T淋巴細胞亞群CD3+，CD4+，CD8+及CD4+/CD8+類風濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中的變化

胡學敏

（東北國際醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000）

類風濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是當前臨床常見且發(fā)生率較高的一種自身免疫性疾病。到目前為止，該病的發(fā)病機制依舊不明，其發(fā)生后可使患者的關(guān)節(jié)受損，臨床特征包括自身免疫進程、慢性炎癥及滑膜增生等。該病的患病時間較長，具有較高的致殘率及復發(fā)率，現(xiàn)階段深受臨床相關(guān)領(lǐng)域的關(guān)注[1]。有關(guān)資料顯示，RA的發(fā)生與自身免疫功能異常存在緊密聯(lián)系，T淋巴細胞在一定程度上影響RA的發(fā)生及發(fā)展[2]。本研究主要針對RA患者T淋巴細胞亞群CD3+，CD4+，CD8+及CD4+/CD8+變化進行分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究觀察組為2020年8月至2021年7月本院50例RA患者，對照組為同期50名健康體檢者。對照組：男28例，女22例；最小年齡25歲，最大年齡76歲，均值（43.82±5.13）歲；患病時間：4個月～21年，平均患病時間（5.62±0.57）年；文化水平：小學8例，初中12例，高中9例，大專及以上21例。觀察組：男26例，女24例；最小年齡23歲，最大年齡75歲，均值（43.78±5.16）歲；文化水平：小學10例，初中11例，高中10例，大專及大專以上19例。兩組臨床資料對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準：①自愿簽署研究同意書。②具備正常溝通、理解和表達能力，且研究資料齊全。③意識清晰。排除標準：①合并免疫系統(tǒng)疾病或者血液系統(tǒng)疾病。②存在嚴重心理疾病或者有精神疾病史。③哺乳期婦女或者妊娠期婦女。④合并惡性腫瘤或者凝血功能障礙。⑤存在嚴重感染、心腦血管疾病或者結(jié)締組織疾病。⑥合并心、腎等器質(zhì)性病變。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 在清晨空腹狀態(tài)下采集兩組患者的靜脈血4 mL，肝素鋰抗凝，要求在2 h內(nèi)完成檢測，檢測方法為熒光顯微鏡免疫熒光法，檢測指標有CD3+，CD4+，CD8+，聯(lián)合配套試劑。

1.2.2 試劑 選用由中國醫(yī)學科學院血液病研究所提供的Ficoll分離液，也就是淋巴細胞分離液；選用由北京天潤善達生物制品有限公司提供的PBS；選用由天津百若克醫(yī)藥生物技術(shù)有限責任公司提供的D-Hanks'液；選用由協(xié)和干細胞基因工程有限公司提供的羊抗鼠熒光標志物。

1.2.3 方法 ①分離外周血單個核細胞：采集受檢者2 mL清晨空腹靜脈血，應(yīng)用EDTA-2Na進行抗凝，經(jīng)D-Hanks'液進行等體積稀釋，均勻混淆，向離心管中緩慢添加Ficoll分離液（4 mL），然后實施密度梯度離心，時間20 min，2 000 r/min，小心吸取中層云霧狀的單核細胞層，采用D-Hanks'液進行2遍沖洗，離心5 min，1 200 r/min；重懸細胞后，對細胞濃度進行調(diào)整，使其調(diào)整為1×107/mL。②染色：在塑料離心管中添加細胞懸液40 μL，然后添加特異性單克隆抗體（50 μL），放置于4 ℃環(huán)境中，經(jīng)洗滌液進行2次洗滌，洗滌液每次添加約2 mL，按照1 000 r/min的速度進行5 min離心操作，去除上清液后，添加羊抗鼠熒光標志物（50 μL），均勻搖晃，放置于4 ℃環(huán)境中保存30min，同時采用洗滌液進行2次洗滌，每次添加約2 mL，然后按照1 000 r/min的速度進行5 min離心操作，去除上清液，制定符合濃度的懸液，滴至計數(shù)板中進行觀察。③計數(shù)：于熒光顯微鏡下對CD3+，CD4+，CD8+進行觀察并計算，分析各管中熒光細胞占各自血管中總細胞數(shù)的比值。

1.3 觀察指標 觀察CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

觀察組CD3+，CD4

+和CD4+/CD8+低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；觀察組CD8+高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組T淋巴細胞亞群指標對比（）

表1 兩組T淋巴細胞亞群指標對比（）

3 討論

RA是臨床發(fā)生率較高的一種自身免疫性疾病，誘發(fā)機制相對復雜，累及范圍較廣，包括四肢小關(guān)節(jié)，具有進行性滑膜炎、小關(guān)節(jié)連續(xù)性滑膜炎、外周活動關(guān)節(jié)異常等特點，進而導致骨侵蝕、軟骨破壞，出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形[3]。臨床特征以纖維樣壞死區(qū)、滑膜炎等為主。我國RA的發(fā)病率約0.4%，在全球中占比0.5%～1.0%。雖然當前RA的誘發(fā)機制不明，但普遍認為，該病的發(fā)生與遺傳因素存在緊密聯(lián)系，同時與環(huán)境因素有關(guān)。相關(guān)研究顯示，機體免疫功能直接影響RA的發(fā)生、發(fā)展。

T細胞亞群在平穩(wěn)機體免疫功能中具有調(diào)節(jié)功效，特別是抑制性T細胞（Ts）與輔助性T細胞間（Th）的制約和協(xié)調(diào)，進而形成相應(yīng)的免疫應(yīng)答，不僅可以將異物抗原清除，而且不會對自身組織造成損傷[4]。T淋巴細胞表型異常可以將免疫性疾病患者免疫調(diào)節(jié)功能紊亂狀況清楚的反映出來。有關(guān)資料顯示，CD4+/CD8+平衡直接影響自身免疫性疾病的發(fā)展及發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+方面，觀察組更低，與對照組存在顯著差異（P＜0.05）；CD8+方面，觀察組較對照組高，差異明顯（P＜0.05）。由此可見，Th細胞數(shù)量逐漸減少，Ts細胞增加顯著，引起Ts細胞功能亢進，但Th輔助功能存在一定不足，導致T細胞免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)失衡，在一定程度上損傷細胞介導。同時，B細胞功能欠缺，造成B細胞分化，經(jīng)過增殖形成抗體，細胞功能逐漸減弱，導致外周血中B細胞顯著減少，免疫球蛋白表達受到影響，自身抗體分泌減少，最終誘發(fā)RA[5]。

CD4+影響T淋巴細胞的發(fā)育及成熟，能夠加快T淋巴細胞信號轉(zhuǎn)導及活化速度，在免疫應(yīng)答形成中具有重要作用[6]。若機體淋巴細胞CD4+表達異常，表示可能發(fā)生疾病。相關(guān)研究顯示，強直性脊柱炎患者關(guān)節(jié)腔滑液和外周血檢測過程中，能夠發(fā)現(xiàn)CD4+T淋巴細胞活化，同時，炎性因子分泌增加，進而推動了RA的發(fā)展[7]。RA患者的CD4+水平提高很可能會導致CD4+T淋巴細胞的活性增強，導致病情加重。

CD8+T淋巴細胞表達不足或者降低導致機體自身免疫功能降低，進而導致自身免疫性疾病的發(fā)生。關(guān)于CD8+T淋巴細胞在RA動物模型中的作用仍需進一步探討。CD8+T淋巴細胞欠缺的SCW大鼠模型可誘導早期RA的發(fā)生，增加RA患者的患病時間[8]。但CD8+T淋巴細胞欠缺的CIA老鼠模型中未見RA的誘導，由此分析，CD8+T淋巴細胞并未顯著影響RA。CD8+T淋巴細胞經(jīng)初始免疫刺激后才會影響疾病的進程，故在RA初始發(fā)生階段，CD8+T淋巴細胞并不具備顯著作用，但在RA效應(yīng)期間具有重要作用[9]。CD8+T淋巴細胞具有保護、免疫調(diào)節(jié)等功效。

淋巴細胞亞群CD4+/CD8+比例失衡極易引起自身免疫性疾病。有關(guān)資料顯示，對于RA患者而言，外周血CD4+T淋巴細胞占比明顯提高，CD8+有所降低，CD4+/CD8+比值顯著提高，故CD4+/CD8+比例失衡直接影響RA的發(fā)展及發(fā)生[10]。本研究中RA患者CD3+，CD4+，CD4+/CD8+較健康體檢者低，說明T淋巴細胞，特別是CD4+T淋巴細胞與RA的發(fā)展存在緊密聯(lián)系，CD4+/CD8+失衡在RA發(fā)展中尤為重要，同時影響病情嚴重程度。隨著疾病的進一步發(fā)展，CD4+/CD8+比值也表現(xiàn)為增加趨勢，故該項指標在判斷RA中具有重要作用。

總而言之，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+在RA的診斷和治療中具有重要作用，能夠?qū)⒒颊呒膊〕潭惹宄姆从吵鰜恚瑥亩谂R床醫(yī)師更好的判斷疾病，為臨床診治提供數(shù)據(jù)參考。