COPD并發感染患者PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1的臨床價值研究

李國干 程宏寧 周安燕 林良奮

流行病學研究表明，慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmoriary disease，COPD）并發感染的發病率可超過697/1 萬人左右［1］。臨床上COPD 合并感染的發生，能夠導致患者重癥肺炎、敗血癥或者感染性休克的發生，增加了COPD 合并感染患者病死的風險［2］。對COPD 合并感染的病情評估能夠為臨床上相關患者的診療提供理論方面的參考。白介素?6（Interleukin? 6，IL?6）的表達上升，能夠通過誘導T 淋巴細胞的功能紊亂，進而加劇肺泡上皮組織的免疫性損傷［3］；外周血中性粒細胞表面P?選擇素糖蛋白配體1（P?selectinglycoproteinli?gand1，PSGL?1）能夠提高選擇素家族因子的激活程度，促進下游趨化因子的激活，最終促進其對于肺泡間質組織的浸潤，促進感染性病情的進展［4］；外周血單個核細胞中膜聯蛋白A1 是炎癥調控的相關因子，對于下游中性粒細胞或者單核細胞的募集程度具體提高作用，最終促進感染的發生［5］。為了揭示PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1 的表達與COPD 合并感染的病情的相關性，以期為臨床診療提供參考依據，本文探討了PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1 的表情況，進行如下報道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年6月至2020年11月期間在定安縣人民醫院呼吸內科治療的COPD 患者84 例及COPD并發感染患者85 例，同時將83 例健康體檢者作為對照組。納入標準：①所有入組患者均符合COPD 穩定期的診斷標準［6］。②受試者及其家屬知情并同意。排除標準：①合并有其他嚴重性疾病；②排除2周內應用過抗生素者。3 組受試者一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 3 組受試者一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data of three groups（±s）

表1 3 組受試者一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data of three groups（±s）

組別對照組COPD 組COPD 并發感染組χ2/F 值P 值n 83 84 85男/女49/34 44/40 46/39 0.804 0.669年齡（歲）64.58±9.23 63.74±9.96 63.97±9.53 0.301 0.740

1.2 實驗方法

采用淋巴細胞分離液體進行外周血的分離，去除外周血單個核細胞（Peripheral blood mononu?clear cell，PBMC）血漿，PBS 重新懸浮后取取白細胞層于離心管中，1 000 r/min 離心15 min，加入紅細胞膜裂解液，室溫下放置20 min，1 000 r/min 離心15 min，去除上清液體，PBS 洗滌2 次，加入100 μL生理鹽水預混，準備進行PSG?1 檢測；取患者肘部靜脈血5 mL 自然放置，然后測試IL?6 水平。將上述搜集的液體加入96 孔的酶標板中，采用ELISA法進行PSG?1 及IL?6 的檢測。

抽取受檢者的肘部靜脈血并離心取上層液體，使用由北京奧維亞生物公司生產的試劑盒對其進行RNA 的提取，逆轉錄成cDNA 后進行基因的擴增；基因的合成和引物設計使用primer 5 軟件，其中GADPH 是內參，膜聯蛋白A1 引物5′CAAGGACCAACTACAACC 3′：下游5′TGCCTC TTCTTTAATTG3′，經歷45 個循環后進行曲線溶解，每個孔設置3 個復孔，取其平均值。抽取受檢者的肘部靜脈血并離心取上層液體，使用由貝克曼庫爾特公司生產的UniCel DxI 800 免疫發光儀器對膜聯蛋白進行檢測，配套試劑盒由北京九強生物公司生產。

1.3 統計學方法

使用SPSS 23.0 進行數據統計分析。計量資料以（±s）描述，多組間的比較為單因素方差分析，兩兩比較t檢驗。計數資料以n（%）描述，行χ2檢驗。有關指標對生存預后的評估價值分析ROC。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組患者血清中IL?6 水平比較

COPD 并發感染組血清IL?6、PSG?1、膜聯蛋白A1 mRNA 和膜聯蛋白A1 水平明顯高于COPD 組和對照組，COPD 組血清IL?6、PSG?1、膜聯蛋白A1 mRNA 和蛋白水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 3 組血清IL?6 水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum IL?6 levels among 3 groups（±s）

表2 3 組血清IL?6 水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum IL?6 levels among 3 groups（±s）

注：與對照組比較，a P<0.05；與COPD 組比較，bP<0.05。

n對照組COPD 組COPD 并發感染組F 值P 值83 84 85 IL?6（ng/L）10.84±1.79 101.70±20.42a 132.85±27.54ab 847.958 0.000 PSG?1 437.21±19.83 513.87±21.37a 532.69±24.71ab 442.592 0.000膜聯蛋白A1 mRNA 相對表達量1.15±0.53 1.35±0.78a 2.87±1.23ab 94.604 0.000膜聯蛋白A1 蛋白相對表達量0.74±0.06 0.81±0.12a 1.57±0.64ab 118.923 0.000

2.2 COPD 合并感染不同預后患者IL?6、PSG?1 等水平比較

COPD 合并感染組死亡患者血清IL?6、PSG?1、膜聯蛋白A1 mRNA 相對表達量和膜聯蛋白A1 蛋白相對表達量明顯高于存活患者（P<0.05）。見表3。

表3 COPD 合并感染不同預后患者IL?6、PSG?1 等水平比較（±s）Table 3 Comparison of IL?6 and PSG?1 levels in COPD patients with different prognosis（±s）

表3 COPD 合并感染不同預后患者IL?6、PSG?1 等水平比較（±s）Table 3 Comparison of IL?6 and PSG?1 levels in COPD patients with different prognosis（±s）

預后n IL?6（ng/L）PSG?1死亡存活t 值P 值15 70 70 150.02±23.33 120.02±21.12 4.902 0.000 550.03±21.13 520.03±20.01 5.219 0.000膜聯蛋白A1 mRNA相對表達量2.91±0.92 2.42±0.82 2.056 0.043膜聯蛋白A1蛋白相對表達量1.71±0.42 1.40±0.30 3.369 0.001

2.3 A1 mRNA、蛋白水平和IL?6、PSG?1 等4 指標對COPD 合并感染患者不同預后的評估價值

以死亡組為陽性樣本，以存活組為陰性樣本，建立ROC 曲線診斷分析模型，結果顯示：聯合應用對COPD 合并感染患者不同預后的評估價值明顯高于各指標單獨應用，AUC（0.95CI）為0.845（0.733～0.951），準確度為0.847（72/85）（P<0.05）。見表4、圖1。

表4 A1 mRNA、蛋白水平和IL?6、PSG?1 等4 指標對COPD 合并感染患者不同預后的評估價值Table 4 the value of A1 mRNA and protein levels，IL?6，PSG?1 and other four indicators in evaluating different prognosis of COPD patients with infection

圖1 ROC 曲線圖Figure 1 ROC curve

3 討論

長期的支氣管哮喘、慢性支氣管炎，均能夠促進COPD 的發生，在合并有基礎性的糖尿病或者其他代謝性疾病的患者中，COPD 合并感染的發生率可進一步的上升［7］。臨床上COPD 合并感染的發生，能夠導致患者多器官功能衰竭的發生，增加了COPD 患者致殘或者病死的風險［8］。現階段缺乏對于COPD 合并感染患者病情評估的血清學指標，雖然降鈣素原能夠在COPD 合并感染的診療過程中發揮作用。但部分研究發現，采用降鈣素原評估COPD 合并感染患者病情的靈敏度較低，其評估患者病情的靈敏度不足35%，評估的假陽性率較低［9］。

PSGL?1 是中性粒細胞調控相關因子，其能夠通過募集下游中性粒細胞酶，促進下游趨化因子的釋放，最終促進炎癥反應的播散；IL?6 是炎癥性相關因子，其不僅能夠參與到炎癥反應過程中，同時IL?6 還能夠誘導T 淋巴細胞的功能紊亂，加劇自然殺傷性T 淋巴細胞的毒性作用。基礎方面的研究還顯示，IL?6 的上升能夠導致肺泡血管內皮細胞的損傷，增加了炎癥因子的擴散風險；膜聯蛋白A1 是炎癥調控因子，其對于下游粘附素的激活，能夠提高膜蛋白的結合程度，提高相關炎癥性因子對于肺泡上皮細胞的粘附和損傷程度。有研究者在對IL?6 的表達與COPD 患者的病情關系的研究中發現，合并感染的COPD 患者中，IL?6 的表達顯著上升［10］。

本文結果提示了PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1 的高表達均能夠影響到COPD 患者感染的病情進展。就其原因，是由于PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1的下列方面的病理性損害有關［11］：①PSGL?1 的上升，能夠提高下游炎癥性信號通路NF?KB 的激活程度，促進肺泡支氣管平滑肌細胞的炎癥性浸潤，最終促進支氣管的痙攣和狹窄；②IL?6 的表達上升，能夠提高巨噬細胞的激活程度，促進其對于肺泡間質或者上皮細胞的損傷；③膜聯蛋白A1 能夠降低膜結合蛋白酶的穩定性，導致其對于肺泡上皮細胞膜溶解程度的增加。任芳等［12］研究者也指出，合并感染的COPD 患者中，IL?6 的表達濃度會平均上升30%以上，且在重癥感染或者合并有其他組織器官感染的患者中，IL?6 的表達濃度可進一步的上升。對于膜聯蛋白A1 mRNA 的表達與COPD 患者臨床預后的關系分析也可見，在臨床預后較差的患者中，膜聯蛋白A1 mRNA 的表達濃度可進一步的上升，提示了相關指標與COPD 患者臨床轉歸的關系［13?14］。而進一步的ROC 分析，則顯示這些指標預測COPD 患者臨床轉歸/預后，均有比較好的應用價值，其AUC，無論是多個指標的聯合應用，還是各個指標的單獨應用，都大于0.7。

綜上所述，在合并感染的COPD患者中，PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1 及mRNA 均顯著上 升，同時PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1 及mRNA 與COPD 患者的臨床預后密切相關。臨床上可以通過檢測PSGL?1、IL?6、膜聯蛋白A1 及mRNA，進而預測COPD 患者的臨床轉歸情況。