兒童Hp感染相關(guān)性胃炎miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg水平監(jiān)測(cè)與療效的相關(guān)性

張靜 李常娟 邢雅杰

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是慢性胃炎的主要患病原因［1］，目前，臨床研究主要以成年人胃炎感染為主［2?3］，關(guān)于兒童胃炎報(bào)道較少。新近研究［4］指出成人人群的Hp 感染多在兒童期獲得，預(yù)防和根除兒童Hp 感染可減少成人期相關(guān)疾病的發(fā)生。資料顯示，微小RNA?146a（mi?croRNA?146a，miR?146a）被證實(shí)參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)和對(duì)細(xì)菌的應(yīng)答等多種生物學(xué)活動(dòng)，與兒童哮喘的Hp 感染密切相關(guān)［5］。C 反應(yīng)蛋白（Creactive protein，CRP）與白蛋白（Albumin，ALB）比值（CRP/ALB）是評(píng)估炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物，與炎癥程度間存在良好線性關(guān)系［6］。但其在Hp 感染相關(guān)性胃炎中的變化情況尚未明確。報(bào)道［7］指出，輔助性T17 細(xì)胞（T helper cell 17，Th17）與調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（T regulatory cell，Treg）的平衡為人體重要免疫防御機(jī)制，Hp 感染性胃潰瘍患者胃黏膜形態(tài)損害可能與Th17/Treg 細(xì)胞失衡有關(guān)，對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)可輔助評(píng)價(jià)胃黏膜損害情況。本研究嘗試探討miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平監(jiān)測(cè)與兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效的相關(guān)性。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 取2017年1月至2020年1月本院80 例Hp感染相關(guān)性胃炎患兒，其中男51 例，女29 例；年齡12～16 歲，平均（14.85±0.82）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］；②均經(jīng)13C 尿素呼氣試驗(yàn)確診為Hp 感染；③年齡12～16 歲；④對(duì)本研究藥物無禁忌；⑤無其他消化系統(tǒng)疾病；⑥患兒監(jiān)護(hù)人知曉本研究，已簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①血液系統(tǒng)疾病患兒；②惡性腫瘤患兒；③自身免疫性疾病患兒；④神經(jīng)系統(tǒng)疾病患兒；⑤臟器功能不全者；⑥慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等傳染性疾病患兒；⑦肺部感染、泌尿系感染等其他部位感染患兒。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2 方法

治療方法：所有患兒均行三聯(lián)療法治療，口服奧美拉唑（遼寧億帆藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20064652）0.6～1.0 mg/Kg·d，分2 次（餐前口服），口服阿莫西林（濤生制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H34022208）50 mg/（kg·d），分2 次（最大劑量1 g，2 次/d），口服克拉霉素（寧夏啟元國藥B）有限公司，國藥準(zhǔn)字H20103113）15～20 mg/（kg·d），分2次（最大劑量0.5 g，2 次/d）。持續(xù)治療2 周，停藥1月后評(píng)估療效，參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：分為：治愈、顯效、有效、無效，將治愈、顯效、有效患兒納人療效良好組，將無效患兒納入療效不良組。

實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)方法：采集所有患兒入組當(dāng)天（治療前）空腹外周靜脈血6 mL，取其中2 mL 血液標(biāo)本，離心處理后取血清，采用實(shí)時(shí)熒光免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)血清miR?146a 水平，RNA 提取試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Pro?mega 公司，PCR 試劑盒購自德國Qiagen 公司，檢測(cè)操作均由專業(yè)人員嚴(yán)格按照試劑盒說明書完成，應(yīng)用公式2?ΔΔct計(jì)算miR?146a 相對(duì)表達(dá)水平。取2 mL 血液標(biāo)本，離心處理后取血清，采用OTA?400 型全自動(dòng)生化分析儀（購自沈陽萬泰醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司）檢測(cè)血清CRP、ALB 水平，并計(jì)算CRP/ALB 水平。取2 mL 血液標(biāo)本，采用貝克曼Coulter Epics XL 型流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血Th17、Treg 表達(dá)情況，并計(jì)算Th17/Treg比值。

1.3 觀察指標(biāo)

①兩組臨床資料、miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平，臨床資料包括性別、年齡、病程，分析Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒療效影響因素。②分析miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平對(duì)兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 22.0 軟件，計(jì)數(shù)資料以n（%）描述，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）描述，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)系數(shù)模型，通過Logistic 進(jìn)行多因素回歸分析，預(yù)測(cè)效能分析采用受試者工作特征（ROC）曲線，獲取曲線下面積（AUC），不同預(yù)測(cè)方案間曲線下面積比較采用DeLong 檢驗(yàn)，聯(lián)合預(yù)測(cè)實(shí)施Logistic 二元回歸擬合，獲得返回預(yù)測(cè)概率logit（p），將其作為獨(dú)立檢驗(yàn)變量進(jìn)行ROC 分析，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同療效患者臨床資料

本研究80 例Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒治療2 周后，治愈40 例，顯效15 例，有效10 例，無效15 例，療效良好組65 例，療效不良組15 例。不同療效患者病程相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 不同療效患者臨床資料對(duì)比［n（%）］Table 1 Comparison of clinical data of patients with different curative effects［n（%）］

2.2 不同療效患者miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平

療效良好組miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg水平均低于療效不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 不同療效患者miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平對(duì)比（±s）Table 2 Comparison of miR?146a，CRP/ALB，Th17/Treg levels in patients with different therapeutic effects（±s）

表2 不同療效患者miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平對(duì)比（±s）Table 2 Comparison of miR?146a，CRP/ALB，Th17/Treg levels in patients with different therapeutic effects（±s）

組別療效良好組療效不良組t 值P 值n 65 15 miR?146a 3.25±0.87 4.84±1.16 5.977<0.001 CRP/ALB 2.58±0.76 3.26±1.07 2.880 0.005 Th17/Treg 0.32±0.09 0.68±0.17 11.553<0.001

2.3 兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效影響因素

以兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效為因變量（療效良好=0，療效不良=1），將表1、2 中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義因素作為自變量，納入Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示病程、miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平均為兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效影響因素（P<0.05）。見表3。

表3 兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效影響因素Table 3 Factors influencing the curative effect of gastritis associated with Hp infection in children

2.4 miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平對(duì)兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效的預(yù)測(cè)價(jià)值

繪制miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平對(duì)兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效的預(yù)測(cè)價(jià)值的ROC曲線，顯示聯(lián)合預(yù)測(cè)AUC 最大，且>0.9，具有良好預(yù)測(cè)效能，最佳敏感度、特異度分別為86.67%、95.38%（P<0.05）。見表4，圖1。

圖1 各指標(biāo)預(yù)測(cè)療效的ROC 曲線Figure 1 The ROC curve of each index predicting curative effect

表4 miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平對(duì)兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效的預(yù)測(cè)價(jià)值Table 4 The predictive value of miR?146a，CRP/ALB，Th17/Treg levels，and pathological changes under gastroscopy on the curative effect of children with Hp infection?related gastritis

3 討論

慢性胃炎為臨床最常見消化系統(tǒng)疾病之一，其患病率高居各種胃病首位［10］，大量研究［11?12］證實(shí)，長期反復(fù)的Hp 感染可導(dǎo)致胃黏膜萎縮、腸上皮化生，甚至發(fā)生惡性病變。因此，盡早給予有效治療對(duì)改善Hp 感染相關(guān)性胃炎患者預(yù)后至關(guān)重要，而治療過程中準(zhǔn)確評(píng)估病情變化對(duì)調(diào)整治療干預(yù)措施具有重要指導(dǎo)價(jià)值。

本研究發(fā)現(xiàn)，奧美拉唑三聯(lián)療法治療療效不良Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒病程明顯高于療效良好患兒，進(jìn)一步經(jīng)多因素分析發(fā)現(xiàn)病程≥2年也是兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。Hp 細(xì)胞毒素能破壞胃黏膜完整性，隨著患兒病程延長，Hp 感染引起的胃黏膜破壞越嚴(yán)重，從而增加治療難度，預(yù)后越差。

本研究還發(fā)現(xiàn)，療效不良患兒miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平均高于療效良好患兒，提示上述指標(biāo)均與患兒療效有關(guān)。miR?146a 是miR?146家族成員，其基因編碼位于人染色體5q33.3 處，可通過抑制核因子?κB 通路活化發(fā)揮抗炎作用［13］。國內(nèi)相關(guān)研究［14］發(fā)現(xiàn)，肺炎患兒外周血miR?146a 水平明顯升高，其表達(dá)水平與炎性因子腫瘤壞死因子?α、白介素?6、白介素?8 呈正相關(guān)，可能通過上調(diào)炎性因子表達(dá)參與疾病進(jìn)展。國外一項(xiàng)研究［15］顯示，miR?146a 能夠調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的抗感染能力，使其更容易受病原體侵襲發(fā)生感染。據(jù)此筆者推測(cè)miR?146a水平升高可促進(jìn)炎性因子釋放、抑制受體細(xì)胞的抗感染能力，從而促進(jìn)Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒病情加重，最終影響治療效果。研究［16］顯示，Hp 細(xì)胞壁上存在脂多糖，具有誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞分泌炎性因子的作用，可引發(fā)胃黏膜發(fā)生炎癥反應(yīng)損傷。CRP 是反映炎癥狀態(tài)的敏感性指標(biāo)，有文獻(xiàn)［17］證實(shí)，CRP/ALB 可較好預(yù)測(cè)感染性疾病的發(fā)生，且其預(yù)測(cè)效果優(yōu)于單純使用CRP、降鈣素原等常規(guī)炎性標(biāo)志物。Th17 與Treg 的動(dòng)態(tài)平衡是維持機(jī)體免疫防御能力的重要機(jī)制之一，其中Th17 細(xì)胞是T 淋巴細(xì)胞亞群的一員，具有誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用，其表達(dá)增加可促進(jìn)白細(xì)胞介素17、白細(xì)胞介素22 等多種炎性因子的產(chǎn)生，且能促使炎性因子在炎癥部位聚集，加重炎癥損傷［18?19］。而Treg 細(xì)胞是一種具有免疫抑制活性的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞，具有抑制炎性因子分泌的作用［20］。CRP/ALB、Th17/Treg 水平升高均提示患兒局部炎癥反應(yīng)加重，對(duì)胃黏膜的損傷增加，病情越嚴(yán)重，因此治療效果越差。

本研究進(jìn)一步通過ROC 曲線分析，發(fā)現(xiàn)miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平在預(yù)測(cè)兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎療效方面均具有一定價(jià)值，尤其是各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC 達(dá)到0.964，預(yù)測(cè)價(jià)值較高，可為臨床預(yù)估患兒治療效果提供重要參考，從而指導(dǎo)治療方案的調(diào)整。

綜上可知，Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒miR?146a、CRP/ALB、Th17/Treg 水平越高，療效越差，早期檢測(cè)各指標(biāo)水平可輔助臨床預(yù)測(cè)患兒療效。本研究存在樣本量較少的不足，研究結(jié)果可能存在一定誤差，仍需通過大樣本研究進(jìn)一步驗(yàn)證。