紫外分光光度法研究不同發汗加工方法對玄參中多糖含量的影響*

鄧 瑩，劉 杰，魏學軍，許義紅

(黔南民族醫學高等專科學校，貴州 都勻 558000)

玄參是玄參科植物玄參ScrophularianingpoensisHemsl的干燥根，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結的功能，臨床常用于治療熱病熱入營血、溫毒發斑、熱病傷陰、舌絳煩渴、津傷便秘、骨蒸勞嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬與癰腫瘡毒等癥候，主產浙江、貴州、四川與河北等省區[1]。現有研究資料表明，其所含的多糖類成分具有抗疲勞、降血糖、增強機體免疫力等多種生物活性[2-4]，可作為評價玄參質量的指標性成分。

產地加工是影響中藥材品質的重要因素，《藥典》(2020年版)記載玄參加工方法為“采挖后除去根莖、幼芽、須根及泥沙，曬或烘至半干，堆放3～6天，反復數次至干燥”，該方法實則為傳統的“發汗”加工，“發汗”可使藥材變色、變軟、增加香味或減少刺激性，是質地堅實、水分含量較多和含有刺激性成分的中藥材常用的產地加工方法。據文獻記載，目前對玄參的“發汗”加工方法，除了用《藥典》方法加工外，各地采用的加工方法各不相同[5]，從而導致玄參的質量參差不齊。本研究以多糖含量為考察指標，探討不同“發汗”加工方法對玄參中多糖含量的影響，以期為其建立科學的產地加工方法提供實驗性理論依據。

1 材料與儀器

1.1 材 料

試驗用新鮮玄參購于貴州省遵義市道真縣玄參種植基地，經黔南民族醫學高等專科學校中藥教研室李香教授鑒定為玄參科植物ScrophularianingpoensisHemsl的根。葡萄糖對照品購自天津市科密歐化學試劑有限公司(批號：110833-201707)；余試劑均為分析純。

1.2 儀 器

Cary 100型雙光束紫外-可見分光光度計，北京Agilent公司；SG-4050C型數顯恒溫水浴鍋，上海碩光公司；AE240型電子分析天平，瑞士MettLer公司；DHG-9240A型真空干燥箱，上海金山公司。

2 方法與結果

2.1 樣本的確定

試驗藥材經高效液相色譜法測定玄參中哈巴苷和哈巴俄苷的總量符合2020版《中國藥典》規定(不少于0.45%)。

2.2 樣品的制備

2.2.1 傳統“發汗”品(A1)[1]

按《藥典》記載方法操作。將新鮮玄參洗凈后，曬至半干，于陰涼通風處堆放3天，取出，曬1天后再堆放，反復5次即可干燥。

2.2.2 傳統“發汗”品(A2)[1]

按《藥典》記載方法操作。將新鮮玄參洗凈后，于60 ℃烘至半干，于陰涼通風處堆放3天，取出，60 ℃烘30 min后再堆放，反復3次即可干燥。

2.2.3 蒸后“發汗”品(A3)[6]

將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內隔水蒸30 min(按“圓氣”后計)后，取出，曬至半干，余步驟同“2.2.1”項。

2.2.4 蒸后“發汗”品(A4)

將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內隔水蒸30 min(按“圓氣”后計)后，取出，于60 ℃烘至半干，余步驟同“2.2.2”項。

2.2.5 煮后“發汗”品(A5)[6]

將新鮮玄參洗凈后，于沸水中煮30 min后，撈出，曬至半干，余步驟同“2.2.1”項。

2.2.6 煮后“發汗”品(A6)

將新鮮玄參洗凈后，于沸水中煮30 min后，撈出，于60 ℃烘至半干，余步驟同“2.2.2”項。

2.3 多糖含量測定方法[7]

2.3.1 供試品溶液的制備

精密稱取A1～A6玄參樣品各10.0 g置于圓底燒瓶中，分別加入95%乙醇100 mL，于80 ℃回流2 h，重復提取2次，藥渣再加100 mL蒸餾水回流提取2h，趁熱抽濾，重復提取兩次，合并濾液濃縮至一定體積，加無水乙醇至含醇量80%，放置24 h，抽濾，沉淀依次用乙醇、丙酮、乙醚各10 mL洗滌，50 ℃干燥，稱重，得玄參樣品粗多糖。精密稱取A1～A6玄參樣品粗多糖各5.0 mg加蒸餾水定容至50 mL容量瓶中，各樣品均制備3份供試品溶液，冷藏備用。

2.3.2 對照品溶液的制備

精密稱取105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖5.01 mg，置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻制備得100.20 μg/mL的葡萄糖對照品溶液。

2.3.3 線性關系考察

精密吸取100.20 μg/mL的葡萄糖對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分別置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度并搖勻，配制成系列葡萄糖標準溶液。準確吸取系列標準溶液各2 mL于具塞試管中，分別移入1 mL 5%苯酚溶液，再迅速加入濃硫酸7 mL，搖勻，40 ℃水浴30 min，再放入冰水中冷卻至室溫。將顯色后的葡萄糖標準溶液在200～700 nm間掃描，其在486 nm處有最大吸收，確定為檢測波長。以蒸餾水為空白對照，在486 nm處測定上述顯色葡萄糖標準溶液的吸光度，以葡萄糖溶液濃度為橫坐標C(μg/mL)，吸光度為縱坐標A進行回歸，結果A=0.2308C+0.0043，r=0.9993，表明多糖在4～24 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.4 方法學考察

精密吸取A1樣品多糖供試液，按“2.3.3”項下方法連續測定吸光度6次，結果RSD=0.15%，說明儀器精密度良好。精密吸取多糖對照品溶液，按“2.3.3”項下方法分別在 0、10、20、30、60、90、120 min 測定吸光度，結果RSD=1.26%，結果表明多糖對照品溶液在120 min 內穩定性良好。精密稱取A1樣品粗多糖5.0 mg，5份，加蒸餾水溶解，定容于50 mL容量瓶中，搖勻，按“2.3.3”項下方法測定吸光度，多糖含量的RSD=2.0%，表明該方法重復性良好。精密稱取A1樣品粗多糖3.0 mg，6份，置于50 mL容量瓶中，分別精密加入葡萄糖標準品適量，加蒸餾水溶解并定容，搖勻，按“2.3.3”項下方法測定，葡萄糖平均回收率為98.90%，RSD值為1.28%。

2.3.5 含量測定

精密稱取A1～A6玄參樣品粗多糖各5 mg，加蒸餾水溶解，定容于50 mL容量瓶中，搖勻，按“2.3.3”項下方法測定吸光度并計算多糖含量，結果見表1。

表1 不同“發汗”加工方法多糖含量比較Table 1 Comparison of the contents of polysaccharides in different “sweat”processing methods

3 結 論

表1結果顯示，不同“發汗”加工方法對玄參中多糖的含量有影響。采用煮后“發汗”制品(A5和A6)的含量較《藥典》記載的“發汗”制品(A1和A2)和蒸后“發汗”制品(A3和A4)高，且具顯著性差異，究其原因，可能與溫度和加工時間有關。藥材中植物細胞和某些物質為維持自己的生物活性，需消耗一定的營養物質(如多糖等)，煮的溫度較高，能使植物細胞和某些活性物質在較短時間內滅活，減少了對多糖的消耗，因而含量較高。而蒸的溫度更高，可能對多糖的結構產生破壞，因而含量較煮后“發汗”制品低。同時，采用《藥典》“發汗”的兩種制品(A1和A2)含量上亦具有顯著性差異，采用烘至半干后再“發汗”的制品(A2)高，原因與適宜的烘干溫度快速除去部分水分，減少了多糖的水解有關。該結果提示，實際應用中若以多糖的治療作用或藥理作用為主時，可對《藥典》記載的“發汗”加工方法進行改進，建議選用“煮后”發汗對玄參進行產地加工。