減肥袋泡茶總黃酮含量測定的方法學研究

◎ 何春艷，關天竹，譚國慧，吳洪亮

（綠瘦健康產業集團股份有限公司，廣東 廣州 510385）

黃酮類化合物是廣泛存在于自然植物中的植物次生代謝產物，其種類繁多，結構類型多樣，國內外大量的研究證實此類化合物具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、調節心血管和減肥等多種生物活性及藥理作用[1-3]。在降脂減肥方面，黃酮類化合物主要通過促進脂肪β-氧化、抑制脂肪酶和脂肪酸合酶活性、促進機體能量代謝、反饋抑制食欲等方面發揮作用[3]。天然植物原料荷葉、決明子、澤瀉、山楂和綠茶等均含有黃酮類化合物，也常用于減肥的保健食品中。本文研究所用的減肥袋泡茶由山楂提取物、決明子提取物、荷葉提取物、澤瀉提取物和綠茶提取物等組方，總黃酮為該產品的標志性成分之一。筆者采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，對其中總黃酮含量進行測定，并對其方法學進行考察，旨在為同類型產品的研發及質量控制提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器

P9紫外分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）、5810r高速離心機（艾本德）、DFY500搖擺式高速粉碎機（溫嶺市大德藥機公司）、AUW220D分析天平（島津）、XT-1030T超聲波清洗機（廣東順德先泰超聲工程設備有限公司）和層析柱（外徑：20 mm，濾芯：G1）。

1.1.2 供試品及試劑

綠瘦碧迪牌秀爾茶（河南恒春堂藥業有限公司）；蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院）；聚酰胺粉（國藥集團滬試：100～200目）；乙醇、石油醚I、甲醇、三水合乙酸鈉、硝酸鋁和乙酸均為分析純。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線制備

精密稱取蘆丁標準品10.00 mg置于50 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至50 mL，即得0.2 g·L-1蘆丁標準儲備溶液，儲存于冰箱備用。分別精密量取蘆丁標準品溶液0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL和2.50 mL置于25 mL比色管，先加入0.5 mL10%的硝酸鋁溶液，再加0.5 mL 0.2 mol·L-1乙酸-乙酸鈉溶液（pH=5.6），搖勻，用70%乙醇定容至刻度，搖勻靜置30 min顯色后，在波長406 nm處測其吸光度值，用空白試劑作參比。以蘆丁標準品的質量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.2 樣品液的制備

取適量綠瘦碧迪牌秀爾茶內容物在粉碎機中粉碎，混勻備用。稱取1.0 g均勻樣品，加25 mL 75%乙醇，搖勻后超聲提取30 min，定容25 mL，4 000 r·min-1離心5 min備用。稱取聚酰胺粉2 g于蒸發容器中，吸取4 mL上清液吸附于粉上，于70 ℃揮發去除乙醇，然后轉入層析柱洗脫。先用約20 mL石油醚I洗去雜質，吹盡醚液，棄去，然后用無水甲醇洗脫黃酮，定容至50 mL作為待測樣品液。

1.2.3 樣品的測定

取1.2.2的樣品液10 mL于25 mL比色管中，加入70%乙醇定容至刻度，搖勻作為樣品空白。另取樣品液10 mL到25 mL比色管，先加入0.5 mL10%的硝酸鋁溶液，再加0.5 mL0.2 mol·L-1乙酸-乙酸鈉溶液（pH=5.6），搖勻，用70%乙醇定容至刻度，搖勻靜置。30 min后，參比樣品空白，在波長406 nm處測其吸光度值，通過標準曲線得出樣品液蘆丁含量，計算出樣品的總黃酮含量。

1.2.4 重復性

精密稱取袋泡茶內容物1.0 g，共6份，按照1.2.2的方法制備樣品液，按照1.2.3的方法進行6個樣品的測定，由同一操作人員、同一時間、同一儀器重復測定6次，計算結果的相對標準偏差（RSD）。

1.2.5 中間精密度

在不同日期、不同人員、不同儀器的情況下重復測定6個樣品。與上述重復性試驗結果進行比較，計算結果的相對標準偏差（RSD）。

1.2.6 加標回收率

以重復性試驗總黃酮含量平均值作為樣品本底值，用低（80%）、中（100%）、高（120%）3種水平加標量進行加標試驗，共稱取9個樣品，于樣品中分別加入不同量蘆丁對照品，按照1.2.2的方法制備樣品液，按照1.2.3的方法進行9個樣品的測定，計算樣品的加標回收率。

2 結果與分析

2.1 標準曲線繪制

以蘆丁質量為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線。標準曲線方程為y=1.024 9x-0.000 8，R2=0.999 9。表明蘆丁在0～0.5 mg檢測濃度范圍內與對應的吸光度呈良好的線性關系，見圖1。

圖1 蘆丁標準曲線圖

2.2 重復性結果

由表1可知，測得6個樣品的平均含量為1.13 g/100 g，相對標準偏差RSD為2.27%，符合方法要求[4]。

表1 重復性結果表

2.3 中間精密度結果

由表2可知，不同日期、不同人員、不同儀器條件下分別平行測定6個樣品，測得的平均含量為1.15 g/100 g，相對標準偏差RSD為2.57%，符合方法要求[4]。

表2 中間精密度結果表

2.4 方法回收率

以重復性試驗總黃酮含量平均值1.13 g/100 g作為計算本底值，用低（80%）、中（100%）、高（120%）3種水平加標量（相當于加入9.0 mg、11.3 mg、13.6 mg蘆丁標準品）進行加標試驗，共稱取9個樣品，按試驗方法操作，于樣品中分別加入不同量蘆丁對照品，按試驗方法處理進行比色測定。結果如表3所示，方法平均加標回收率在97.43%，符合回收率在95%～105%的要求[5]。

表3 回收率實驗結果表

3 結論

植物中黃酮含量的測定主要有紫外分光光度法、HPLC法、毛細血管法等，本試驗采取的紫外分光光度法具有儀器設備簡單、操作簡便易掌握、重復性好、準確度和精密度較高等特點，應用最為廣泛[6]。本文采用紫外分光光度法進行減肥袋泡茶的總黃酮含量測定，方法的重復性、中間精密度、回收率均良好，可作為同類型產品中總黃酮類化合物的測定方法，為相關產品的研發和質量控制提供了依據。