結(jié)核分枝桿菌蛋白芯片檢測診斷肺結(jié)核的價值 ①

江 卓，楊思偉，高 嶺

(1.鄭州市第六人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450000；2.焦作市人民醫(yī)院檢驗科，河南 焦作 454000)

肺結(jié)核是由結(jié)核分歧桿菌感染所致的嚴(yán)重疾病，是我國致死率最高的傳染性疾病，臨床防治形勢嚴(yán)峻。結(jié)核分枝桿菌是肺結(jié)核的病原體，可造成呼吸道感染，臨床可通過檢測結(jié)核分歧桿菌診斷肺結(jié)核，有助于為臨床干預(yù)、預(yù)防及預(yù)后評估提供詳細(xì)信息[1]。結(jié)核分歧桿菌檢測方法較多，其中采集痰標(biāo)本進(jìn)行抗酸檢查是實驗室常用方式，通過涂片采用顯微鏡檢查，可直觀觀察檢測結(jié)果，但其局限性在于診斷結(jié)果受主觀影響較大，且痰涂片制作過程中存在交叉感染風(fēng)險。蛋白芯片檢測是近年來新興檢測方案，穩(wěn)定性高，應(yīng)用于疾病診斷受到廣泛認(rèn)可。本研究選取鄭州市第六人民醫(yī)院肺結(jié)核患者為研究對象，旨在分析結(jié)核分枝桿菌蛋白芯片檢測的價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取鄭州市第六人民醫(yī)院2019-01～2020-02肺結(jié)核患者116例為研究對象，均經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)、X線檢查確診[2]，其中男67例，女49例；年齡34～59歲，平均(46.55±5.76)歲。另選取同期健康體檢者110例為參照，其中男65例，女45例；年齡32～58歲，平均(45.93±5.85)歲。肺結(jié)核患者與健康體檢者基線資料均衡可比(P>0.05)。

1.2 方法

(1)蛋白芯片檢測：采集空腹靜脈血4mL，離心提取血清，滴加試劑A 200μL于芯片盒窗口，注意完全浸濕膜表面，室溫留置1min后加入100μL待檢血清，并滴加試劑B 300μL，待試劑B滲入，滴加試劑C 500μL，試劑C滲入后滴加試劑D 300 μL，待反應(yīng)完畢，將校正光盤、芯片置入生物芯片識別儀，嚴(yán)格按照說明書步驟操作執(zhí)行；通過相應(yīng)軟件分析不同抗原點陣灰度值，結(jié)果≥臨界值為陽性。注意結(jié)核分歧桿菌存在特異性抗體3種，任一抗體檢測為陽性即可判定結(jié)果為陽性。(2)痰抗酸菌涂片鏡檢：于通風(fēng)量好處指導(dǎo)患者咳嗽，以高位叩擊法采集痰標(biāo)本3～5mL待檢；涂片選擇95%乙醇浸泡30min后進(jìn)行脫脂、干燥、清潔的載玻片制作，一側(cè)粘貼實驗室編號；采用折斷的竹簽毛挑取0.05～0.1mL膿樣、干酪樣痰液置于載玻片中央偏編號另一側(cè)2/3處，呈20mm×10mm橢圓形，痰面超聲進(jìn)行2h紫外線消毒后自然干燥；確認(rèn)痰涂片制作合格后進(jìn)行染色，將痰涂片置于染色架，注意涂片間距>1cm，烘烤固定后滴加染色液，注意覆蓋全部痰液范圍，加熱至有蒸汽后靜置5 min；采用蒸餾水沖洗染色液，滴加3%乙醇進(jìn)行3min脫色，重復(fù)多次；采用亞甲藍(lán)復(fù)染液進(jìn)行0.5～1 min染色，蒸餾水沖去復(fù)染液后靜置自然干燥；滴加鏡油預(yù)防交叉感染，進(jìn)行鏡檢，由鄭州市第六人民醫(yī)院經(jīng)驗豐富鏡檢人員進(jìn)行操作，結(jié)果根據(jù)萋尼氏染色鏡檢結(jié)果分級報告標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)統(tǒng)計蛋白芯片檢測、痰抗酸菌涂片鏡檢結(jié)果，包括準(zhǔn)確率、靈敏度、特異度、漏診率、誤診率。(2)統(tǒng)計蛋白芯片檢測肺結(jié)核患者不同肺結(jié)核抗體檢出率，包括血清抗脂阿拉伯甘露糖(LAM)、16KDa蛋白、38KDa蛋白抗體。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 診斷四格表

116例肺結(jié)核患者及110例健康體檢查，蛋白芯片檢測檢出陽性104例，痰抗酸菌涂片鏡檢檢出陽性85例。見表1。

表1 診斷四格表

2.2 診斷結(jié)果

蛋白芯片檢測診斷準(zhǔn)確率、靈敏度高于痰抗酸菌涂片鏡檢，漏診率低于痰抗酸菌涂片鏡檢(P<0.05)。見表2。

表2 兩種檢測方法診斷結(jié)果(n=226)

2.3 蛋白芯片檢測不同肺結(jié)核抗體檢出率

116例肺結(jié)核患者，經(jīng)蛋白芯片檢測，共檢出LAM 88例，檢出率為75.86%；檢出16KDa 3例，檢出率為2.59%；檢出38 KDa 82例，檢出率為70.69%。

3 討論

結(jié)核分歧桿菌感染可導(dǎo)致傳染性疾病，可發(fā)生于機(jī)體多個器官，其中肺結(jié)核臨床較常見。結(jié)核分歧桿菌感染后未必即刻發(fā)病，多在機(jī)體出現(xiàn)細(xì)胞介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)或免疫力降低后發(fā)病，患者群體以老年人、合并慢性呼吸道疾病、糖尿病患者居多。肺結(jié)核發(fā)病率較高，且近年來仍有上升趨勢，主要癥狀為低熱、乏力、盜汗、納差等，發(fā)病可急可緩，經(jīng)臨床合理治療后治愈率較高[3,4]。但由于肺結(jié)核發(fā)病隱匿，臨床癥狀無特異性，發(fā)病早期難以明確診斷，誤診、漏診率較高，延誤治療時機(jī)，不利于預(yù)后改善。因此，分析結(jié)核分歧桿菌檢測方法以提高肺結(jié)核診斷準(zhǔn)確率有重要臨床意義。

痰抗酸菌涂片鏡檢是既往臨床檢測常用方式，特異性較好，但由于痰液標(biāo)本采集、痰涂片制作及鏡檢過程中存在交叉感染風(fēng)險，降低診斷準(zhǔn)確率[5,6]。蛋白芯片檢測是近年來新興的檢測方式，具有敏感度高、穩(wěn)定性好的特點，在臨床應(yīng)用中逐漸廣泛。蛋白芯片檢測是以微孔濾膜為載體，通過微陣列技術(shù)固相結(jié)核分歧桿菌抗原于同一膜片，而微孔濾膜具有凝集、滲濾、濃縮作用，可促使抗原反應(yīng)快速進(jìn)行，從而進(jìn)行快速診斷[7,8]。吳敏等[9]研究證實，蛋白芯片檢測應(yīng)用乙型肝炎病毒抗體檢測具有較高價值，可快速判斷乙型肝炎病毒感染情況。本研究結(jié)果顯示，蛋白芯片檢測診斷準(zhǔn)確率、靈敏度高于痰抗酸菌涂片鏡檢，漏診率低于痰抗酸菌涂片鏡檢(P<0.05)，提示蛋白芯片檢測應(yīng)用于肺結(jié)核患者臨床診斷，可提高準(zhǔn)確率、靈敏度，降低漏診率。

LAM、16 KDa、38 KDa是結(jié)核分歧桿菌主要抗原，其中LAM主要分布于結(jié)核分歧桿菌細(xì)胞壁，可刺激感染者產(chǎn)生抗體；38 KDa是脂蛋白，16KDa是免疫診斷抗原，均與菌體表面或細(xì)胞膜脂肪結(jié)構(gòu)相連，而肺結(jié)核患者細(xì)胞免疫功能降低、體液免疫功能增強(qiáng)為主要特征[10]。本研究通過蛋白芯片檢測肺結(jié)核患者上述三種抗體，發(fā)現(xiàn)其檢出率分別為75.86%、2.59%、70.69%，表明蛋白芯片檢測有助于為臨床診斷提供詳細(xì)信息。同時，臨床可通過蛋白芯片檢測LAM、16 KDa、38 KDa結(jié)果調(diào)整用藥方案，在LAM、16 KDa、38 KDa指標(biāo)均為陽性時表明機(jī)體存在活動性結(jié)核分枝桿菌，臨床應(yīng)及時給予相關(guān)治療；而LAM、16 KDa、38 KDa水平明顯下降，則表明治療有效，且可評估患者預(yù)后。

綜上，結(jié)核分枝桿菌蛋白芯片檢測可提高肺結(jié)核患者診斷準(zhǔn)確率、靈敏度，降低漏診率，可為臨床提供抗體相關(guān)詳細(xì)信息，對臨床干預(yù)措施制定有參考價值。