加速溶劑萃取GC-MS分析黃虎掌菌提取物

高 偉，賈有春，段新勇，呂俊美，蔣艷瓊

(云南潤玉生物技術有限公司，云南 玉溪 653100)

黃鱗多孔菌(Ellis’s Polypore)，俗稱黃虎掌菌，系地花孔菌科真菌，學名大孢地花孔菌(Albatrellusellisii(Berk.)Pouzar(≡PolyporusellisiiBerk.))[1-3]，是中國100種名蘑之一[4]。目前對黃虎掌菌研究較少，僅見于對黃虎掌多糖提取及抗氧化活性研究[5]，對營養成分分析評價[6]等。文獻報道地花菌類含有一些生物活性物質[7-9]，為進一步深入研究黃虎掌菌的活性成分，本實驗嘗試使用加速溶劑萃取儀提取黃虎掌菌中有機提取物，并利用氣相色譜-質譜聯用儀(GC-MS)進行分析，以便為黃虎掌菌的開發利用提供技術支持。

1 實 驗

1.1 材料與試劑

黃虎掌菌干品購于昆明市野生菌交易市場，經有關專家鑒定為黃虎掌菌。干燥樣品經旋風磨粉碎后過40目篩備用。

甲醇、乙腈：色譜純，美國fisher公司。

1.2 儀 器

Agilent 7890B-5975C型氣相色譜-質譜聯用儀，美國Agilent公司；Buchi Speed Exactor E916型加速溶劑萃取儀，瑞士Buchi公司；Buchi Multivapor P-6型平行濃縮儀，瑞士Buchi公司。

1.3 樣品處理

稱取3 g樣品粉末(精確至0.01 g)于小燒杯中，加入3 g無水硫酸鈉、3 g石英砂，混合均勻后裝入樣品池，加入15 mL甲醇-乙腈(v/v=1:1)加壓萃取。萃取溫度：120 ℃；萃取壓強：12 MPa；萃取時間：4 min，循環3次；氮氣吹掃2 min。提取結束后將接收液在平行濃縮儀上濃縮，定容至2 m。

1.4 分析條件

色譜條件：色譜柱：Agilent DB-5MS毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣：高純氦；流速：1 mL/min；進樣口溫度：280 ℃；進樣量：2 μL，分流比：15；程序升溫：初溫50 ℃，保持2 min；以5 ℃/min升至200 ℃，保持5 min；以5 ℃/min升至250 ℃，保持6 min。

質譜條件：EI源；掃描范圍：35～450 Da；傳輸線溫度：200 ℃；離子源溫度：150 ℃。

2 結果與討論

黃虎掌菌樣品經加速溶劑萃取，萃取液經濃縮后，用氣相色譜-質譜聯用儀分析，總離子流色譜圖見圖1，成分較為復雜。利用NIST(2011版)和WILEY(8th版)譜庫檢索分析，結合自動質譜解卷積系統，最終鑒定出29種化學成分，結果如表1所示。29種成分中有5種酮、3種醇、2種醛、6種酯、9種酸、2種甾醇、2種其它類化合物。

圖1 黃虎掌萃取物GC-MS分析的總離子流色譜圖Fig.1 TIC chromatogram of Ellis’s Polypore exactive

根據文獻[10-11]星魚甾醇(stellasterol)是生物活性物質；奇果菌素(grifolin)是地花菌特有的生物活性物質，具有抗菌、抗氧化、抑制抗腫瘤細胞活性[12-15]；脂肪酸是要用真菌常見的化學成分，從多孔真菌分離的脂肪酸有豆蔻酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸[16]等，本實驗也檢測出豆蔻酸、棕櫚酸、亞油酸、硬脂酸及相應的酯類；檢出的甘露醇與文獻[7]一致。

3 結 論

加速溶劑萃取是在加壓加溫的條件下提取，相比振蕩提取、超聲提取更為快速，提取更為充分。本文利用加速溶劑萃取可快速高效地提取云南野生黃虎掌菌的有機物質，含量較高的有29種，主要是酮、醇、醛、酯、酸和甾醇等，其中一些是文獻報道的活性成分，可為野生黃虎掌菌的開發利用提供技術基礎。

表1 黃虎掌菌加速溶劑萃取物的化學成分Table 1 Chemical components of extractivefrom Ellis’s Polypore