(如新城疫、禽流感疫苗)接種的免疫應答能力下降[7]。法氏囊是禽類特有的淋巴器官，位于泄殖腔背側，并以短管與其相連。雞法氏囊的形狀為球形或橢圓形。性成熟前達到最大，以后逐漸萎縮退化直到完全消失。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗所用動物來自洛陽市近郊送檢的2～7周齡的疑似IBD病雞，臨床初步診斷為雞傳染性法氏囊病，經酶聯免疫吸附試驗（ELISA）確診為陽性。

1.2 器材

微量加樣器，聚苯乙烯塑料板，ELISA檢測儀，SD-2型推拉式三用切片機，202-AD電熱恒溫干燥箱，OLYMPUS光學生物顯微鏡。

1.3 試劑

碳酸鹽緩沖液，pH7.2的PBS-0.05%TWeen-20，pH7.4的0.1%白明膠，兔抗IBDV IgG，IBDV陽性對照血清，IBDV陰性對照血清，辣根過氧化物酶(HRP)標記的IBDV抗體(酶結合物)，pH5.0的磷酸鹽－檸檬酸緩沖液Ⅱ，硫酸溶液，甲醛溶液分析純，無水乙醇分析純，二甲苯分析純，石蠟，蘇木精-伊紅試劑，蛋白甘油。

1.4 方法

1.4.1 臨床學檢查。檢查病雞精神狀態、外觀變化、飲食狀況、糞便狀況和發育狀況等。

1.4.2 病理解剖學檢查。剖檢病雞，對胸肌、腿肌、法氏囊、輸尿管、泄殖腔、腺胃和肌胃交界處、盲腸扁桃體、肝、脾、肺和腎臟等進行常規解剖學檢查。

1.4.3 實驗室診斷。取一塊96孔聚苯乙烯板,加入兔抗IBDV IgG(用pH9.5的碳酸鹽緩沖液1∶20稀釋)，用量為每孔0.1 mL(2滴),于4℃條件下靜置24 h。其后倒盡板中各孔液體,加滿洗滌液,放置3 min。再棄去洗滌液，用濾紙拍干,反復3次。于第一孔加入樣品稀釋液作為空白對照,于第二孔加入陽性對照液,于第三孔加入陰性對照液,于其它孔加入被檢樣品。若樣品為法氏囊乳劑，則稀釋100倍，若為細胞培養物，則稀釋5倍，每孔加入0.1 mL（2滴），于濕盒中在37℃下靜置1 h。洗板，每孔加0.1 mL（2滴）酶結合物，于37℃下靜置 45 min。再次洗板，每孔加入新配制的底物溶液(含3% H2O2)0.1 mL（2滴），于室溫條件下靜置20 min，然后每孔加入 2 mol硫酸 0.05 mL（1滴）。

實驗室結果判定：

目測法:陽性的孔呈黃褐色，陰性的孔呈無色或極黃色。

比色法:用酶光分光光度計測定各孔OD（光密度）值,將空白對照調為O點,計算P/N比值。計算方法為：

圖7 腺小管間結締組織出血（400倍）

P/N≤0.15 為陰性，0.15＜P/N＜0.2 為疑似，P/N≥0.2為陽性。

1.4.4 病理組織學檢查。取病雞法氏囊和腺胃，采用常規石蠟切片制作法制作切片，HE染色，普通光鏡下觀察，選取適當典型病變視野進行拍照。

2 結果

2.1 大體變化

法氏囊是IBD病毒的靶器官，其大體變化有三類：一是大部分法氏囊由于水腫，體積和重量有所增加。其外觀顏色蒼白、有光澤，黏膜皺褶消失。二是由于充血、出血嚴重，使法氏囊外觀呈現紅色山楂樣。三是萎縮，質地較硬，有時黏膜出現黃白色干酪樣的壞死灶，周圍有一紅色炎癥反應帶。偶見腺胃與肌胃交界處出血。

2.2 組織病理學變化

與正常（見圖1）的法氏囊相比，顏色蒼白、水腫的法氏囊的特征是：上皮細胞變性、壞死。淋巴濾泡結構尚存，但大部分淋巴細胞已經消失，形成特征性結構，即濾泡中心為紅染嗜伊紅的玻璃樣物質，周圍由增生的網狀細胞排列成柵欄狀的反應帶。有時壞死部位為細胞碎片、網狀細胞、異嗜性白細胞及吞噬細胞所取代，濾泡間的間質增寬（見圖2），有紅染的水腫液。出血的法氏囊，主要在被膜下、濾泡間見有大量紅細胞，濾泡中心發生壞死（見圖3和圖4）。萎縮的法氏囊，可見上皮增生，由單層變成多層，濾泡體積縮小，濾泡間結締組織增生。有時濾泡中心也發生壞死，出現大量異嗜性白細胞浸潤。

圖1 正常的法氏囊（40倍）

圖2 病變的法氏囊（40倍）

圖3 法氏囊淋巴濾泡出血

圖4 法氏囊淋巴濾泡出血（400倍）

腺胃黏膜出血，上皮壞死脫落，腺胃結締組織出血（見圖6）。腺小管間結締組織出血（見圖7)。

圖5 正常的腺胃組織（40倍）

圖6 腺胃結締組織出血（40倍）

3 討論

法氏囊是法氏囊病毒的靶器官，所以IBD對法氏囊的侵害最為嚴重，于感染后1 d即可觀察到法氏囊濾泡的皮質和髓質區出現淋巴細胞變性和壞死，淋巴細胞很快被異嗜細胞、細胞碎片及增生的網狀內皮細胞所代替。感染3～4 d后所有的淋巴濾泡均受影響[8]。由于水腫、充血及異嗜細胞和漿細胞的聚集，法氏囊重量增加，淋巴細胞數量明顯減少，淋巴濾泡的皮質部變薄，幾乎被網狀細胞和結締組織所代替。濾泡髓質出現囊狀空洞，同時濾泡間的結締組織中有纖維組織形成。出現大小不等的囊泡，囊泡腔內有團塊狀玻璃樣物，法氏囊上皮細胞開始增殖并表現為腺樣構造。法氏囊組織結構的重大變化，使法氏囊的免疫功能大大降低，從而使禽類所特有的免疫器官的作用優勢減弱。對于正處于生長階段的雛雞來說，其體內各器官尚沒有發育成熟，對外界病菌的抵抗能力均較弱，若此時法氏囊器官被破壞，則免疫器官的功能就難以發揮。

本文著重闡述了法氏囊和腺胃的組織結構變化。此病對其他器官，如胸腺、脾、肌肉、腎臟、肝、肺和胃腸道等的組織結構也可產生明顯影響，但對免疫器官的影響最為嚴重。